盐酸精氨酸注射液的细菌内毒素检查方法验证及检查方法的建立

盐酸精氨酸注射液的细菌内毒素检查方法验证及检查方法的建立

魏淑梅王宝庆

魏淑梅王宝庆

（牡丹江市食品药品检验检测中心黑龙江牡丹江157011）

【摘要】目的:建立盐酸精氨酸注射液细菌内毒素检查方法。方法：按中国药典2010版二部附录收载的细菌内毒素检测方法及指导原则进行实验。结果：盐酸精氨酸注射液在至少10倍稀释后，不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应。结论：三批盐酸精氨酸注射液用细菌内毒素检查法进行验证，可以用细菌内毒素检查法检查盐酸精氨酸注射液的热原。

【中图分类号】R44【文献标识码】B【文章编号】1007-8231（2011）09-1315-02

1仪器与试药

微量取液器（50-250μl）,XW-80A型旋涡混合器,AL-40型试管恒温仪,细菌内毒素检查用水（BET）1001220,细菌内毒素工作标准品150606-201060160EU/ml,鲎试剂（TAL）100536310082351016485盐酸精氨酸注射液,规格20ml:5g批号090705090801090906用法：滴注：5～10g,一日：10～12g。

2方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度复核鲎试剂灵敏度复核试验按细菌内毒素检查法操作，结果灵敏度在0.5λ～2.0λ之间，表明鲎试剂灵敏度标示值符合规定。

2.2内毒素限值的确定[1]L=K/M,其中K为按规定的给药途径，人每公斤体重每小时可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5EU/（kg·h）M为人用每公斤体重每小时给的最大剂量M=6000mg/60kg·h,则L=K/M=5×60/6000=0.05EU/mg，则本品的细菌内毒素理论限值,L为0.05EU/mg。

2.3供试品MVD的确定及稀释液的制备根据MVD=CL/λ=200×0.05/0.25=40倍其中C=200mg/mlλ=0.25EU/mlL=0.05EU/mg，当不同灵敏度的鲎试剂MVD则不同，本文采用λ=0.25EU/ml则MVD=40倍,我们选用几个稀释液进行试验，如1：5，1：10，1：15三个稀释级别进行干扰试验。

2.4供试品干扰初筛试验[2]

用细菌内毒素检查用水将供试液批号（090705090801090906）分别稀释成1：5，1：10，1：15系列浓度，以各稀释浓度样品将细菌内毒素工作标准品稀释成2λ，1λ，0.5λ，0.25λ系列浓度的内毒素溶液，将上述溶液与鲎试剂混合，进行抑制试验，结果见表1。

供试品在原液时以及1：5浓度时对细菌内毒素检查有抑制作用，供试品在10倍稀释后对鲎试剂无干扰作用，每一浓度重复做3次，结果均相同。

2.5供试品干扰试验[2]

将样品10倍稀释后作为供试液，取供试液和细菌内毒素检查用水分别将内毒素稀释成0.5EU/ml,0.25EU/ml,0.125EU/ml,0.0625EU/ml系列浓度，分别取0.1ml加入0.25EU/ml的鲎试剂0.1ml，每一浓度平行做4支管，另取供试液和细菌内毒素检查用水各做2支阴性对照管，结果见表3。表2表明，供试液经30倍稀释后，对鲎试剂无干扰。

2.6样品细菌内毒素检查

取3批盐酸精氨酸注射液（090705090801090906）每批5支，采用灵敏度0.25EU/ml的鲎试剂，将样品稀释10倍，分别按中国药典2010年二部细菌内毒素法检查[2]，结果符合规定。

3讨论

从上述实验可知,盐酸精氨酸注射液的10倍稀释液对细菌内毒素检查法无干扰作用,该方法与家兔法相比,具有简便、迅速、重现性好、灵敏度高等优点,可以作为检测盐酸精氨酸注射液细菌内毒素的方法。

参考文献

[1]宫爱武,任仙梅,刘玉华;浅谈细菌内毒素检查法的使用[J];包头医学;2001年02期;46.

[2]中华人民共和国药典2010年版二部附录XIE.