临床检验在ABO血型鉴定中的质量控制分析

临床检验在ABO血型鉴定中的质量控制分析

吴守义

吴守义(甘肃省会宁县中医院检验科甘肃会宁730700)

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2012）9-0299-02

ABO血型鉴定是临床实验室所必具的检查项目，对其正确的鉴定在临床治疗输血，器管移植、骨髓移植、法医鉴定、母婴血型不合引起的新生儿溶血病的诊断等方面发挥着根本性的作用。因此实验室必须加强血型鉴定过质中各环节的质量控制工作，确保检验质量提高。笔者就ABO血型鉴定过程中的质量控制工作的体会报告如下：

1加强理论学习、掌握基本原理。

ABO血型鉴定是根据红细胞膜表面有无A抗原和（或）B抗原，以及血清中存在血型抗体，利用红细胞的凝集实验，运用正向定型或反向定型，依据抗原抗体存在的情况判定血型。ABO血型定型原则见表1。

ABO血型正反定型结果

-标准血清+受检者红细胞受检者受检者血清+试验红细胞

抗A抗B抗A+B血型A细胞B细胞O细胞

+-+A-+-

-++B+--

---O++-

+++AB---

注：+：凝集或溶血；-：不凝集。

2选择适宜的鉴定方法，严格执行凝集结果判断标准

2.1生理盐水凝法：①玻片法，此操作相对简单，适于大量标本的检查，但反应时间长，被检者如血清效价低，则不易引起红细胞的凝集。因此，不适宜用于反向定型。②度管法：由于离心作用加速了凝集反应，使反应时间缩短，而且借助于离心力的作用可使红细胞接触紧密，促进了凝集作用，常常在急诊检查中被大量使用。③玻片法凝集结果的判断应在低倍镜下对凝集程度的强弱判断标准为：呈一片或几片凝集块，仅见少数单个游离红细胞为（++++）；呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）；数个小凝集颗粒和一部门维细凝集颗粒，游离红细胞约占1/2为（++）；肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒，在镜下见每凝集团中有5—8个以上红细胞为（+）；可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞为（±）；可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞呈分散为混合凝集外观，镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。④试管法凝集结果判断：先观察试管上层液有无溶血现象，再斜持试管轻轻晃动式弹动，使底部的红细胞慢慢浮起，观察有无凝集，再用低倍镜观察凝集强弱程度，如轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上，再以低倍镜观察，在对于试管法结果的判断中，完全凝集的管上层清亮无色，底部有红细胞凝块，且成花边状，轻弹凝块不散开。完全不凝的管，上层液体清亮无色，底部细胞均匀地沉到管底，边缘整齐，轻弹试管，细胞像一缕烟似的立即上升，即为均匀悬液。

2.2凝胶微柱法：是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本、用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。对于此法的操作应严格标准化操作规程，定量加样，方可确保结果准确。

3标准血清及器材的选择

对于抗A、抗B和抗AB标准血清的选购必须在质量性能等方面有合格证件的商品，必须符合下列条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。②效价；抗A和抗B血清效价均在1:128以上。③亲和力：要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集时间为15S、30S和45S，抗B对B型红细胞开始出现凝集，时间国15S。凝集强度为3min时、凝块不小于1mm2。④冷凝集素效价：在1:4以下。⑤无菌。⑥灭活补体。对于所用的器材必须干燥清洁，防止溶血而影响结果判定。

4ABO血型鉴定中容易出现错误的环节及原因

4.1分型血清方面的原因：①实验室自制分型血清抗体，致使效价太低，亲合力不强，冷凝集素太高。②被检者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症，如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等可引起红细胞呈缗钱状排列的假凝集，新生儿脐血中含有华顿胶或操作时使用了低劣的玻璃管（瓶）误认其脱下的胶状硅酸盐为串钱状凝集。③被检者近期输注了高分子血浆代用品或静脉注射了造影剂等药物可引起红细胞凝集而误认为凝集。④血清中可能存在着不规则的抗体；如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体能凝集A1红细胞。此外还有Ⅰ抗体等。有些患者如胃癌、胰腺癌等血中含有大量可溶性A或B物质，这些物质可中和抗血清抗体而抑制反应，造成假阴性。对此情况应对红细胞先洗涤再试验。⑤婴儿尚未产生自身抗体或有从母体获得的血型抗体，因此新生儿不宜用血清作反定型。同时老年人血型抗全水平下降，免疫缺陷患者、慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及使用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚止缺如，在鉴定中可出现反向定型错误。⑥由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集，往往出现正反定型不符。

4.2红细胞方面原因：①5%红细胞悬液浓度过高或过低，抗原抗体比例不适当使反应不明显，误判为阴性。②使用近期内输过血的患者血液做对照红细胞此时患者血液红细胞为混合型细胞。③某些自身免疫性疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集而误定为阳性。④红细胞膜有遗传性或获得性异常，红细胞抗原变异，血清中有高浓度的血型物质等都可引起假阴或假阳而误判。

4.3操作方面：①使用了不洁或严重污染或过期的血清，红细胞可出现假阳性，而玻片、试管等污染洗涤剂会造成假阴性。②红细胞与血清比例不当过度离心或离心不足都可引起假阴或假阳性。③误认为溶血现象为阴性结果。④温度过高会造成假阴性，ABO血型系统的IgM抗体最适温度为4℃-22℃，如达37℃时凝集力即下降。⑤操作时应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。⑥标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，结束后应放回冰箱保存。⑦玻片法观察反应时间，不能少于10分钟，否则较弱凝集不能出现造成假阴性。⑧对于正反定型结果不一时，要及时查找原因，严格操作规程，重复进行试验，确保结果一致。而对于再次结果不一或一些疑难问题时要及时请示上级主管，上报科主任，力求全科讨论分析或采取更尽一步办法加以解决。⑨必须在正、反定型一致后实行审核制度，做好登记，方可发出报告。

综上所述，检验室在ABO血型鉴定中，必须严格操作规程，强化质量控制观念，加强检验人员业务技术和理论水平，树立严谨的工作作风，细致的工作态度和科学工作方法，联系临床实际情况，才能获得准确检测结果。

参考文献

[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.

[2]临床医学检验与技术，人民卫生出版社.

[3]葛红卫,王鸿捷,韩卫，等.ABO血型自动化的建立[J]输血执志.1998.11（2）：(63-65).

[4]陈国千,吴国荣.医学检验科管理浅谈[J]2010.9(5)155