Ｍ与β－ｃａｔｅｎｉｎ在喉鳞状细胞癌中的表达及其相关性研究

Ｍ与β－ｃａｔｅｎｉｎ在喉鳞状细胞癌中的表达及其相关性研究

刘端端马瑞霞郭宏庆

刘端端马瑞霞郭宏庆（宁夏医科大学总院宁夏银川７５０００４）

【中图分类号】Ｒ７３９．６【文献标识码】Ａ【文章编号】１５５０－１８６８（２０１４）１１

【摘要】目的为了检测粘蛋白１（Ｍｕｃｉｎ１，Ｍｕｃ１）与β－连蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）在喉鳞状细胞癌中的表达，并探讨其在喉癌发病机制中的意义。方法应用免疫组化ｓｐ法检测５４例患有喉鳞状细胞癌患者的癌组织以及自身癌旁正常组织，并应用相同的检测方法来检测３７例患有喉良性肿瘤患者中ＭｕＣ１与β－ｃａｔｅｎｉｎ基因的表达情况，并进一步将二者表达情况进行统计分析。结果ＭｕＣ１和β－ｃａｔｅｎｉｎ二者在喉鳞状细胞癌中表达率分别为４４．４％与６４．８％，与自身癌旁正常组织和喉良性肿瘤表达率相比较，均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；（２）Ｍｕｃｌ与β－ｃａｔｅｎｉｎ基因的表达成正相关，ｒ＝０．６２，Ｐ＜０．００１。结论Ｍｕｃｌ与β－ｃａｔｅｎｉｎ基因在喉鳞癌细胞中均高表达，且呈正相关，提示其对喉癌发生与发展可能具有一定的促进作用。

【关键词】粘蛋白１；β－连蛋白；喉鳞状细胞癌喉鳞状细胞癌是发生在头颈部常见的原发性恶性肿瘤，现在由于各种因素的影响，其发病率均有升高［１］。喉鳞状细胞癌侵袭与转移是造成其预后差的最重要原因，那么，研究其侵袭转移的作用机制显得尤为重要。Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路是侵袭转移机制的经典研究方法，而β－连蛋自是Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ的关键蛋白［２］。β－连蛋白（β－ｃａｔｅｎｉｎ）是连蛋白的一种亚型，也参与细胞粘附作用。当β－ｃａｔｅｎｉｎ达到一定浓度时，开启ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路，激活下游癌基因过度表达，就会导致肿瘤的发生［３］。粘蛋白１（Ｍｕｃｉｎ１，Ｍｕｃ１）在正常情况下，在腺上皮近管腔面的顶端表达，肿瘤细胞中其表达发生变化，使粘附作用减弱，促进癌细胞转移［４－５］。本文通过检测Ｍｕｃ１与β－ｃａｔｅｎｉｎ基因在喉鳞状细胞癌中的表达，探讨其对喉癌发病机制中的意义。１材料与方法１．１材料收集２０１０－２０１４年宁夏医科大学总院手术切除的喉鳞状细胞癌组织（术前均未进行过任何化疗、放疗，术中病理诊断为喉鳞状细胞癌）标本共５４例，同时取癌旁正常组织进行对照。另取同时期同年龄段、经术中病理诊断为喉部良性肿瘤标本３７例患者。１．２方法应用免疫组化ＳＰ法检测Ｍｕｃ１、β－ｃａｔｅｎｉｎ基因的表达情况，并进一步将二者表达情况进行统计分析。１．３步骤将新鲜的组织标本立即经１０％甲醛固定、常规脱水后石蜡包埋、进行切片。将石蜡包埋的组织切片在６５－６８℃烤箱内进行烘干，３小时后取出。

将组织切片放入二甲苯１、二甲苯２、二甲苯３中各脱蜡１０分钟，再放入１００％乙醇、９０％乙醇、８０％乙醇、７０％乙醇中进行梯度水化，纯水中漂去酒精，用ＰＢＳ液冲洗３次，每次３分钟，进行热修复，放入３％Ｈ２Ｏ２１０分钟，用ＰＢＳ液冲洗３次，每次３分钟，加入蛋白阻断剂后，进行一抗孵育，４℃冰箱过夜。第二天在３７℃烤箱内复温１小时，用ＰＢＳ液冲洗３次，每次３分钟，加入山羊血清后再用ＰＢＳ液冲洗，加入二抗３０分钟，ＰＢＳ液冲洗后加入ＤＡＢ显色剂，显微镜下观察显色后放入纯水中，放入苏木精染缸中染色，纯水中清洗，封闭液封闭后用中性树胶封片，自然风干后贴上标签。１．４染色结果阳性判断依据β－ｃａｔｅｎｉｎ免疫组化的染色结果参照Ｍａｒｕｙａｍａ法，若其在细胞膜的阳性细胞率大于７０％为正常表达；细胞浆或细胞核阳性细胞率大于１０％为异常表达［５］。Ｍｕｃ１的阳性表达为导管及腺泡上皮的近管腔侧胞膜或胞质内胞膜棕黄色颗粒沉积，阳性细胞率在５－５０％为阳性。１．５统计学分析采用ＳＰＳＳ１７．０统计学软件对喉癌与癌旁正常组织、喉癌与喉良性肿瘤的β－ｃａｔｅｎｉｎ与Ｍｕｃｌ阳性细胞率进行卡方检验，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义，用直线回归方程分析二者在喉鳞状细胞癌中的关联性。２结果２．１β－ｃａｔｅｎｉｎ基因的阳性表达率β－ｃａｔｅｎｉｎ在细胞质或细胞核上异位表达，其表达率为６４．８％，显著高于癌旁正常组织与喉部良性肿瘤中组织中二者的表达（Ｐ＜０．００１，ｐ＝０．０２５）。（见表１）

３讨论β－连蛋白位于胞膜，介导细胞间粘附与参与基因表达，参与Ｗｎｔ／β－ｃａｔｅｎｉｎ通路的关键蛋白，调控细胞的分化，凋亡与侵袭转移［１０］。β－ｃａｔｅｎｉｎ基因位于人染色体３ｐ２１，对Ｗｎｔ经典信号通路具有重要研究意义［１１］。正常细胞Ｗｎｔ通路处于关闭状态，β－ｃａｔｅｎｉｎ在细胞膜，少量在细胞浆中表达。当肿瘤细胞中β－ｃａｔｅｎｉｎ在胞浆大量堆积，达到一定浓度开启Ｗｎｔβ－ｃａｔｅｎｉｎ通路，将下游的癌基因激活而发挥作用［１２］。

粘蛋白１是分泌型上皮合成的高分子量糖蛋白，在正常细胞起粘附与润滑作用。在上皮性肿瘤中，粘蛋白１表达增高会改变细胞间粘附作用，易于肿瘤细胞的转移。本次研究发现，喉鳞状细胞癌组织中ＭＵＣ１阳性表达主要位于胞膜或胞质，且在喉鳞状细胞癌组织中ＭＵＣ１呈高表达，阳性率为４４．４％。对比癌旁正常组织与喉部良性肿瘤ＭＵＣ１表达弱或不表达。ＭＵＣ１在喉鳞状细胞癌组织中高表达与癌旁正常组织与喉部良性肿瘤低表达差异显著，具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。而文献未搜索到ＭＵＣ１在喉鳞状细胞癌组织的表达情况。本次研究还发现粘蛋白１与β－连蛋白二者呈正相关，而已有文献仅在乳腺癌、宫颈癌报道，喉癌研究方面未见报道，为进一步研究喉鳞状细胞癌发生发展的作用机制提供新思路。

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