大肠埃希菌选择性培养基MUG在保健食品检验中的应用探讨

大肠埃希菌选择性培养基MUG在保健食品检验中的应用探讨

王鲁华

王鲁华（山东省青岛市药品检验所山东青岛266071）

【中图分类号】R155【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）33-0175-02

【摘要】目的探讨选择性培养基MUG在27批保健食品检验中的应用。方法采用人工接种大肠埃希菌试验菌株，用MUG选择性培养基对大肠埃希菌生长情况进行鉴定。结果检出率测定结果表明，MUG培养基对大肠埃希菌的检出率均达到100%。结论MUG(4-甲基伞形酮葡糖苷酸)培养基，可以应用于保健食品中大肠埃希菌的检验研究。

【关键词】保健食品选择性培养基MUG检出率

StudyonApplicationofSelectiveMediumMUGforE.coliinHealthFoodTests

【Abstract】Objective:DiscussionsonapplicationsofMUGin27batchesofhealthfoodtests.Methods:EscherichiacolistrainswereinoculatedartificiallyintoproductsandidentifiedusingMUG.Results:theresultsshowsthatpositivedetectionratesofE.colicanreachto100%byusingMUG.Conclusion:TheMUG(4-methyl-glucuronideUmbelliferonemedium)canbeusedinresearchesofE.colitestsinhealthfood.

【Keywords】healthfoodselectivemediumMUGdetectionrate

大肠埃希菌（EscherichiaColi）为肠肝菌科埃希氏菌属细菌，主要寄生在人和动物肠道内，随粪便排出体外，直接或间接污染土壤，饮水，食物和药品等。是常见的致病菌。大肠埃希菌除普通大肠埃希菌外尚有致病性大肠埃希菌，可引起婴幼儿，成人爆发性腹泻，口服药品规定必须检查大肠埃希菌。MUG(4-甲基伞形酮葡糖苷酸和靛基质试验检查大肠埃希菌是一项新技术其检验步骤为BL增菌培养后，转种MUG蛋白胨培养基，多数情况下不需要从混合菌中分离单个菌。MUG、靛基质（Indole）试验，同时为阳性或阴性即可报告结果。原理是利用目标菌限定酶作用的地物的水解产物，产生颜色或荧光反应作为指示系统来鉴定目标菌。实验证明96%的大肠埃希菌含β-葡糖苷酸酶（GUD），MUG被GUD水解产生荧光，由于荧光反应的敏感度较颜色反应强4万倍，易于观察，没有主观性。鉴于98%的大肠埃希菌其靛基质试验为阳性，故将MUG与靛基质试验结合[3]。本文用药品中检查大肠埃希菌选择性培养基MUG对保健食品9个品种，每个品种的3个批号,27个样品,进行了试验，并增加了方法学验证试验。证实了用药品中检查大肠埃希菌选择性培养基MUG对保健食品的检查也是可行的。结果得到了满意的效果。现将试验报告如下：

1试验材料

1.1样品

海参口服液，百合康牌芦荟软胶囊，百合康牌晚安软胶囊，百合康牌蒜油软胶囊，通便胶囊，爱利心牌蒜精片，泰立宁胶囊，健安平胶囊，维海松胶囊，每个品种均三批。

1.2培养基

营养琼脂培养基批号（20080418）青岛骏科生物有限公司，营养肉汤培养基批号（20081027）青岛骏科生物有限公司，胆盐乳糖培养基（BL）批号（110614）北京三药科技有限公司，0.85%氯化钠稀释液试剂批号（20050816）天津科密欧试剂有限公司，MUG培养基批号（110316）北京陆桥技术有限责任公司，曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB）批号（090918）北京陆桥技术有限责任公司，麦康凯琼脂培养基（MacC）批号（S103）日本制药株式会社。（以上培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力、回收率检查均符合要求）

1.3菌种

大肠埃希菌（EschorichiaColi）[CMCC(B)44102]由中国药品生物制品检定研究院提供。

菌种保藏中心（CMCC）获得的冷冻干燥菌种为第0代，试验选用第3代菌种。

2方法

2.1菌液制备

2.1.1取经35℃培养24h培养的大肠埃希菌的营养肉汤培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5～10-7之间备用。

2.1.2菌落计数分别取上述细菌菌液含10个～100个菌落形成单位数（cfu）加入培养皿，菌液做平行两皿，注入营养琼脂培养基15ml～20ml，放置35℃培养。

2.2检样供试品制备取样品25g，加至0.85%氯化钠稀释液225ml，用适宜方法使成1:10供试液[2]。

2.3大肠埃希菌检查验证确认方法

2.3.1验证确认方法取1:10供试液25ml,加到225ml胆盐乳糖培养基（BL）增菌液中。加入10cfu～100cfu试验菌，放置35℃培养。按相应大肠埃希菌检查法验证确认方法。

2.4供试品检查按验证方法同步进行。均未检出大肠埃希菌。

3结果

3.1大肠埃希菌方法确认，结果见表1，表2。

表１保健食品大肠埃希菌检查验证确认试验[3]（１:１０）

注：以上均为27)批样品加入试验菌的结果，检出率均为100%。

表2大肠埃希菌检查验证菌计数（cfu）

试验菌代数阳性菌数（cfu）平均菌数（cfu）

大肠埃希菌3576057.5

3.2保健食品在大肠埃希菌选择性培养基MUG中的确认，在保健食品中加入大肠埃希菌试验菌,含50个～100个菌落形成单位数（cfu）。培养后取培养物0.2ml接种至5ml大肠埃希菌选择性培养基MUG试管中，同时做阴性和阳性对照。放置35℃培养24小时。

3.2.1取上述24小时培养物做MUG试验，在366nm紫外光下观察，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。若管内培养物呈现荧光，为MUG阳性，不呈现荧光，为MUG阴性。观察后，沿培养基的管壁加入数滴靛基质试液，作靛基质试验，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性，呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。

3.2.2在保健食品中加入大肠埃希菌试验菌。此试验菌在曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)呈紫黑色，浅紫色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑湿润金属光泽。27批样品均与标准检验用培养基的生长情况均一致符合大肠埃希菌阳性菌落特征形态，检出率在100%[4]。

3.2.3在保健食品中加入大肠埃希菌试验菌。此试验菌在麦康凯琼脂培养基（MacC）呈鲜桃色和微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形、扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润。27批样品均与标准检验用培养基的生长情况均一致符合大肠埃希菌阳性菌落特征形态，检出率均在100%。

3.3在保健食品中加入大肠埃希菌试验菌生化试验I、M、V-P、试验结果呢均++--和-+--，均符合大肠埃希菌属特征。

3.4革兰染色呈革兰阴性短杆菌或球杆菌状。均符合大肠埃希菌阳性菌落特征形态。

4结论

通过对27批保健食品用大肠埃希菌选择性培养基MUG培养基的试验，观察其生长情况，并进行一些相应确证试验，确定采用胆盐乳糖培养基（BL）增菌，MUG培养基，靛基质试验用于检测保健食品也是可行的，药品、保健食品研究项目开展所用培养基在一定情况下是可借鉴使用的，省时省力，并且方法选择性好。为检验工作的拓展提供了一定的参考研究[5]。本文为药品检验用培养基大肠埃希菌选择性培养基MUG的广泛应用，为检验研究提供了一定技术资料。

参考文献

[1]中国药品生物制品检定所.中国药品检验总所编写.中国药品检验标准操作规范.2010年版[M].中国医药科技出版社，2010，9：364.

[2]中华人民共和国国家标准.食品卫生微生物学检验.GB/T4789.6-2003:41-46.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版）[S].二部附录：107-113.

[4]纪韶梅.微生物培养基质控与图解[M].北京：2007.1北京科学技术出版社，29-32.

[5]中华人民共和国国家标准.食品卫生微生物学检验.总则GB/T4789.1-2010.