柴胡皂贰d对肺纤维化小鼠血清SOD的影响及临床研究

柴胡皂贰d对肺纤维化小鼠血清SOD的影响及临床研究

黄洁潘超王旭

黄洁潘超王旭（镇江市江苏大学临床医学院江苏镇江212001)

【摘要】目的柴胡皂贰d(SSd)是中药柴胡的主要有效成分，本实验研究通过小鼠肺纤维化模型来观察血清SOD的含量，并探讨其作用机制.方法设立地塞米松（DXM）对照组，取肺组织行常规组织病理学观察，检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性并分析其临床意义.结果DXM组肺组织匀浆SOD含量升高有显著性差异.结论干预组对小鼠实验性肺纤维化具有明显的保护作用。

【关键词】柴胡皂贰d肺纤维化临床研究

特发性肺纤维化（idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF）是一种病因未明的以寻常型间质性肺炎为病理特征的肺间质性疾病，目前发病率呈上升趋势。肺纤维化是一个多因素、多步骤进行性的病变过程[1]。糖皮质激素是目前治疗肺纤维化的主要选择，本实验主要通过研究柴胡皂贰d对肺纤维化小鼠血清SOD的影响，论证SSd的治疗效果及研究其作用机制[2]。

1材料和方法

1.1动物分组6周龄雄性小鼠100只，由江苏大学动物实验中心提供，体重18-20g，在江苏大学附属江滨医院医学技术实验中心饲养一周，期间自由采食，术前6小时禁食不禁水。按随机数字表法随机分为5组:空白对照组(NC组)，地塞米松干预组(DXM组)，造模后1h,各组小鼠分别腹腔注射，每天一次，连续60天，DXM组追加注射5mgkg-1地塞米松0.1ml，连续60天。正常对照组同时间按同样方法注入等体积生理盐水[3]。

1.2仪器设备

WS17-2恒温水浴箱，U-2800紫外分光光度计BENCHMAR酶标仪(BIO～RAD)，BeckxnanJ-301高速冷冻离心机;RMZ128徕卡轮转式切片机、普通显微镜;医用手术刀、组织剪、眼科剪、止血钳、持针器、镊子等。

1.3实验方法

1.3.1实验原理超氧阴离子自由基(02-2)氧化经胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见分光光度计测其吸光度。被测样品含SOD时，对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的SOD活性。

1.3.2测定过程

(1)将配置好的10%组织匀浆上清用生理盐水按1:9稀释成1%组织匀浆

(2)取样本0.2ml加试剂0.2ml，漩涡混匀器充分混匀1分钟后，以3500一000转/分，离心15分钟，取上清进行Cuzn-SOD测定，此上清液即经过处理后的样本Mn-SOD活力丧失，而Cuzn-SOD活力不受影响。

(3)同时取生理盐水0.2ml加试剂七0.2ml，用漩涡混匀器充分混匀1分钟后，以以3500一000转/分，离心15分钟，取上清作Cuzn-SOD对照。

(4)混匀，室温放置10分钟，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水凋零。

1.3.3计算公式

1.4统计学方法

所有资料用均数标准差表示,统计学分析采用SPSS13.0统计软件包,多组间均数比较采用单因素方差分析,方差分析有显著差异时,进一步用q检验作两两比较。

2实验结果

2.1各组小鼠肺组织SOD含量变化

各组小鼠肺组织匀浆SOD含量变化，与NS对照组比较，BLM组第3天肺组织匀浆SOD即显著下降(P<0.01)，第7天达最低值，14天升高，第28天逐步恢复正常值;与BLM组对照，在第3天和第7天，DXM组、Ssd组及SSd+DXM组，肺组织匀浆SOD含量升高有显著性差异(P<0.05);SSd组和DXM组比较，肺组织匀浆SOD含量差异无统计学意义(P>0.05)。

3讨论

SOD能清除生物氧化过程中产生的超氧阴离子自由基，是有效清除活性氧的重要酶类之一，被称为生物体抗氧化系统的第一道防线。脂质过氧化反应是连接组织损伤与肺纤维化两个过程的纽带。SOD是体内重要的清除氧自由基的酶，它的活性增加，可消除氧自由基[4]。因此，SOD可以间接反映机体清除氧自由基的能力。

通常在实验研究中SO作为指标用来研究氧化抗氧化之间平衡关系。脂质过氧化物质可通过影响肺纤维化早期炎症反应、干扰细胞的结构及功能、增加脂质介质的产生从而影响胶原代谢而导致纤维化的形成，用抗氧化剂治疗能明显减少脂质过氧化反应，从而阻止纤维化的进展[5]。

在本试验中，对照组抗氧化作用强于正常组，SSd可能是通过改善氧化与抗氧化平衡，削弱炎症反应，减少炎症细胞的渗出，在肺纤维化形成的早期发挥作用[6]。目前大多数对中药抗氧化作用的研究还停留在对脂质过氧化反应终末期影响方面。对过氧化产物的病理还需作进一步深入的研究[7]。

参考文献

[1]何彦侠，辛建保.血管生成在肺纤维化发病机制中的意义[J1.国外医学呼吸系统分册，2004，24(51):42一44.

[2]郑金旭，张小燕，端礼荣，等.转化生长因子一印诱导A549细胞向间充质转化的作用研究[J].江苏大学学报(医学版)，2008，18(4):327一329.

[3]陈扬，陆铸今.纤溶酶原激活物抑制剂一1与肺损伤关系的研究进展[J1.国际儿科学杂志，2007，34(2):86一89.

[4]吴爱霞，蔡文侠，钱定良.肺纤维化患者LN、HA、PClll、cw检测的临床意义[J].全科医学临床与教育，2006，4(4):289.

[5]何燕，胡志峰，李平，等.柴胡皂普d抗肝纤维化大鼠脂质过氧化作用的研究[J]中国中药杂志，2008，33(s):915一919.

[6]王宝峰，程延安，党双锁，等.柴胡皂贰一d对鸡胚血管形成抑制作用的研究[J].中国中西医结合杂志，2009，29(5):425一429.

[7]赵颖，刘惠萍，吴大玮，等.吸入N一乙酸半肤氨酸对博来霉素致肺纤维化的实验干预[J].山东医药，2005，45(4):25一26.