苦参碱对人皮肤癌A431细胞增殖与细胞周期的影响

苦参碱对人皮肤癌A431细胞增殖与细胞周期的影响

李衎

黑龙江省哈尔滨市中医医院150076

摘要：目的：观察苦参碱对人皮肤癌A431细胞体外增殖、细胞周期的影响，探讨其对皮肤癌可能的作用机制。方法：MTT法检测苦参碱对人皮肤癌细胞增殖，流式细胞仪检测苦参碱对人皮肤癌细胞周期的影响。结果：苦参碱在0.5、0.75、1g/L浓度时均能明显抑制人皮肤癌A431细胞增殖，抑制率分别为13.35%、23.61%和41.47%，与对照组相比差异显著（P<0.01），IC50为1.21g/L。苦参碱0.5、0.75、1g/LG0/G1期细胞数量明显高于对照组，并呈浓度依赖关系。结论：苦参碱对人皮肤癌细胞有明显的生长抑制作用，且有剂量依赖关系；苦参碱可能是通过将人皮肤癌细胞周期阻滞在G0/G1期，抑制其增殖，发挥其抗皮肤癌作用。

关键词：苦参碱；人皮肤癌细胞；细胞增殖；细胞周期；凋亡

Effectsofmatrineoncellproliferation，cellcycleofhumanskincancercelllineA431

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofmatrineoncellproliferation，cellcycleandapoptosisrateofhumanskincancercelllineA431.MethodsMTTwasusedtomeasureinhibitoryeffectsofmatrineongrowthofA431cells，flowcytometrywasusedtoanalyzethecellcycleandapoptosisrate．Results：MatrinecanobviouslyinhibitedthegrowthofA431attheconcentrationof0.5，0.75and1g/L，andtheinhibitingrateswere13.35%、23.61%and41.47%，respectively，whichwasinadose-dependentmanner，andthereweresignificantdifferenceincomparisonwiththecontrolgroup（P<0.01）.IC50valuewas1.21g/L.ThenumberofA431cellsinG0/G1phaseofmatrinegroupsweresignificantlymorethanthatinthecontrolgroupandinaconcentration-dependentmanner.Conclusion：Matrinehadasignificantinhibitingeffectonhumanskincancercellsinanobviousdose-dependentmanner.MatrineinhibitedtheproliferationofthecellsbyblockingtheskincancercellcycletoG0/G1phase，anddevelopeditsanti-tumorfunctionbyinducinghumanA431cellsapoptosis.

Keywords：Matrine；humanskincancerA431cells；cellproliferation；cellcycle；apoptosis

引言

苦参系豆科植物苦参的干燥根。其含有多种生物碱，但主要为苦参碱和氧化苦参碱[1]。苦参碱具有抗病毒、抗心律失常、抗炎、抗肿瘤、抗纤维化等多种药理作用[2-5]，广泛应用于临床。本文针对苦参碱对人皮肤癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡作用的影响，探讨其对皮肤癌可能的作用机制。

1材料和方法

1.1材料人皮肤癌细胞株A431购自中科院上海细胞库。

1.2试剂苦参碱（西安东华生物工程有限公司），顺铂（浙江海正药业），RPMI1640培养基（美国GIBCO产品）；胎牛血清（杭州四季青）；MTT、PI染料、DMSO均购自Sigma公司，AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒购自北京鼎国生物技术公司。

1.3仪器自动酶标仪550（日本BIO-RAD公司）；倒置显徽镜（日本NIOKO公司）；CO2孵箱（日本株式会社）；流式细胞仪（美国Beckman公司）；凝胶成像系统GIS-2019（上海Tannon公司）。

1.2方法

1.2.1细胞培养人皮肤癌A431细胞在RPMI-1640培养基（含10%FBS及1%青霉素-链霉素）中，于37℃、5%CO2、100%湿度条件下传代培养，3～4d传代1次。

1.2.2MTT法检测苦参碱对人皮肤癌细胞增殖的作用

人皮肤癌A431细胞经0.25%胰酶消化，调整细胞密度为5×105/L，按每孔100μL接种到96孔板内，培养24h后加入不同浓度（0.5、0.75、1g/L）苦参碱，继续培养72h。弃上清，每孔加100μL0.5g/L的MTT，继续培养4h后，每孔加200μL的DMSO，振荡摇匀，用酶标仪检测OD490值。同时设阴性对照组和阳性对照组（顺铂组），每组设6个复孔，重复3次。计算细胞生长抑制率和半数抑制浓度（IC50）。

抑制率=（对照组平均OD值－加药组平均OD值）/对照组平均OD值×100%

1.2.2流式细胞术检测苦参碱对人皮肤癌细胞周期及凋亡率的影响

将对数生长期的A431细胞，以1×105/孔接种于6孔板中，随机分为对照组和实验组，实验组用苦参碱（0.5、0.75、1g/L）处理48h，胰酶消化收集细胞，用预冷的PBS缓冲液洗2次，1500r/min离心10min，预冷的75%乙醇固定，置于4℃冰箱过夜。次日用PBS洗2次，1500r/min离心10min，重悬于200μL的BindingBuffer中，加入10μL的AnnexinV-FITC后，室温避光15min。再加入PI染液避光染色30min，调整细胞浓度至1×109/L，流式细胞仪检测各细胞周期的百分比及细胞凋亡率。

1.2.3统计学分析

采用SPSS16.0统计软件进行数据分析，实验数据均以表示，采用方差分析及t检验。P<0.05，P<0.01为差异显著。

2结果

2.1苦参碱对人皮肤癌A431细胞增殖作用的影响

苦参碱组（0.5、0.75、1g/L）浓度组对人皮肤癌A431细胞的增殖有明显抑制作用（P<0.01），且存在剂量依赖关系，其抑制率分别为13.35%、23.61%和41.47%，IC50为1.21g/L。

3讨论

苦参碱是中药苦参的主要活性成分，具有抗炎、抗纤维化、抗肿瘤等多种药理活性。研究表明，苦参碱对多种肿瘤细胞（如白血病细胞、人神经母细胞瘤、肺腺癌细胞等）均有明显的杀伤作用[6-8]。其抗肿瘤作用机制主要有抑制肿瘤细胞增殖，诱导细胞分化、凋亡，抑制肿瘤新生血管形成，逆转肿瘤细胞多重耐药等[1]。

本实验结果表明，苦参碱对人皮肤癌A431细胞有明显地生长抑制作用，并且可通过诱导人皮肤癌细胞凋亡并将细胞阻滞在G0/G1期，使细胞不能进入S期进行DNA的合成，最终使瘤细胞的体外增殖受到抑制。

参考文献：

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