气相色谱法测定宁替达尼中的残留溶剂

气相色谱法测定宁替达尼中的残留溶剂

蓝月李孝壁马平平

（江苏豪森药业集团有限公司，江苏连云港222069）

摘要目的：建立了一种对宁替达尼中可能含有的残留溶剂采用气相色谱法(GC)进行测定。方法：采用气相色谱法(GC)进行测定。结果：在0.75ug/ml～305ug/ml范围线性关系良好，相关系数r>0.99（n=6），重复性试验的RSD为0.41%～0.98%（n=6），回收率为85.8%～97.6%，RSD为1.1%～4.6%。结论：所建立的测定方法简单、准确、重现性好，能够有效用于测定宁替达尼中的残留溶剂。

关键词:气相色谱法；宁替达尼；残留溶剂

DeterminationofresidualsolventsinNintedanibbyGC.

LanyueLiXiaobiMaPingping

（JiangsuHansohPharmaceuticalCo.,Ltd.Jiangsu，lianyungang，222069，China）

AbstractObjective：ToestablishamethodthedeterminationofresidualsolventsinNintedanibbygaschromatography(GC)．METHODS:Thedeterminationwascarriedoutbygaschromatography(GC).RESULTS:Therewasagoodlinearityovertherangeof0.75ug/ml～305ug/mlwithathecorrelationcoefficientrhigherthan0.99（n=6）.TheRSDforrepeatitionwas0.41%～0.98%（n=6），Theaveragerecoverywas85.8%～97.6%withRSDofaccuracyat1.1%～4.6%.CONCLUSION:TheMethodwassimple，accurateandgoodreproducibility，whichcanbeusedforthedeterminationofresidualsolventsforNintedanib.

Keywords:gaschromatography；Nintedanib；residualsolvents

乙磺酸宁替达尼（NintedanibEthanesulfonate），由BoehringerIngelheim公司开发的一种多蛋白激酶抑制剂，能够同时抑制三种涉及血管生成的受体家。在临床前的疾病模型中，宁替达尼单药治疗能够有效的干扰肿瘤血管系统的形成和维持进而导致肿瘤生长抑制和肿瘤停滞。2013年10月在欧洲提交与多西他赛联合治疗NSCLC的MAA申请，2014年7月2日在美国提交治疗IPF的NDA申请。在申请注册期间，宁替达尼先后获得了FDA的快车道地位、优先审查资格。孤儿药和突破性疗法的认定，并成为这些快速审评程序的受益者，2014年10月15日提前在美国获准上市（商品名：Ofev）。2014年11月21日，EMA批准本品在欧洲上市（商品名：Vargatef）,用于与多西他赛联合治疗NSCLC。

残留溶剂是指在原料药或辅料或制剂制备过程中使用的，但未能在产品中完全去除的有机溶剂[1]，根据ICH相关指导原则和中国药典二部附录相关指导原则[2-3]，现将本品在合成工艺中可能存在的残留溶剂量进行研究和测定。以二甲亚砜为溶剂，采用液体进样气相色谱法[4-5]进行测定。

1.仪器与试剂

仪器：电子天平，梅特勒-托利多XS105；Agilent7890A气相色谱仪，安捷伦化学工作站；色谱柱：用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-62430m×0.53mm×3.0μm或极性相近）。

试剂：甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯均为AR级，生产商为国药集团化学试剂有限公司；二甲基甲酰胺、二甲亚砜均为色谱级，生产商为MERCK公司。

2.试验过程与结果

2.1色谱条件

照气相色谱法（中国药典2015年版四部0521气相色谱法）测定，用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-62430m×0.53mm×3.0μm或极性相近）为固定相的毛细管色谱柱，氢火焰离子化（FID）检测器，进样口温度为150℃，检测器温度为210℃，柱初始温度50℃，以每分钟10℃的升温速率升温至180℃，维持2分钟。

2.2专属性试验

精密称取甲醇151.9mg、乙醇251.7mg、异丙醇253.7mg、乙酸乙酯249.8mg、四氢呋喃37.54mg、甲苯44.35mg、二甲基甲酰胺44.92mg，置50ml量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，作为A储备液；精密量取A储备液1.0ml置20ml量瓶，稀释定容，配成含甲醇151.9μg/ml、乙醇251.7μg/ml、异丙醇253.7μg/ml、乙酸乙酯249.8μg/ml、四氢呋喃37.54μg/ml、甲苯44.35μg/ml、二甲基甲酰胺44.92μg/ml的溶液，取适量进样检测。各组分的分离情况见表1，专属性图见图1。说明该方法的专属性很好。

2.3检测限、定量限

在所确定的色谱条件下，取甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺适量，用二甲亚砜逐步稀释成检测限和定量限的溶液进样，信噪比（峰高／基线噪声）3±1为检测限，信噪比10±2为定量限，试验结果见表2。

从表可见，该检测方法灵敏度高，对于样品中含有的残留溶剂可以达到0.003%到0.009%定量限，表明本方法对以上溶剂可以准确定量检测。

2.4线性关系试验

按照标准限度将甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺分别配制成4.50～183ng/ml、3.14～303ng/ml、2.62～305ng/ml、2.35～299ng/ml、2.35～299ng/ml、1.53～45.1ng/ml、0.748～53.3ng/ml、3.72～54.4ng/ml的浓度范围，作为线性试验溶液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，相关系数均大于0.9990，说明线性良好，见表3：

2.5重复性

精密称取甲醇151.9mg、乙醇251.7mg、异丙醇253.7mg、乙酸乙酯249.8mg、四氢呋喃37.54mg、甲苯44.35mg、二甲基甲酰胺44.92mg，置50ml量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，作为A储备液；精密量取A储备液1.0ml置20ml量瓶，稀释定容，配成含甲醇151.9μg/ml、乙醇251.7μg/ml、异丙醇253.7μg/ml、乙酸乙酯249.8μg/ml、四氢呋喃37.54μg/ml、甲苯44.35μg/ml、二甲基甲酰胺44.92μg/ml的溶液，连续六针进样，记录色谱图，计算峰面积的相对标准偏差RSD，结果见表4。

平行进样六针对照品的结果如上图所示，可以看出，最大RSD值为0.98%，小于10%，符合规定，说明本方法对残留溶剂测定的结果是准确、可靠的。

2.6回收率测定

精密称取甲醇151.9mg、乙醇251.7mg、异丙醇253.7mg、乙酸乙酯249.8mg、四氢呋喃37.54mg、甲苯44.35mg、二甲基甲酰胺44.92mg，置50ml量瓶中，用二甲亚砜稀释至刻度，作为A储备液；精密量取A储备液2.0ml置20ml量瓶，用二甲亚砜稀释定容，作为B储备液。精密量取A储备液1.0ml置20ml量瓶中，用二甲亚砜稀释定容，作为对照品溶液。

取供试品50mg，精密称定，置1ml量瓶中，平行9份，分别标记为1#～9#。分别量取B储备液0.4ml至1#、2#、3#瓶中，用二甲亚砜定容，作为80%的回收溶液；分别量取B储备液0.5ml至4#、5#、6#瓶中，用二甲亚砜稀释定容，作为100%的回收溶液；分别量取B储备液0.6ml至7#、8#、9#瓶中，用二甲亚砜稀释定容，作为120%的回收溶液，分别取对照品溶液、80%、100%、120%的回收溶液，对上述溶剂进行测试，按外标法计算含量，记录色谱图，测量峰面积，采用外标法计算回收率，结果见表5。

由上表可见，通过回收率试验，七个溶剂的平均回收率介于85.8%～97.6%之间，RSD在1.1%～4.6%范围内，说明所确定的方法对以上样品中可能残留的七个溶剂能准确、可靠的定量检测。

3.讨论

本文建立了对甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺的测定方法，并通过对甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺的专属性、定量限，线性范围，重复性、回收率等项目的考察，充分说明本文所开发和确定的方法能有效、准确的测定药品中可能含有的甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、四氢呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等残留溶剂。

参考文献

[1]国家食品药品监督管理局.化学药物残留溶剂的研究技术指导原则//药品研究技术指导原则[M].北京：中国医药科技出版社，2010：10，50.

[2]周海均.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2000：35-38.

[3]张数秀，曹志胜，惠秋莎，等.最新药品注册工作指南[M].北京：中国医药科技出版社，2007：18，100.

[4]国家药典委员会.中国药典.四部,化学工业出版社,北京,2015：63~64.

[5]国家药典委员会.中国药典.四部,化学工业出版社,北京,2015：49~51.