探究ＨＰＬＣ法测定米氮平片中米氮平的含量

探究ＨＰＬＣ法测定米氮平片中米氮平的含量

于荣王雷

于荣王雷

（山西省心血管病医院药剂科山西太原０３００２４）

【中图分类号】Ｒ２８６【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１４）０９

【摘要】目的：建立测定米氮平片中米氮平含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Ｋｒｏｍａｉｌ－Ｃ１８柱，流动相为甲醇－四氢呋喃－乙腈－四甲基氢氧化铵缓冲溶液（１２．５：７．５：１５：６５，Ｖ／Ｖ），流速为１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长为２９０ｎｍ，柱温３０℃。结果：米氮平质量浓度在０．０５００ｍｇ／ｍｌ～１．０００７ｍｇ／ｍｌ范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９９）；精密度、稳定性、重复性试验的ＲＳＤ均≤０．２０％；平均回收率为１００．４％，ＲＳＤ＝０．２８％（ｎ＝９）。结论：该法专属性强、灵敏度高、简便易行、结果准确，适用于米氮平片中米氮平的含量测定。

【关键词】米氮平片剂；含量测定；高效液相色谱法

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅｉｎｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅｔａｂｌｅｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｗａｓａｄｏｐｔｅｄ．ＴｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎＫｒｏｍａｉｌ－Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆｍｅｔｈａｎｏｌ－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｈｙｄｒｏｘｉｄｅｐｅｎｔａｈｙｄｒａｔｅｏｆｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ（１２．５：７．５：１５：６５，Ｖ／Ｖ）ａｔｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１．０ｍｌ／ｍｉｎ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２９０ｎｍａｎｄｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０℃．ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅｗａｓ０．０５００－１．０００７ｍｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９９９）ｗｉｔｈａｎａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆ１００．４％（ＲＳＤ＝０．２８％，ｎ＝９）．ＲＳＤｓｏｆｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙｔｅｓｔｓｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎａｎｄｅｑｕａｌｔｏ０．２０％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮＳ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓｓｐｅｃｉｆｉｃ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＭｉｒｔａｚａｐｉｎｅｉｎＭｉｒｔａｚａｐｉｎｅｔａｂｌｅｔｓ．

【ＫｅｙＷｏｒｄｓ】ＭｉｒｔａｚａｐｉｎｅＴａｂｌｅｔｓ；Ｃｏｎｔｅｎｔｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ

现代医学认为抑郁症的发病与遗传因素、神经递质、躯体、心理和性别等因素有关［１］。近年来，新型抗抑郁药物不断出现并被应用于临床，它们的疗效好、副作用小、不良反应轻微，对抑郁症的治疗发挥了较为积极的作用［２］。米氮平又名米塔扎平（ｍｉｒｔａｚａｐｉｎｅ），属哌嗪氮？类衍生物，具有抗抑郁、抗焦虑及镇静作用，属新型抗抑郁药［３］。米氮平为ＮＥ能和特异性的５－ＨＴ能抗抑郁药，目前在国内主要用于治疗抑郁症、女性更年期情绪障碍、青少年情绪障碍、功能性消化不良、躯体疾病伴发情绪障碍灯［４］。该药现行标准有两种含量测定方法：ＨＰＬＣ［５］、ＵＶ［６－７］。参照美国药典３５版［８］及英国药典２０１３年版［９］此品种项下含量测定方法，在现有米氮平片标准中采用的ＨＰＬＣ法基础上进行色谱条件优化，以甲醇－四氢呋喃－乙腈－四甲基氢氧化铵缓冲溶液（１２．５：７．５：１５：６５）为流动相，建立了改进的米氮平片的ＨＰＬＣ含量测定方法，并将该方法测定结果与原标准所用ＨＰＬＣ法和ＵＶ法测定结果进行了比较，现报道如下。

１材料

Ｗａｔｅｒｓ２６９５高效液相色谱仪（美国Ｗａｔｅｒｓ）；ＨＰ１１００高效液相色谱仪（美国惠普）；ＵＶ－２４５０紫外可见分光光度计（日本岛津）；梅特勒ＸＳ－１０５电子天平（梅特勒－托利多）；梅特勒ＡＬ２０４电子天平（梅特勒－托利多）。

米氮平对照品（美国，批号Ｇ０Ｇ１４５，９９．９％）；米氮平片（Ａ企业，批号１１０５１６０９；Ｂ企业，批号１１０２０２；Ｃ企业，批号１１０６０１、１１０６０２、１１０６０３）；四甲基氢氧化铵２５％（批号：２０１１０７１７，天津市光复精细化工研究所，分析纯）；甲醇、乙腈、四氢呋喃均为色谱级，磷酸为分析纯、水为重蒸馏水。

２方法与结果

２．１色谱条件与系统适用性

色谱柱：Ｋｒｏｍａｉｌ－Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－四氢呋喃－乙腈－四甲基氢氧化铵缓冲溶液（称取３６．０ｇ四甲基氢氧化铵于２０００ｍｌ量瓶中，加水１９００ｍｌ，振摇，用磷酸调节ｐＨ值至７．４，用水稀释至刻度，混匀。）（１２．５：７．５：１５：６５，Ｖ／Ｖ）；流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长：２９０ｎｍ，柱温：３０℃；进样量：１０μｌ。系统适用性试验结果表明，该色谱条件下主峰与杂质峰的分离度大于１．５，米氮平峰的拖尾因子小于２．０，理论板数按米氮平峰计算为５８００。

２．２溶液的制备

２．２．１对照品溶液的制备

取米氮平对照品适量，精密称定，加溶剂（水－乙腈５０：５０，Ｖ／Ｖ）制成每１ｍｌ中约含米氮平０．３ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。

２．２．２供试品溶液的制备

精密称取样品细粉适量（约相当于米氮平１５ｍｇ），置５０ｍｌ量瓶中，用溶剂（水－乙腈５０：５０，Ｖ／Ｖ）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

２．２．３阴性对照溶液的制备

根据米氮平片的处方，取除米氮平以外的空白辅料，按“２．２．２”项下方法进行制备，即得。

２．３专属性试验

取阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液各１０μｌ，分别注入ＨＰＬＣ仪，记录色谱图，观察阴性对照在２９０ｎｍ检测波长下对米氮平主峰测定是否有干扰。结果表明，空白辅料不干扰米氮平含量测定，详见图１。

２．４线性关系考察

精密称取米氮平对照品适量，用溶剂（水－乙腈５０：５０，Ｖ／Ｖ）溶解并稀释成０．０５００、０．１００１、０．３００２、０．５００４、０．８００６、１．０００７ｍｇ／ｍｌ的系列对照品溶液，精密量取１０μｌ，注入液相色谱仪，按“２．１”项下色谱条件进样分析。以质量浓度为横坐标（ｘ，ｍｇ／ｍｌ），以峰面积（ｙ）为纵坐标进行线性回归，得回归方程ｙ＝１．１２５５Ｅ＋０４ｘ＋０．３７５１，相关系数ｒ＝０．９９９９。

结果表明，米氮平检测质量浓度在０．０５００～１．０００７ｍｇ／ｍｌ范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

２．５精密度试验

精密量取“２．２．１”项下对照品溶液适量，连续进样６次，测定。结果，ＲＳＤ为０．１１％，表明该方法精密度良好。

２．６稳定性试验

取“２．２．２”项下供试品溶液，在室温下放置０、２、４、６、８小时后进样测定，计算其ＲＳＤ为０．２０％（ｎ＝５），结果表明供试品溶液在８小时内稳定。

２．７重复性试验

取同一批号（Ｂ企业，批号１１０２１２）的米氮平片，按“２．２．２”项下方法制备供试品溶液６份，进样测定。结果，ＲＳＤ为０．２０％（ｎ＝６），表明本方法重复性良好。

２．８回收率试验

按米氮平片处方比例及其制备方法，精密称取米氮平对照品制成相当于标示含量８０％、１００％、１２０％的模拟样品，按“２．２．２”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果见表１。

２．９样品含量测定

取各批次米氮平片，按“２．２．２”项下方法制备供试品溶液，按“２．１”项下色谱条件进样测定，同时按照原标准方法测定各批次米氮平片含量，进行对比，结果见表２。

３讨论

３．１检测波长的选择

取米氮平对照品适量，加溶剂（水－乙腈５０：５０，Ｖ／Ｖ）制成每１ｍｌ中约含米氮平０．３ｍｇ的溶液，按紫外－可见分光光度法，在２００～４００ｎｍ波长范围内进行扫描，米氮平在２９０ｎｍ波长处有最大吸收，故选择２９０ｎｍ为测定波长。

３．２流动相的选择

参照国家药品标准ＹＢＨ１０８０２００６含量测定项下以０．０５ｍｏｌ／ｍｌ磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾６．８ｇ，加水１０００ｍｌ使溶解，调ｐＨ值为４．６）－乙腈（６５：３５）为流动相，米氮平主峰保留时间为９．１ｍｉｎ，峰形较差，且测定样品结果重复性差。以甲醇－四氢呋喃－乙腈－四甲基氢氧化铵缓冲溶液为流动相，峰形和分离度都很满意，故采用上述流动相进行测定。

３．３空白辅料的影响

试验同时采用ＨＰＬＣ法和ＵＶ法测定样品含量，从样品含量测定结果可见，ＵＶ法测得含量结果均高于ＨＰＬＣ法测得含量结果（约高３％），通过同法做阴性干扰试验，空白辅料在２９０ｎｍ波长处有吸收，对米氮平片含量测定结果有干扰（约为２．６％）。故采用专属性较高的ＨＰＬＣ法测定米氮平片中主药的含量结果更准确。

综上所述，对米氮平含量测定方法的专属性、线性关系、精密度、稳定性、回收率及与ＵＶ方法对比研究结果表明，该分析方法专属性强、灵敏度高、简便易行、结果准确，适用于米氮平片中主药的含量测定。

参考文献

［１］黄洪勇，王金宝，李恒芬，等．ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定人血浆中米氮平的浓度［Ｊ］．中国药房，２０１０，２１（２２）：２０５８．

［２］谢明华，许毅．回忆疗法联合米氮平治疗老年抑郁症４０例［Ｊ］．中国老年学杂志，２０１３，３３（１２）：２９３７．

［３］高彦慧，赵桂森，陈萍，等．ＨＰＬＣ法测定米氮平的含量及其有关物质［Ｊ］．山东大学学报（医学版），２００４，４２（６）：７４３．

［４］王志彬，姚鹏，兰培丽，等．米氮平联合普瑞巴林治疗带状疱疹后神经痛的疗效观察［Ｊ］．２０１３，１６（６）：４９５．

［５］国家食品药品监督管理局．国家药品标准［Ｓ］．ＹＢＨ１０８０２００６．

［６］国家食品药品监督管理局．国家药品标准［Ｓ］．ＹＢＨ０３７０２０１０．

［７］国家食品药品监督管理局．国家药品标准［Ｓ］．ＹＢＨ０２１２２００８．

［８］ＵｎｉｔｅｄＳｔａｔｅｓＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎ．ＵＳＰ３５－ＮＦ３０［Ｓ］．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：ＵｎｉｔｅｄＢｏｏｋＰｒｅｓｓ，２０１２：３９３３－３９３４．

［９］ＢｒｉｔｉｓｈＰｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ．ＢＰ：２０１３［Ｓ］．Ｌｏｎｄｏｎ：ＴｈｅＳｔａｔｉｏｎａｒｙＯｆｆｉｃｅ，２０１３：３１７７－３１７９．