哮喘患者血清胸腺活化调节趋化因子的检测

哮喘患者血清胸腺活化调节趋化因子的检测

杨小金蔡洁丹杨菲菲覃云清

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【摘要】目的：测定哮喘患儿血清胸腺活化调节趋化因子(TARC)水平，探讨其在哮喘免疫学发病机制中的作用。方法：收集30例哮喘急性发作期患儿及20例健康者的静脉血，采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)法检测血清TARC水平。结果：哮喘急性发作期患儿血TARC的S/CO值均大于2，而正常对照组TARC的S/CO值小于0.2。差异有统计学意义(t=2.865，P﹤0.05)。结论：TARC可能参与了哮喘的发病过程。

【关键词】支气管哮喘;趋化因子

【中图分类号】R663【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)06-0419-02

支气管哮喘是常见的慢性呼吸道疾病，近年来发病率呈增加趋势，特别是儿童哮喘更加明显，因此哮喘的发病机制和治疗一直是人们研究的热点。哮喘的发病机制非常复杂，目前研究表明哮喘是由多种因素所导致气道的慢性炎症性疾病，这种慢性炎症在哮喘患者气道持续存在。胸腺和活化调节趋化因子(thymusandactivationregulatedchemokine，TARC)是近年发现的一个新的CC趋化因子，其高亲和力受体为CC趋化因子受体4(CCchemokinereceptor4，CCR4)，CCR4高表达于Th2细胞，能选择性地将Th2细胞从外周募集至炎症部位，从而引起Th2细胞介导的炎症反应，而Th2细胞与哮喘关系密切[1，2]，目前国内对TARC在哮喘发病机制中的作用研究较少，2009年1月～2010年6月，采用ELISA法检测哮喘急性发作期患儿血清TARC水平，研究其在哮喘发病中的作用，进一步了解哮喘的免疫学发病机制，为哮喘的治疗提供新的策略。

1材料与方法

1.1一般资料呼吸科门诊被确诊为哮喘急性发作期患儿30例，男18例，女12例,年龄跨度从1.5岁到57岁，其中10岁以下（含10岁）的儿童16例，占53.33%。发病前4周均未使用过糖皮质激素类药物及免疫调节剂;对照组20例,为体检科健康体检儿童和成人。男10例，女10例,年龄跨度从2岁到55岁，其中10岁以下（含10岁）的儿童12例。近1个月无急性呼吸道感染，既往无喘息病史，无家族哮喘病史，无个人和家族过敏性疾病史，均无心、肺、肝、肾等重要脏器疾病。两组性别、年龄经统计学比较差异无显著性，具有可比性。

1.2方法：所有研究对象均真空抽取静脉血3ml，以2500r/min离心10min后分离血清，吸取血清放入Ependoff管中，置于-20℃冰箱保存留待一次性检测用。采用ELISA法检测血清TARC的水平。TARC试剂购置于美国MCKINLE公司，仪器：Rayto(RT-600)酶表仪，操作严格按操作规程执行。

1.3统计学处理所有实验数据采用SPSS11.5统计软件进行分析。计量资料进行正态性检验，正态分布的数据用(x±s)表示，采用成组设计两样本均数比较的t检验，计数资料间的比较采用卡方检验，检验水准α定为0.05，P<0.05差异有显著性。

2结果

哮喘急性发作期患儿血TARC的S/CO均值大于2，而正常对照组TARC的S/CO值均小于0.2，差异有显著性(t=2.865，P﹤0.05)。下列表格为酶表仪测出的原始数据，标本号01-30为哮喘急性发作患儿血清TARC的结果，标本号31-50为正常对照组TARC结果。

3讨论

TARC又称为趋化因子配体17(CCL17)，是由Imai等[7]在1996年通过信号序列捕获法从植物血凝素刺激的外周血单核细胞建立的cDNA表达文库中分离出一个新的CC趋化因子。TARC主要表达于胸腺，也表达于其它组织，如肺、结肠、小肠等[4]，主要由胸腺细胞、单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、支气管上皮细胞等产生。TARC的高亲和力受体为CC趋化因子受体4(CCchemokinereceptor4,CCR4),CCR4选择性高表达于Th2细胞,也表达于血小板、单核细胞、嗜碱粒细胞等,TARC与CCR4结合后可引起分子构象的改变，激活偶联的G蛋白，进而激活磷脂酶C，促使胞外Ca2+内流和细胞储存Ca2+释放，致胞浆内Ca2+浓度增高及蛋白激酶C活化，引起靶细胞效应[2,5]。TARC具有强大的募集Th2细胞的作用，而Th2细胞可促进多种细胞合成并释放多种炎性因子，并与多种细胞因子产生协同作用以放大炎症反应。TARC强大的募集Th2细胞的独特之处和促进多种细胞因子释放的作用，被认为参与了机体多种炎症性疾病的发生，其能诱导和激活炎性细胞在呼吸道的募集，参与呼吸道的炎症，在呼吸系统炎症性疾病的发生发展中起重要作用。研究发现，哮喘患者的痰、气道上皮和外周血中的TARC含量和表达TARC的细胞数均明显高于正常人群，并且与IgE增高密切相关[5,6];另外的研究显示[5]，IL4促进TARCmRNA在支气管上皮细胞株A549的表达，联合TNFα则明显增加TARCmRNA表达;糖皮质激素吸人治疗几乎完全抑制TARC蛋白和mRNA在气道上皮细胞的表达，提示气道上皮细胞是产生TARC的重要来源，气道上皮通过旁分泌机制在变应性呼吸道疾病的发展中起重要作用，糖皮质激素吸人治疗哮喘至少部分是通过抑制上皮细胞产生TARC而发挥作用。

哮喘发作时不同类型的细胞因子的产生有一定的规律，按照细胞因子Th细胞来源不同将细胞因子分为两类，即Th1型细胞因子和Th2型细胞因子。Th1型细胞因子产物有IL2、IFN-γ和TNF-β，主要参与细胞免疫免疫反应；Th2型细胞因子产物有IL3、IL4、IL5、IL10、和IL13，主要参与体液免疫。细胞因子在T细胞向Th1/Th2活化过程中作用是相反的，促进Th2细胞活化则抑制Th1细胞活化，反之亦然。因此，Th1与Th2型细胞因子的失平衡与哮喘的发作密切相关。Th2细胞产生的IL4、IL5和IL13在介导Th2细胞反应中起关键作用，多数人认为是引起哮喘发作的重要因素。过敏原对哮喘患者Th细胞增殖有选择性，促进Th2细胞优势表达，从而使Thl/Th2平衡向Th2转化。当Th2细胞占优势时，IL4和IL5等分泌增加，易发生高IgE血症和嗜酸细胞的增多及寿命延长，结果导致哮喘的发作[4]。可见Th2细胞支气管哮喘发病中起重要作用，而募集大量Th2细胞到炎症部位的胸腺和活化调节趋化因子为近年研究热点。

本实验的结果显示，哮喘患儿血清TARC的水平较正常对照组明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。哮喘患儿TARC升高可募集大量Th2细胞到炎症部位，Th2细胞分泌IL4、IL13，而IL4及IL13又促进气道上皮细胞、平滑肌细胞等分泌TARC，TARC的产生反过来诱导更多Th2细胞在气道的募集，从而起到级联放大作用，促使气道炎症发生发展及慢性炎症的持续存在[3]。可见促使Th2淋巴细胞募集的TARC在哮喘的发病机制中起重要作用。

目前研究表明哮喘是由多种因素所导致气道的慢性炎症性疾病，也是一个复杂的免疫性疾病，众多的细胞因子和炎症介质参与了其发病过程。本研究结果显示，哮喘急性发作期患儿血清胸腺活化调节趋化因子（TARC）水平升高，表明其在哮喘发病过程中起了重要作用，为深入进一步探讨TARC在哮喘免疫学发病机制中的作用提供一定的理论依据。

参考文献

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作者单位：518000广东深圳龙岗区人民医院