结核杆菌涂片检查分析

结核杆菌涂片检查分析

于德水

于德水

（黑龙江省大庆市中医医院检验科163311）

【摘要】目的探讨结核杆菌涂片检查方法与意义。方法对50份结核杆菌涂片检查方法进行分析。结果对结核杆菌涂片检出抗酸菌者检查为涂阳患者即判定为结核病标下菌阳性。结论直接涂片法操作简单，易于掌握，设备要求也不高，在结核病防治中居重要位置。

【关键词】结核杆菌涂片检查方法

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）33-0028-02

结核杆菌是结核病的病原菌，消灭结核菌即可彻底扑灭结核病的流行。在结核病中以肺结核病为多见。结核病细菌学检查主要是查痰[1]。痰结核菌检查已成为当代结核病流行病学、结核病诊断、确定化疗方案以及评价治疗效果的重要手段，研究及掌握结核病控制中痰结核菌检查结果及其各种变化，正确解释并合理应用痰菌检查技术，是提高结核病控制质量必不可少的基础知识。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2013年1月～2014年6月门诊就诊行痰涂片检查结核杆菌的肺结核患者50份，取其痰液作为标本，行痰涂片检查结核杆菌。

1.2方法

1.2.1标本采取以晨起咳出者为佳，清水漱口后，用力咳嗽以获得呼吸道或由空洞排出的痰液，其量约3～5ml，若咳痰极少，亦可留取24h的标本，或用3％～10％的高渗盐水雾化吸入，或口服氯化胺促使咳痰，有条件的地方，可通过支气管镜吸取下呼吸道的分泌物，或钳取活体组织，鼻咽排泄物，唾液不应当作痰。证实由支气管来的痰可靠的依据：一有炎性细胞；二有纤毛的支气管上皮细胞。

1.2.2检查方法

1.2.2.1直接涂片法用于齐-尼染色的涂片制备法：用折断的竹签毛茬端挑取干酪样或脓性痰部分0.05～0.1ml，涂于载物玻片右2/3处，均匀涂抹2.0cm×2.5cm大小的卵圆形痰膜，待自然干燥，微火焰固定，染色镜检，载物玻片应清洁无划痕，一次性使用，每张玻片只涂一份标本。用于荧光染色的涂片制备法：以白金耳或竹签挑选干酪样、脓性或有颗粒部分痰，均匀涂布于载玻片上，使成适当的厚度(痰液0.05ml)之涂片，待自然干燥后，放火焰上固定，作荧光染色。

1.2.2.2集菌涂片法漂浮集菌法：取晨痰或12～24h痰液经121℃高压灭菌15min，待冷后，取5～10ml盛于体积为100ml的玻璃容器中(口径约2cm)，加灭菌蒸馏水20～30ml，总体积勿超过容器的1/3，加二甲苯0.3ml，放入振荡器振荡10min，取出，加蒸馏水至满瓶口，将已编号的载物玻片盖于瓶口上，静置20min，取下载玻片，自然干燥，火焰固定，染色镜检。

1.2.2.3染色方法

1.2.2.3.1齐-尼(Ziehl-Neelsen)抗酸染色法染色液，染色剂，碱性复红乙醇贮存液(碱性复红8g，溶于95％乙醇100ml中)10ml，加入5％石炭酸水溶液90ml混匀。脱色剂5％盐酸乙醇液(浓盐酸5ml加95％乙醇95ml混匀)即为贮存母液，使用时10倍稀释。复色剂亚甲蓝0.3g加95％乙醇50ml待溶解后，加蒸馏水至100ml，混匀即为贮存母液，使用时10倍稀释。染色步骤:将已用火焰固定的涂片上滴加染色剂，加热至出现蒸气(勿沸)3min，必要时可再续加染色剂，以免干涸[2]。待冷却后，水洗。加脱色剂，脱至无红色为止，但不可超过10min，水洗。加复染剂经0.5min，水洗，集菌涂片法复染1～3min，水洗，待自然干燥后，油浸镜检。镜检与报告方式，在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其他细菌和细胞呈蓝色。显微镜物镜100×所见结果按下列标准报告：齐-尼染色抗酸杆菌阴性(－)：0条//300视野；齐-尼染色抗酸杆菌可疑(±)：1～2条/300视野；齐-尼染色抗酸杆菌(1＋)：3～9条/300视野；齐-尼染色抗酸杆菌(2+)：1～9条/10视野；齐-尼染色抗酸杆菌(3＋)：1～9条/每视野；齐-尼染色抗酸杆菌(4+)：≥10条/每视野。

1.2.2.3.2荧光染色法染色液，染色剂金胺“0”0.1g溶于95％乙醇10ml内，加5％石炭酸90ml。脱色剂：3％盐酸乙醇溶液。复色剂0.5％高锰酸钾水溶液。染色步骤，痰涂片经火焰固定后加染色剂10～15min，水洗。加脱色剂1～2min至无黄色，水洗。加复染剂1～2min，水洗，待干镜检。镜检与报告方式：在暗色背景下，抗酸杆菌呈黄绿色或橙色荧光，必须用40×物镜确认菌体形态，应具有齐+尼抗酸染色镜检经验后方可应用荧光染色法，注意勿过读或漏判。荧光染色后涂片应在24小时内检查，遇需隔夜时，置4℃条件下保存，次日完成镜检。物镜20×检查结果按下列标准报告：荧光染色抗酸杆菌阴性(－)：0条/50视野；荧光染色抗酸杆菌可疑(±)：1～3条/50视野；荧光染色抗酸杆菌(1＋)：10～99条/50视野；荧光染色抗酸杆菌(2+)：1～9条/每视野；荧光染色抗酸杆菌(3＋)：10～99条/每视野；荧光染色抗酸杆菌(4+)：≥100条/每视野。物镜40×检查细菌细胞形态。

2结果

对结核杆菌涂片检出抗酸菌者检查为涂阳患者即判定为结核病标下菌阳性。

3讨论

涂片检查法质量控制应建立室内、室间痰片检查质量控制制度室内质控应包括痰标本的留取，痰徐片染色和镜检结果复验。室内质控应每季度进行一次，痰涂片应保存，供上一级参比实验室质量控制检查。室间质控可定期进行。假阴性率不大于2%，(1+)以上的阳性片复验时不允许存在假阴性。载物玻片必须清洁无油污，用蓝或黑色记号笔，玻片铅笔在玻片背面编号。痰涂片染色后不得有肉眼可见的红色斑块(荧光染色为黄色斑块)，痰膜脱落片在10％以下，高倍镜下每个视野的痰细胞不应于10个，经酸、碱处理标本不宜作荧光染色[3]。查痰在控制结核病工作中是不可缺少的重要项目，而且必须做好。直接涂片法操作简单，易于掌握，设备要求也不高，在结核病防治中居重要位置。结核病人的管理应以涂片阳性病人为重点。标本的含菌量与病变性质有密切关系，细菌的数量在不同性质病变中有非常大的差异，一个中等大和支气管相通的新鲜空洞病变，含菌量约为102个以上，而同样大小的包裹性结节病变中的细菌可能少于102个。肺内病变的含菌量越多，痰内发现细菌的机会越多，所以，痰涂片镜检成为寻觅结核病传染源的直接手段，是对肺结核诊断及结核病传染源的发现具有极其重要的意义。

参考文献

[1]?刘志辉，罗一鲁，等.结核病实验诊断现状及展望[J].中国防痨杂志.2003.25（1）：38-41.

[2]胡忠义.结核分支杆菌耐药性快速测定方法及其评价[J].中华结核和呼吸杂志.2003.26（2）：107-109.

[3]胡君.2024份痰液标本行痰涂片检查结核杆菌结果分析[J].内蒙古中医药.2014.(5)：80-81.