鞘氨醇激酶-1在重症急性胰腺炎早期的变化

鞘氨醇激酶-1在重症急性胰腺炎早期的变化

邓如兵汤礼军黎冬暄李昆

邓如兵汤礼军黎冬暄李昆

（成都市龙泉驿区第一人民医院四川成都610083）

【摘要】目的：探讨人外周血白细胞中鞘氨醇激酶-1（SphK1）在重症急性胰腺炎（SAP）早期的炎症反应中的作用。方法：选取20名SAP病人，另外纳入10例健康者作为健康对照组。在SAP早期检测病人血清白介素（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）、外周血白细胞中SphK1的mRNA表达及其酶活性。结果：在SAP早期，SAP病人血清IL-6、TNF-α的水平都高于健康对照组（P<0.05）；SAP组病人外周血白细胞SphK1mRNA的表达水平及其酶活性都是高于健康对照组（P<0.05）；SAP组病人外周血白细胞SphK1mRNA的表达水平与APACHEII评分呈正相关关系（r=0.860,P<0.05）。结论：SphK1的激活可能与SAP的炎症反应密切相关；我们发现SphK1mRNA的表达水平与APACHEII评分呈正相关关系，提示SphK1可能在诊断SAP及评估其严重程度方面是有一定价值的。

【关键词】重症急性胰腺炎；白细胞；鞘氨醇激酶-1；1-磷酸鞘氨醇

【中图分类号】R657.5+1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）04-0066-02

Sphingosinekinase1changeinearlystageforsevereacutepancreatitisDengRubing,TangLijun,LiDongxuan,LiKun.LongquanyidistrictfirstPeople'sHospitalofChengdu,Chengdu610083,China

【Abstract】ObjectiveInvestigatetheperipheralbloodleukocytesofsphingosinekinase1(SphK1)inearlystageforsevereacutepancreatitis(SAP)oftheroleofinflammation.MethodsSelectionof20patientswithSAP,theotherin10casesofhealthysubjectsashealthycontrols.ResultsEarlyintheSAP,SAPpatientsserumIL-6,thelevelofTNFalphawerehigherthanhealthycontrols(P<0.05);SAPgroupofpatientswithperipheralbloodleukocytesSphK1mRNAexpressionlevelanditsenzymeactivitywashigherthanthatofhealthycontrols(P<0.05).ConclusionsTheactivationofSphK1mayiscloselyrelatedtotheSAPofinflammation;SphK1mRNAexpressionlevelandAPACHEIIscoreswerepositivelycorrelated,suggestpossibleSphK1indiagnosisandevaluatetheseverityofSAPhasacertainvalue.

【Keywords】Severeacutepancreatitis;Whitebloodcells;Sphingosinekinase1;1-phosphatesheathofammoniaandalcohol

在重症急性胰腺炎（SAP）中，促炎因子（如TNF-α，IL-6，IL-18）与SAP的严重程度和预后相关，这些促炎因子的释放与炎性细胞（包括中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞）的激活密切相关[1]。鞘氨醇激酶-1（SphK1）是炎症反应中一个重要介质，参与调控炎症反应及管理多种免疫细胞的功能[2]。本研究旨在观察外周血白细胞中SphK1在SAP早期中的变化及其在SAP早期炎症反应中的作用。

1.资料与方法

1.1一般资料

从2013年5月至2014年7月来我院就诊的连续性20例SAP病人进行研究。所有病例都符合以下条件：(1)符合SAP的诊断；(2)入院时，病人是处于SAP的早期，即发病持续时间在一周内；(3)无慢性胰腺炎、胰腺癌等胰腺疾病，未合并有恶性肿瘤或慢性脏器功能不全，不是孕妇或哺乳期妇女。SAP组20例，其中男11例、女9例，年龄19～83岁，平均年龄46.7岁；选择10名健康者作为对照组，其中男5例、女5例，年龄27～70岁，平均年龄40.3岁。每名SAP病人在入院时做APACHEII评分。

1.2血清IL-6,TNF-α的含量测定

在SAP病人入院时和健康者入组时分别抽取外周血。采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定血清IL-6,TNF-α的浓度。

1.3外周血白细胞提取

在SAP病人入院时和健康者入组时分别抽取外周血提取白细胞。严格按照人外周血白细胞分离液（天津市灏洋生物制品科技有限责任公司）说明书提取白细胞。

1.4外周血白细胞中SphK1mRNA的测定

采用Trizol（碧云天）提取白细胞总RNA。引物由上海生工合成，为相对定量检测mRNA表达量，用GAPDH作为内参。采用一步法逆转录荧光定量PCR试剂盒(TAKARARR086A)配制25μl体系，BIO-RADCFX96进行目标序列扩增，用2-△△Ct法分析mRNA的水平变化。（引物序列：SPHK1atgctggctatgagcaggtc，gtgcagagacagcaggttca；GAPDHacgaccccttcattgacctcaa，gcagtgatggcatggactgtg）。

1.5外周血白细胞中SphK1活性的测定

严格按照GM50232.2血液SPHK1激酶活性谱法试剂盒（美国GENMEDScientifics公司）说明书检测血液SphK1活性。

1.6统计学方法

连续变量的数据采用均数±标准差（x-±s）表示,使用SPSS19.0统计软件分析,连续性变量之间的均数比较采用单因素方差分析；两变量之间的相关性检测采用直线相关。P<0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1血清IL-6、TNF-α浓度

在SAP早期，SAP组病人血清IL-6、TNF-α的水平都高于健康对照组（179.9±42.7vs7.1±2.0；48.79±13.71vs4.82±1.82；P<0.05）（单位：pg/ml）。

2.2外周血白细胞中SphK1mRNA

在SAP早期，SAP组病人外周血白细胞SphK1mRNA的表达水平高于健康对照组（6.374±1.767vs0.868±0.629，P<0.05）。

2.3外周血白细胞中SphK1活性

在SAP早期，SAP组病人外周血白细胞SphK1活性高于健康对照组（0.319±0.092vs0.049±0.022，P<0.05）（单位:μmolNADH／min*mg）。

2.4外周血白细胞中SphK1mRNA与APACHEII评分

如图所示，SAP组病人外周血白细胞SphK1mRNA的表达水平与APACHEII评分呈正相关关系，相关系数r=0.860（P<0.05）。

SAP病人外周血白细胞中SphK1mRNA与APACHEII评分的相关分析图

3.讨论

炎性反应中，SphK1能调节免疫细胞（比如中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞）的功能[2—3]。LPS作用于人中性粒细胞和巨噬细胞后，其细胞内很快出现SphK1的激活；特异性抑制SphK1的活性后，LPS刺激人中性粒细胞和巨噬细胞引起NF-κB的激活和细胞因子（TNF-α，IL-1β和IL-6）合成都减少，证实此过程是依赖于SphK1的激活。通过使用过敏毒素C5a作用于人单核-巨噬细胞，能引起SphK1的激活；特异性抑制SphK1，能抑制C5a刺激人单核-巨噬细胞引起的细胞因子的产生。TNF-α刺激人单核细胞也是通过SphK1的激活，从而引起NF-κB的激活和细胞因子（IL-1β，IL-6和IL-8）合成。SphK1／S1P途径的激活，从而引起下游信号激活，诱导促炎性因子的产生，SphK1／S1P在炎症反应中发挥着关键性作用。

本研究发现在SAP早期，SAP组的外周血白细胞中SphK1的mRNA的表达及其活性都是高于健康对照组（P<0.05）；在SAP早期，血清TNF-α、IL-6含量都是SAP组高于健康对照组（P<0.05），结合SphK1表达与促炎因子分泌的关系，提示在SAP病人中外周血白细胞内SphK1的表达可能与SAP的炎症反应密切相关。APACHEII评分是临床上应用较多的预测急性胰腺炎（AP）严重性的评分系统，被大家认为是目前最佳的预测系统。本研究发现外周血白细胞中SphK1mRNA的表达和SAP病人的APACHEII评分成正相关关系，这提示SphK1可能在诊断SAP及评估其严重程度方面是有一定价值的。

【参考文献】

[1]VlachosS，AlexandraK，Tsarouch.，etal.SerumprofilesofM30,M65andinterleukin-17comparedwithC-reactiveproteininpatientswithmildandsevereacutepancreatitis[J].JHepatobiliaryPancreatSci,2014,21(12):p.911-918.

[2]PuneetP,YapCT,WongL,etal.SphK1regulatesproinflammatoryresponsesassociatedwithendotoxinandpolymicrobialsepsis[J].Science,2010,328(5983):1290-1294.

[3]MelendezAJ.Sphingosinekinasesignallinginimmunecells:potentialasnoveltherapeutictargets[J].BiochimBiophysActa,2008;1784(1):66-75.