HPLC法测定三黄片中黄芩苷的含量研究

HPLC法测定三黄片中黄芩苷的含量研究

侯永春1邵崇钰1廖夫生1秦嫚嫚1

（1江西中医药大学南昌330004；2江西中医药大学科技学院南昌330004）

通讯作者：严孜

【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定三黄片中黄芩苷的含量。方法：采用反相高效液相色谱法，以十八烷基键合相为固定相，以甲醇—水—磷酸（47:53:0.2）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm。结果：黄芩苷在0.272～1.36ug范围与峰面积成良好的线性关系，线性方程Y=4891.5X-66.2，R=0.9992，平均回收率为98.9%，RSD为2.5%。结论：此方法操作简便，精密度好，准确度高，重复性好。适用于HPLC对三黄片中黄芩苷的含量测定。

【关键词】HPLC，三黄片，黄芩苷

DeterminationofBaicalinInSanHuangTabletByHPLC

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang,Jiangxi,330004)

ABSTRACT：Purpose：objecttoestablishamethodfordeterminingthecontentofbaicalininSanHuangTablet.Methods:accordingtoRP-HPLC,themobilephasewasmethanol–water—phosphoricacid（47:53:0.2）,theflowratewas1.0ml/min,thedetectionwavelengthwas280nm.Result：Intherangeof0.272~1.360ug,Thebaicalinhadagoodlinear(r=0.9992).Theaveragerecoveryratewas98.9%andTheRSDwas2.5%.Conclusion：Themethodisaccurateandreliablewithgoodreproducibility.ItcanbeusedtocontrolthequalityofSanHuangTablet.

Keywords：HPLC；SanHuangTablet；baicalin

三黄片是一种常用的中成药,由大黄300g、盐酸小檗碱5g和黄芩浸膏21g(相当于黄芩苷15g)组成，功能清热解毒,泻火通便。在组方中，黄芩是其主要成分之一，黄芩具有清热燥湿、泻火解毒等功效，与本方的临床疗效相一致，黄芩中主要有效成分为黄芩苷。与2005版药典比较，在2010版药典中，三黄片的质量标准除测定了大黄素和大黄酚的总量外，增加了对黄芩苷的含量要求，测定三黄片中黄芩苷的含量，可进一步控制其质量标准。目前，黄芩苷的含量测定方法有高效液相色谱法、毛细管电泳法、近红外光谱法等，高效液相色谱法是中成药中含量测定的常用方法，也是药典中首选方法，因此，我们采用HPLC法测定了三黄片中黄芩苷的含量，并进行了方法学考察，为完善其质量标准提供参考。

1.仪器与材料

1.1仪器

Agilent高效液相色谱仪（1100series）、色谱柱KromasilC18（250×4.6mm）、分析天平[AB104-N,梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）]、超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，KQ-500B型）。

1.2材料

三黄片（批号：120818，购于江西益丰大药房）、黄芩苷对照品（110715—201016，中国药品生物制品检定所）、磷酸（分析纯，西陇化工股份有限公司，批号：1102261）、甲醇（HPLC级，上海振兴化工一厂）、水为双蒸水。

2.实验方法

2.1对照品溶液的制备

精密称取干燥的黄芩苷对照品，加甲醇配置成每1ml含0.136mg的溶液，即得到对照品溶液。

2.2供试品溶液的制备

取三黄片片剂20片，去糖衣，于碾钵中碾碎，精密称取适量，约0.3g，置于100ml具塞锥形瓶中，再加入甲醇50ml，密塞，称重，超声处理30min，精密称重，用甲醇补足重量，过滤，精密量取续滤液10mL，置25ml量瓶中，加甲醇定容至刻度线。

2.3阴性对照溶液

除去黄芩浸膏，其他药材按制剂方法制备，然后按照2.2供试品溶液制备方法制备成阴性对照液。

3.结果与分析

3.1色谱条件的选择

色谱条件如下：KromasilC18（250×4.6mm）；甲醇---水—磷酸（47:53:0.1）为流动相；检测波长280nm;流速1.0ml/min；柱温20℃.分别进样对照品、供试品和阴性对照液10ul色谱图如下：

图四标准曲线

3.3精密度实验

准确吸取浓度为0.136mg/ml黄芩苷对照品溶液10ul重复进样5次。结果表明黄芩苷的峰面积的RSD=1.5%，精密度良好。

3.4稳定性实验

吸取同一供试品溶液分别在0、4、6h进样10ul。峰面积分别为峰面积分别为3189.6，3253.6，3285.0。计算其峰面积的RSD=2.6%。

3.5重现性实验

取同一批号样品，按方法2.2制备3份供试品溶液。按上述方法测黄芩苷的含量。黄芩苷的含量为27.6mg/g，27.8mg/g，27.9mg/g，平均值为27.7mg/g。

3.6加样回收实验

按方法2.2制得3份溶液，再分别适量的对照品溶液，按上述条件进行进样。

表一加样回收实验

3.7样品测定

按上述的方法对样品（120818）进行测定，依法测定其含量。样品中黄芩苷的含量分别为27.6mg/g。

4结论

采用HPLC法测定三黄片中黄芩苷的含量，色谱条件为甲醇：水：磷酸（47:53:0.2），流速1.0ml/min，检查波长为280nm，结果表明，黄芩苷与其他成分的分离度很好，且出峰时间在18.3min，分析时间短，黄芩苷在0.272--1.36(r=0．9993)范围内与峰面积成良好的线性关系，线性方程Y=4891.5X-66.2，R=0.9992，平均回收率为98.9%，RSD为2.6%，说明该方法准确度较高，精密度好，可用于三黄片中黄芩苷的含量测定。

参考文献

[1]药典委员会，中国药典一部[M].北京：化学工业出版社,2010，476.

[2]李淑盈,郭增军,王利.HPLC测定三黄片中大黄素、大黄酚及黄芩苷的含量[J].中成药.2001，23（6）：16—18.

[3]李文霞，宋平顺.HPLC法同时测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].药学进展，2011，,35（4）：178—180.

[4]田书霞，蒋晔.RP-HPLC同时测定三黄片中4种有效成分的含量[J].中国药学杂志，20062：220—222.

第一作者：侯永春，男，江西中医药大学讲师，主要从事中医药实验研究，通讯地址：江西南昌湾里区江西中医药大学，电话，0791－87118811，邮箱yoyo_828282@163.com

△通讯作者，严孜，女，江西中医药大学讲师，主要从事中医药基础研究，通讯地址：江西南昌湾里区江西中医药大学科技学院，电话，0791－87118022，邮箱yoyo_828282@163.com