浅谈胶体金法诊断试剂在无偿流动采血中应用的体会

浅谈胶体金法诊断试剂在无偿流动采血中应用的体会

苏明辉1黄文丽2

苏明辉1黄文丽2

（1黑龙江省佳木斯市中心血站黑龙江佳木斯154007）

（2黑龙江佳木斯大学第一附属医院普外科黑龙江佳木斯154007）

【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2014）31-0318-02

我国是已型肝炎高发地区，已型肝炎病毒隐性携带者比列超过10%。已型肝炎主要是通过血液途径传播，目前尚无特效疗法，因此预防已成为阻止已型肝炎传播的重要手段。虽然检测已型肝炎的方法很多，但除了胶体金法外均不能满足血站流动采学和快速检测的需要。有关专家分析了应用HBsAg胶体金法检测的标本1500份，与酶联法阳性符合率为96.3-98.6%，阴性符合率为99.3-99.9%。流动采血车现场使用，用胶体金初筛合格后再采血，比不经过初筛.直接采血后回血站实验室内用酶联发筛选，结省了大量的人力财力。HBsAg胶体金诊断试剂在流动采血车上的广泛应用已成必然趋势。

目前，市场上的HBsAg胶体金诊断试剂多采用双抗体夹心法原理，结合层析技术制备，表现形式为测试条和测试板。不论何种包装，其检测结果都相同，既阴性样本仅在质孔线处有条带，阳性样品在检测线处和质控线处均有条带。值得注意的是，有些厂家该产品的质控条带在遇到强阳性样品时会减弱或消失。

以下是我们使用HBsAg胶体金诊断试剂进行筛选工作的一点体会：

一、敏感度

和酶免法相比，HBsAg胶体今诊断试剂的敏感度略低，可达到1-2ng/ml(以不同亚型而定)，而再实际工作中可能出现已肝弱阳性标本漏检的情况，主要由已下几个方面造成：

1）漏检样本是否放置时间过长，放置条件是否合适。如果放置在-20度条件下，是否反复冻融。漏检样本是否在2-10度冰箱保存超过一周等（非新鲜样品）。

2）在进行检测前样品和试剂是否平衡到室温，样品是否混匀，是否在光线明亮的情况下观察结果。

3）如果漏检样品是强阳性标本经稀释而来的话，建议用已肝阴性且抗已肝阴性的血清/血浆稀释。如果用含表面活性剂等的缓冲液稀释，将会影响到检测的敏感度。

4）检测时间：没有达到说明书规定的时间。

5）样品的加样量：严格按说明书加样。当加样量过少时，层析速度减漫，形成的双抗体夹心物的量减少，在检测线处显色弱，易造成漏检。当加样量过多时，加全血的量太多时，红细胞透过滤膜覆盖了检测线，影响了结果的判断。

6）室温低、室内空气潮湿会使敏感度降低而造成漏检。

二、特异性

由于缺少洗涤过成，和酶免法相比，已肝胶体金法诊断试剂的特异性略差，这是胶体金法本身的限制。当然本身原材料的纯度、特性也影响到试剂特异性的一个方面。除此之外，试剂受潮或试剂检测后干燥再判断均会影响结果。

三、影响试剂质量的因素

1）反应时间、温度、湿度；严格按产品说明书的反应时间判断检测结果。如果室温过高、空气干燥，则试剂易干燥，应在判断结果时滴加一滴样品稀释液再进行判断。而室温低、空气潮湿会使敏感度降低。一般室温20度左右，相对湿度为40-70%百分为比较好的检测条件。试剂要现取现用，操作时要水平放置。

2）样品稀释液：有些操作者不太重视样品稀释液的作用，生产厂家说明书对样品稀释液也没有过多的说明，因而样品稀释液的作用常被忽略。实践证明，恰当地使用样品稀释液，可大大提高检测效果（尤其是高黏样品）。一般操作是在加完血样后数秒钟内，再在加样区末端滴加一滴样品稀释液。如果在加样区的前端滴加加样品稀释液，样品稀释液会冲走大量的金标记物而降低敏感度。同时样品稀释液不要加在加样区之外，否者敏感度也会降低。当滴加样品稀释液时，避免样品稀释液瓶口被待检样品污染，否者后面的检测结果将会受到影响。

3）操作人员：胶体金法试剂对操作人员的要求并不高。但要求工作认真负责，加样要缓慢，加样量要准确，判断结果尽可能要客观。

4）采血车：检测时要关好采血车门窗，避免风力的影响。

5）不同厂家试剂的质量是关键：不同厂家试剂的质量不同且同一厂家不同批号间也可能存在差异，敏感度和特异性也有所不同，一般低检出限为1-2ng/ml，因而客观上存在一定的漏检。一般来说加样适量，能检出指定的质控品，样品以较快的迁移速度到达检测线，且观察结果时反应膜干净为好。