脑胶质瘤中p16及p53基因表达及相关性研究

脑胶质瘤中p16及p53基因表达及相关性研究

李勇任光旭

李勇任光旭（延边大学附属医院神经外科吉林延吉133000）

【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)29-0072-02

【摘要】目的探讨脑胶质瘤中p16及p53基因的表达及其相关性分析。方法采用免疫组化方法检测43例已确诊人脑胶质瘤中p16及p53的表达。结果p16表达缺失率为60.5%，p53阳性率为48.8%。P16表达缺失在Ⅲ级（43.6%）、Ⅳ级（85.7%）脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级（22.2%）（P<0.05）。p53表达阳性在Ⅲ级（62.5%）、Ⅳ级（64.3%）脑胶质瘤中显著高于Ⅰ-Ⅱ级（15.4%）（P<0.05）。p16阳性且p53阴性(即正常)者在Ⅱ级中为18.2％(2／11)，在Ⅲ、Ⅳ级病例中均为0；pl6缺失表达伴P53突变(均异常)者在Ⅱ级肿瘤中仅为16.7％(1／6)，而在Ⅲ、Ⅳ级病例中两者复合改变者为40.0％(8/20)。两种基因的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小及发病部位无相关性。结论P16、P53基因异常对脑胶质瘤的形成及其发展有重要作用，p16、p53在脑胶质瘤中的异常表达与肿瘤的分化程度相关。

【关键词】胶质瘤p53p16免疫组织化学

在脑胶质瘤中，p16、p53的表达有不同程度的异常【1，2】。我们用免疫组化方法检测了43例胶质瘤P16和P53基因的表达，并对二者在脑胶质瘤中相关性进行了分析。

1材料与方法

1.1材料：43例脑胶质瘤病例来源于2008年1月至2009年12月脑胶质瘤手术患者。Ⅰ级6例，Ⅱ级7例，Ⅲ级16例，Ⅳ级14例。

1.2主要试剂：鼠抗人P53单克隆抗体、鼠抗人P16单克隆抗体、浓缩型DAB试剂盒及二步法免疫组化检测试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3方法：所有石蜡标本均连续制片3张。厚4μm。其中l张行HE染色，供形态学观察。另外2张采用免疫组化染色：标本石蜡切片置于65℃烤箱考片1小时。石蜡切片常规脱蜡，抗原修复，待自然冷却至室温。用PBS洗涤，加抗（P53或P16），滴加通用型IgG抗体，显微镜下观察显色情况，苏木素染色3-4次，脱水、透明，常规树脂封片。

1.4结果判定：在400倍显微镜下至少观察200个细胞，阳性产物为棕色颗粒，p16、p53均以细胞核着色为主，仅胞浆着色者视为阴性。

1.5统计学处理：采用X2检验，P<0.05判别有显著性差异。

2结果

P16蛋白免疫组化染色结果见表1。

43例胶质瘤中P16表达阳性者有17例，26例阴性，表达缺失率为60.5％(26/43)。13例Ⅰ-Ⅱ级病例中有6例缺失表达(22.2%)，16例Ⅲ级肿瘤中表达缺失者7例(43.6%)，14例Ⅳ级肿瘤中表达缺失者12例（85.7%）。在Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ-Ⅳ级肿瘤中P16阳性表达率差异显著(P<0.05)。

表1P16蛋白免疫组化染色结果

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P53免疫组化染色结果见表2。

结果显示，在43例胶质瘤中P53呈阳性表达者共21例(48.8％)，13例Ⅰ-Ⅱ级病例中阳性者2例(15.4％)，Ⅲ级16例阳性者10例(62.5％)、Ⅳ级14例阳性者9例(64.3％)，P53阳性表达率在Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级肿瘤间存在显著性差异(P<0．05)，但Ⅲ、Ⅳ级肿瘤间无差异。

表2P53蛋白免疫组化染色结果

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图1.为p53的免疫组化染色阳性结果图2为p16的免疫组化染色阳性结果

3讨论

p16基因是一种抑癌基因。p16是细胞周期素依赖性激酶(CDK)的抑制剂，是细胞周期的负性调节蛋白[3]。p16基因的失活主要表现为缺失、突变、5’-CpG岛甲基化、RNA剪接加工错误等[4]。低级别的胶质瘤中P16的缺失常不存在或呈低表达，而在间变性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤中的缺失率则明显升高[5]。P16的缺失率为60.5％，Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤缺失率为22.2%、43.6%、85.7%。据此，得出以下结论：P16缺失表达与胶质瘤的组织分化程度密切相关，即组织分化程度越低，表达缺失率越高。P16基因的缺失可能使肿瘤获得了生长优势，恶性程度增加，可将该基因作为一项判断胶质瘤恶性程度的有效指标。

p53基因是与人类肿瘤相关性最高的基因。野生型p53基因产物p53半衰期很短，因此在细胞中含量很低，一般的免疫组化方法检测不出。而p53基因突变后表达的突变型p53的半衰期大大延长，积聚于细胞核内，这也是应用免疫组化方法测定突变型p53基因的基础。p53基因突变主要表现为点突变、插入和纯合缺失，且95％以上为点突变，伴随基因突变而来的是p53肿瘤抑制功能的丧失和致癌功能的获得[6]。HaapasaIo等[7]应用单克隆抗体DO-7研究了102例不同分级的星形细胞瘤，发现P53蛋白在I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级肿瘤的表达率分别是：0％、19％、29％、49％；另一项研究发现44％的间变性星形胶质细胞瘤、46％的胶质母细胞瘤P53蛋白呈阳性表达，该研究中P53蛋白表达与肿瘤的恶性度有极强的相关性[8]，P53的表达率随着恶性度的增高而增加[9]。本次研究也得出了相似的结果：在Ⅰ-Ⅱ级肿瘤中P53表达率为15.4％，而在Ⅲ、Ⅳ级中该蛋白表达率则上升为62.5％、64.3％，Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ或Ⅳ级肿瘤间差异显著(P<0．05)，但后两者间不存在差异。

目前，有关P16缺失表达与p53突变的相关性的研究尚没有统一结论。有研究者认为P16的缺失与P53突变没有任何相关性，而另有结果显示二者的发生具有一定的相关性，发生P16基因失活的病例常伴随P53基因改变[10]。