高效液相法测定保心片中丹参酮ⅡA的含量

高效液相法测定保心片中丹参酮ⅡA的含量

肖文平王菊萍

肖文平王菊萍（黄冈师范学院化学与应用化学学院湖北黄冈438000）

【摘要】目的建立保心片的质量控制方法。方法采用HP-Agilent1100高效液相色谱仪,流动相为甲醇：水=85：15，检测波长为270nm，流速：1.0ml/min，柱温30℃。结果其主要成分丹参酮ⅡA浓度在0.018—0.08mg/ml(r=0.9975)范围内与峰面积呈良好线性关系。平均加样回收率为100.2%，RSD值为1.57%（n=5）。结论此条件下采用高效液相色谱法进行含量测定灵敏度好，精确率高。

【关键词】保心片质量研究高效液相色谱法丹参酮ⅡA

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）13-0323-01

保心片是一种中成药制剂，由三七、丹参、川芎、山楂、制何首乌、何首乌六味中药精制而成，具有活血化瘀、滋补肝肾之功效。该制剂为本校制药工程实验室自制制剂。目前市售的抗心绞痛中成药较多，大多数也都具有较完善的质量控制体系,但对保心片尚无完备的质量控制体系。笔者利用高效液相色谱法对其所含丹参酮ⅡA进行了含量测定，并以此作为质量控制指标。

1仪器与试药

HP-Agilent1100高效液相色谱仪；KQ-600DB型数控超声波清洗器；除高效液相色谱检测所用试剂为色谱纯，其它试剂均为分析纯；二次蒸馏水；丹参酮ⅡA对照品由中国生物制品检定所提供（批号0766–200703）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：KromasilC18（5m，4.6mm×250mm）,流动相为甲醇：水=85：15，检测波长为270nm，柱温30℃，流速：1.0ml/min，进样量:20μl[1,2]。理论塔板按丹参酮ⅡA计算，应不低于2000。

2.2溶液制备

2.2.1保心片（样品）溶液的制备

取100片保心片碾粹后装入250ml圆底烧瓶中，加入工业乙醇，用电热套加热回流提取两小时，提取三次，合并提取液，过滤，将滤液在旋转蒸发仪上浓缩至粘稠状，干燥，加少量甲醇溶解，转移至50ml锥形瓶中并定容至刻度。然后精密量取1ml加入到25ml棕色容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀放好作为样品溶液[3]。

2.2.2丹参酮ⅡA对照品溶液的制备

用分析天平准确称取丹参酮ⅡA对照品11.6mg，装入50ml棕色容量瓶中，加入甲醇并定容至50ml摇匀即得。

2.2.3阴性对照溶液的制备

按保心片处方比例，取除丹参外的其余药材，加适量工业乙醇提取三次，合并提取液，抽滤，浓缩并干燥，加入甲醇溶解，转入50ml锥形瓶中并定容至刻度。然后取1ml转入至25ml容量瓶中，加入甲醇定容至刻度并摇匀即得。

2.3阴性对照试验

分别对样品溶液，阴性对照溶液，丹参酮ⅡA对照品溶液进行进样20μl，结果表明在丹参酮ⅡA相同的保留时间除无干扰，色谱图如下：

A:丹参酮ⅡA对照品溶液B:样品溶液C:阴性对照溶液

2.4方法学考察

2.4.1线性关系考察

分别取50ml容量瓶中对照品溶液2，4，6，8，10ml,加入到25ml容量瓶中分别加入甲醇定容至刻度，摇匀放好。标号1，2，3，4，5。在上述实验条件下精密吸取5个瓶中的溶液20μl，分别进样。并记录峰面积。以峰面积(A)对溶液浓度（C）做线性方程，由图看其线性关系良好，回归方程为：A=4*107C-158191，R2=0.9975.丹参酮ⅡA在0.018—0.08mg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.4.2精密度试验

精密吸取丹参酮ⅡA对照品②号溶液20μl（0.03712mg/ml），分别进样5次，记录峰面积分别为1502451，1505682，1506296，1504822，1508845。结果峰面积的RSD值为0.3%

2.4.3稳定性试验

精密吸取样品溶液于0，2，4，6，8，10小时分别进样20μl，其峰面积值分别为1709543，1708630，1708543，1709272，1708741，1708952.结果表明供试品溶液在12小时内基本稳定，峰面积RSD值为0.5%。

2.4.4加样回收率试验

精密量取5份已知丹参酮ⅡA含量的样品溶液2ml，分别加入丹参酮ⅡA⑤对照品溶液（0.0928mg/ml），分别配制成50ml溶液，每次精密吸取20μl进样。结果见下表。

加样回收率试验结果(Theresultsofrecoveryexperiments)

2.5样品测定

取样品溶液分别进样五次，每次进样20μl，峰面积分别为2166580，2168065，2167679，2166995，2168554.RSD值为0.07%.其平均峰面积值为2167574.6，将其代入线性回归方程得样品得浓度为0.058144mg/ml.由此可计算出100片保心片中丹参酮ⅡA总质量为72.68mg.结果测定其保心片平均含量为每片约0.73mg。

3讨论

本法简洁，快速，精确度高，可作为保心片的质量控制方法。另丹参酮ⅡA对热、对光都有不稳定倾向，故在整个检测过程中，既要尽量避免光和热，还要尽快完成实验。

参考文献

[1]彭学莲等.高效液相色谱法测定复方葛根片中丹参酮ⅡA含量[J].药物鉴定2006.15（14）：15.

[2]蒋学华，许启荣，罗娟.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参酮ⅡA含量[J].华西药学杂志1996.11（2）：102.

[3]中华人民共和国药典（一部）[S].北京；化学工业出版社.2005.52.

[4]叶放，范宜涛.复方丹参软胶囊质量标准的研究.中国药品标准2002，3（6）45.

黄冈师范学院校级教改项目：药剂学实验课程教学模式的改革与创新（2010CI02）