李鸣史好巍朱红颜薛丽欣毕晓梅
黑龙江省康复医院150070
摘要:目的:研究分析脂肪血标本对第四代HIV酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV抗原/抗体的影响及检验对策。方法:选择在2012年1~12月间收集正常标本、轻度、中度、重度乳糜样本各20例作为研究对象,在不同程度的乳糜血浆中加入一定浓度的HIV阳性血清,按保存时间顺序,从不同血浆位置取样检测,对检测灵敏度和OD值进行比较。结果:不同程度的乳糜血液随放置时间的延长,不同位置的检测结果有明显差异,轻度乳糜血液上层标本在立即检测时,就与正常标本检测结果有显著差异(P<0.05),中、重度乳糜标本上层血液在立即检测时,与正常标本有极显著差异(P<0.01);轻度乳糜血液中、下层标本在立即检测和1d时,与正常标本检测结果无差异,从第3d时,与正常标本检测结果出现显著差异(P<0.05);中、重度乳糜标本中、下层血液在立即检测时,与正常标本无明显差异,从第1d起,分别出现显著和极显著差异。结论:乳糜标本的乳糜程度对ELISA法4代HIV试剂有明显影响,检测乳糜血液时,加样应避开乳糜层,尽量从血浆中下部分取样,且轻度乳糜血液检测时间不超过3d,中度检测时间不超过1d,重度的必须立即检测。
关键词:乳糜;ELISA;HIV
人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus,HIV),反转录病毒科,慢病毒属(Lentivirus)。该病毒主要破坏人体的免疫能力,导致免疫系统失去抵抗力,而导致各种疾病及癌症并得以在人体内生存,发展到最后,导致艾滋病(获得性免疫缺陷综合症),主要经输血,针刺,吸毒等传播。因敏感、特异、操作简便、重复性好等优点,已在疾病诊断、科研等医学领域中得到广泛应用[1]。ELISA方法检测对标本的要求是:空腹抽血,标本不能乳糜。但是在血站日常工作中,无偿献血一般都在餐后进行,所以经常会遇到乳糜的标本,为了了解乳糜标本对第四代国产HIV检测试剂的影响,我们对新型HIV试剂进行了乳糜因素对试剂检测结果影响的评估,并针对乳糜标本的特点,提出一种检验对策,现将结果报告如下:
1材料与方法
1.1一般资料
临床收集2012年1~12月我单位检测的无偿献血者标本,以淡黄色透明血浆标准管进行清晰度比较,与标准管清晰度一致的稀释倍数为该血浆的乳糜指数,乳糜指数≤2为轻度乳糜血液,3~5为中度乳糜血液,>5为重度乳糜血液[3-5]。收集正常标本、轻度、中度、重度乳糜样本各20例,经HIV检测结果均为阴性。阳性血液为OD值约2.5的阳性样本,经WB法确认为阳性。
1.2仪器与试剂德国西门子公司BEPIII型全自动酶免分析仪;RSP全自动加样仪;Tecan公司Sunrise酶标仪。北京万泰HIV四代试剂,批号H201211048。
1.3方法:
灵敏度及不精密度测定:分别向正常血液、轻度、中度乳糜血液和重度乳糜血液加入同样浓度、同样量的HIV强阳性血清,使血液的检测结果在2-4倍Cutoff值之间,按立即、4℃静置1d、3d、7d,分别进行检测,每天1次。实验由同一个操作人完成,严格按照试剂说明书进行操作,计算、CV及灵敏度。
1.4统计学方法采用SPSS13.0统计软件进行方差分析,比较脂血对丙肝试剂检测OD值的影响。P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
不同程度的乳糜血液随放置时间的延长,不同位置的检测结果有明显差异,轻度乳糜血液上层标本在立即检测时,就与正常标本检测结果有显著差异(P<0.05),中、重度乳糜标本上层血液在立即检测时,与正常标本有极显著差异(P<0.01);轻度乳糜血液中、下层标本在立即检测和1d时,与正常标本检测结果无差异,从第3d时,与正常标本检测结果出现显著差异(P<0.05);中、重度乳糜标本中、下层血液在立即检测时,与正常标本无明显差异,从第1d起,分别出现显著和极显著差异。
3讨论
乳糜血液,对于实验室生化及免疫检测,都有许多不利的影响[2,3],故此,一般体检均要求空腹采血,因空腹采血可有效避免乳糜血液的产生。但是,由于血站工作的特殊性,献血者多数是在餐后捐献血液,故乳糜血液标本在血站检测标本中占有很大比例,并且,由于献血者个人因素的影响,基本不可能重新采集标本进行检测。为此,就要求血站检验部门,对乳糜血液对检测结果的影响进行系统、全面的评估,只有这样,才可以在兼顾血液检测质量的同时,最大程度的保护珍贵的血液资源。
乳糜对于酶免检测结果的影响,主要有两个方面:一方面,在反应过程中,乳糜微粒可形成乳糜层,覆盖在与游离酶标记物与结合酶标记物之上干扰洗板,导致最后显色反应加强;另一方面,由于乳糜微粒体积大、比重轻,放置一段时间后会形成厚薄不等的乳糜上层,而仪器是从上至下根据液体高度加样,当乳糜层较高时,加入的乳糜血液量多,则血清加入量相对减少,同时乳糜微粒的大小对加样也有影响,乳糜微粒大,加样的液体体积就减少,且大小不一致,使测定结果偏低,误差增大,CV偏大。
万泰第四代HIV试剂的加样量为100ul,在检测过程中,乳糜标本对HIV试剂两方面的影响可能都会有,但是从表1结果的显示来看,第二方面的影响是主要的;并且与正常血液组比较,不同程度的乳糜血液上层标本,其检测结果的平均OD值与放置时间成反比例关系,乳糜血液程度越严重,放置时间越长,OD值下降幅度越大;而乳糜血液中、下层标本,其检测结果的OD值与放置时间的关系与上层标本相比,下降幅度较小。轻度乳糜血液上层标本在立即检测时,就与正常标本检测结果有显著差异,中、重度乳糜标本上层血液在立即检测时,与正常标本有极显著差异;轻度乳糜血液中、下层标本在立即检测和1d时,与正常标本检测结果无差异,从第3d时,与正常标本检测结果出现显著差异;中、重度乳糜标本中、下层血液在立即检测时,与正常标本无明显差异,从第1d起,分别出现显著和极显著差异。
通过以上实验,乳糜标本对第四代HIV-Elisa试剂的检测结果仍然有很大的影响。要控制乳糜标本的影响,首先,要在献血招募时加大宣传力度,宣传乳糜血液对输血的影响,让更多的人知道献血前应合理饮食,并且在体检医师对献血者的问诊中增加饮食内容,对有明显高脂肪饮食者进行适当的劝阻或改约。其次,在实验室检测环节,从标本接收步骤起,就应加强标本核查,对乳糜标本进行特殊标记,并对乳糜程度进行检查,轻度乳糜血液放置时间不超过3d,中度乳糜血液不应超过1d,重度乳糜血液应立即检测。第三,针对乳糜标本CV值较大的特点,对乳糜标本的检测结果应采用较大的灰区范围,这样可有效提高乳糜血液的阳性检出率,防止重度乳糜血液的漏检,确保输血安全。
参考文献:
[1]孙玉荣.乳糜血溶血标本对丙型肝炎抗体检测的影响[J].山西医药杂,2011,40(1):81-82.
[2]刘运保.乳糜血液对ELISA检测结果的影响[J].临床输血与检验,2007,9(3):226-228.
[3]韩戈,宵春容,文定碧.酶标仪比浊法测定血浆乳糜程度[J].中国输血杂志,2005,18(4):304.
[4]史光耀,刘衍春,唐荣才.微量快速法检测血液乳糜程度[J].临床输血与检验,2005,7(1):27.
[5]国家质量技术监督局.测定血液乳糜程度的方法.中华人民共和国国家标准GBl8469—2001Is3,2001.14