FACSCount流式细胞仪的常见问题分析

FACSCount流式细胞仪的常见问题分析

莫冬松

莫冬松（广西灵山县疾病控制中心535400）

【摘要】艾滋病在我国流行已有二十多年，随着感染者不断增加、感染人群的变化和临床病人的日益增多，艾滋病实验室已遍布全国各级医疗，HIV感染者T淋巴细胞亚群的检测对于判断病情和评价疗效都具有重要的临床价值，全国已经有近百台各型流式细胞仪直接服务于艾滋病感染者和艾滋病患者，BDFACSCount流式细胞仪的使用单位都不少，本文主要分析在使用BDFACSCount流式细胞仪检测CD4T淋巴细胞的使用技巧。

【关键词】CD4T淋巴细胞FACSCount流式细胞仪HIV

【中图分类号】R197.38【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2013）34-0273-02

艾滋病的免疫学特征最主要的是CD4+T淋巴细胞它的数量显著减少，同时CD4+/CD8+比例倒置.准确可靠的CD4+T细胞检测是评价HIV感染感染者或病人免疫状况，预测判断疾病进程、评价抗病毒治疗效果和评测预后的重要指标。在全国HIV防治疗医疗机构中，通过流式细胞仪来检测CD4+T细胞及其它T淋巴细胞亚群已得到广泛应用开展。FACSCount系统是BectonDickinson公司生产的自动化仪器与试剂，特别设计用来计数未裂解全血中的CD4，CD8和CD3T淋巴细胞绝对数值，与传统的流式细胞仪相比结构较为简单，操作方便，功能单一，重复性好，适合很多基层防艾机构使用，下面阐述在实际工作中归纳总结出应用FACSCount系统检测CD4+T淋巴细胞的影响因素和使用技巧。

一、原理

将全血加入到试剂管对中时，试剂中事先用荧光染料标记的抗体特异地结合到淋巴细胞的表面抗原上，再加入固定溶液到试剂管对中后，在仪器上运行样本，细胞会与激光光线接触，荧光标记的细胞会在此时发出荧光，仪器就会自动进行分析，软件可鉴别出T淋巴细胞亚群并计算出绝对数值。

二、仪器的使用环境

FACSCount流式细胞仪是精密仪器，对环境要求非常高，最适宜环境为温度20-25℃，湿度68-77°F。在南方，经常湿度过大，会导致仪器软盘磁性丧失，机子就不能进入系统正常运转，为确保仪器正常运转，实验室内应配置冷暖空调和除湿机。实验室的使用电源对仪器也影响很大，要求安装单独可靠地线的电源，接地电阻应小于1欧姆，不然电阻过大，会导致流式细胞仪的激光器损坏，同时要可持续电源、稳压器，和防止突然断电导致数据丢失、仪器损坏。

三、常见问题

应用FACSCount流式细胞仪测试完标本后，往往会遇到样品结果没有显示在屏幕上，而显示为XXX，造成错误结果的最常见原因有：

出现问题，结果显示不出来后，一般首先要看看，滤器处和流动池处，是否有空气，这是最经常会出现的问题，建议每天开机时重新灌冲系统，每检测完8到10个样品后，都要松一下滤器处的塑料夹，以使滤器鞘液流通正常，以避免错误发生影响检测。

四、仪器维护

FACSCount流式细胞仪是对单个细胞进行计数，对管道的维护，日常清洗很重要，每天工作开始和结束都要运行清洗程序，使用的漂白液要保持是新鲜、有效的。按照仪器出厂要求运行清洗程序程序时是先洗一管漂白剂，再洗一管蒸馏水，我们实际工作中执行清洗程序时，可以先两次都是放漂白剂进行清洗，再运行多一次清洗程序，两管都用蒸馏水清洗，这样更能让管道清洗得干净。还有建议每月进行一次大清洗：将鞘液瓶里的鞘液换成1：10稀释的漂白剂，将鞘液管和滤液管都拔开来，将鞘液管接到原滤液管的接口处，使鞘液瓶里的漂白剂不经过滤器处，运行清洗程序，放1:3的漂白剂管清洗10次，再放蒸馏熟水管清洗10次，清洗完毕，再将鞘液瓶里的漂白剂换回鞘液，鞘液管和滤液管按回原位置插放。

五、影响CD4检测的因素

工作中，偶偶会遇到一些标本在FACSCount系统检测不出结果的，可能的原因为

1、标本数值超出系统检测可检测范围；

2、严重溶血、凝血或坏死，因为死细胞增强标本对荧光染料的非特异性染色，这使背景荧光增多，干扰真正的荧光信号；

3、样品内存在干扰因素，黄疸指数过高、吸毒人员的血样、抗凝剂运用不对等；

4、除了有检测不出结果的情况外，一些生物学因素和药物也会影响到CD4+T淋巴细胞的测定结果，如下表：

通过上文，我们了解到FACSCount流式细胞仪的原理和一些应用细节，作为临床检验工作者，必须把握好其常规操作和结果分析的质量关，使检验结果最佳地符合病人有无病变的实际情况，为艾滋病的预防、诊断和治疗提供一个依据。

参考文献

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[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程（3版）.南京:东南大学出版社,2006:577-578.

[3]黄春梅,郭野，陈倩，刘定华，崔巍.中华检验医学杂志.《中华医学杂志》有限责任公司，2011.5.403-408.