乳腺浸润性导管癌组织HER2基因的FISH检测

乳腺浸润性导管癌组织HER2基因的FISH检测

周冬梅何银珠林娜

周冬梅何银珠林娜(福建省肿瘤医院病理科福建福州350014)

【摘要】目的探讨荧光原位杂交(FISH)在乳腺浸润性导管癌组织HER2基因检测中的应用。方法分别采用免疫组化（IHC）、FISH方法对117例乳腺浸润性导管癌组织的HER2基因进行检测。结果IHC-、1+、2+、3+与FISH结果符合率分为100%、2.9%、25%、90.3%。结论FISH是一种准确可靠的HER2基因检测方法。

【关键词】乳腺浸润性导管癌HER2免疫组化荧光原位杂交

【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）27-0126-02

【Abstract】ObjectiveToexploretheapplicationvalueofFluorescenceinsituhybridization(FISH)inthedetectionofHER2geneexpressionofinvasivebreastcarcinomatissues.MethodsIHCandFISHwasusedforHER2geneexpressionof100cases,respectively.ResultsTheaccordantrateofHER2genebetweenIHC-、1+、2+、3+andFISHis100%、2.9%、25%、90.3%,respectively.ConclusionFISHisanaccurateanddependabledetectionmethodsofHER2gene.

【Keywords】InvasivebreastcarcinomaHER2IHCFISH

乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤，靶向治疗的出现给HER2阳性、或有转移、或对放化疗无效的乳腺癌患者带来了福音。人类表皮生长因子受体（HER2）是一具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，激活后可传导致分裂信号，抑制凋亡，促肿瘤血管生成，增加肿瘤细胞侵袭力等。研究表明，乳腺浸润性导管癌中有20-30%都有HER2过表达[1]。这类患者复发转移早，预后不佳，对常规治疗效果差，但却是赫赛汀治疗的靶点人群。因此探讨HER2检测方法的准确性是十分必要的。本文对117例乳腺癌HER2基因的IHC、FISH检测结果进行回顾分析。

1材料与方法

研究对象为2008年10月-2010年10月在福建省肿瘤医院就诊的117例乳腺浸润性导管癌病例。HER2抗体购自罗氏公司，FISH试剂盒购自北京金菩嘉公司。

IHC步骤:石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化后，置于枸橼酸钠修复液（0.01mol/L，pH6.0）中，高压锅加热进行抗原修复。加入3%（体积分数）过氧化氢溶液10min以消除内源性过氧化物酶活性。切片滴加即用型一抗，4℃冰箱过夜。加通用二抗（PV9000Immuno-Bridge，美国GBI公司），37℃水浴30min。用新鲜配制的二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色液显色。以PBS代替一抗作为阴性对照，以几种抗体蛋白表达阳性的组织作为阳性对照。

HER2FISH检测步骤：切片常规二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，酸性亚硫酸钠处理，蛋白酶消化，盐酸浸泡，梯度酒精脱水，丙酮固定，60℃烤片2小时，加10µl探针工作液于组织切片上，73℃变性5min后于原位杂交仪中杂交，42湿盒中杂交过夜16H，50%甲酰胺、柠檬酸缓冲液、0.1%NP-40和70%乙醇漂洗，暗处自然干燥玻片，DAPI复染、封片。暗处放置20min后在荧光显微镜下观察。

结果判断：IHC结果分为—、+、++、+++。“—”指乳腺浸润性导管癌组织中有<10%的癌细胞有胞膜着色或无癌细胞胞膜着色；“+”指有任何比例的癌细胞胞膜不完整着色；“++”指>10%的癌细胞有胞膜弱到中等强度的完整着色；“+++”指>30%的癌细胞有胞膜强且完整的着色。

FISH结果分为有扩增、交界、无扩增。“有扩增”指乳腺浸润性导管癌组织中随机计数30个癌细胞核中红绿信号比值>2.2;“交界”指乳腺浸润性导管癌组织中随机计数30个癌细胞核中红绿信号比值为1.8-2.2;“无扩增”指乳腺浸润性导管癌组织中随机计数30个癌细胞核中红绿信号比值<1.8。

2结果

117例标本IHC-（15例）、1+（35例）、2+（36例）、3+（31例）与FISH符合率分为100%（15/15）、2.9%（1/35）、25%（9/36）、90.3%（28/31）。

图1HER2基因的FISH检测A扩增；B交界；C无扩增

3讨论

原癌基因HER2也称CerbB2基因，定位于染色体17q21，是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，激活后可传导致分裂信号，抑制凋亡，促肿瘤血管生成，增加肿瘤细胞侵袭力等。乳腺癌HER2基因作为乳腺癌的独立预后指标对预后评价及治疗方案的选择具有重要价值，因此HER2检测在乳腺癌临床治疗中已成常规。HER2基因状态的准确检测可以避免HER2假阳性患者接受不必要或是过度的治疗，而假阴性患者却错失了治疗机会。研究表明[2]免疫组化因蛋白质在标本固定中易被破坏、判断标准不同且主观差异大等原因，其准确性有局限性，但因为其经济、简便、易开展，故不失为一适宜各层次医疗水平的初筛方法。据报道免疫组化阳性但HER2基因无扩增者大多为17号染色体多倍体所致，而免疫组化阴性但HER2基因扩增者可能是蛋白质降解所致。基于IHC检测存在较高的假阳性率及假阴性率，治疗前进行HER2基因检测是必要的。FISH所用荧光染料标记探针包含了HER2及17号染色体着丝粒探针，校正了非整倍体造成的实验误差，因此被公认为HER2基因检测的金标准。有文献结果[3]表明HER2IHC-、1+、2+、3+与FISH结果符合率分为100%、7.4%、23.3%、91.7%。与本实验结果（IHC-、1+、2+、3+与FISH结果符合率分为100%、2.9%、25%、90.3%）相仿，说明本文结果是可靠的。当然因为FISH对实验设备及判读人员的素质要求较高而难以普及，故基层医院可建议患者尤其是HER2检测结果不确定（即IHC2+）的患者到上级医院作FISH检测。

参考文献

[1]郭华雄，邓明凤，陈登峰,等.FISH和IHC检测HER2基因及蛋白在乳腺癌诊治中的应用.中国组织化学与细胞化学杂志,2010,19(4):353-355.

[2]连靖，王全红，李丽,等.IHC、FISH与CISH.检测乳腺癌HER2基因状态的研究.肿瘤研究与临床,2008,20(12):816-819.

[3]王晓兰，姚凡，刘楠,等.FISH在乳腺癌组织HER2/neu原癌基因检测上的应用及临床意义的研究.中国医科大学学报,2008,37(5):664-666.