酶法测定血浆钾离子的方法学评价

酶法测定血浆钾离子的方法学评价

张淑华

张淑华（安徽省合肥市第三人民医院检验科安徽合肥230001）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)9-0234-02

我科使用BECKMANCX9全自动生化分析仪，RANDOX公司原装钾离子试剂盒（酶法）对血浆钾离子进行测定。为了判断其是否适合和能否满足临床需要，本专题采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）评价方案对酶法测定血浆钾离子的方法进行初步评价。现报告如下。

1材料与方法

1.1反应原理通过钾依赖性丙酮酸激酶催化底物磷酸烯醇式丙酮酸的酶动力学反应检测钾，其产物丙酮酸盐在乳酸脱氢酶作用下与NADH反应生成NAD＋，其在340nm的吸光度下降与钾离子浓度成比例。

1.2实验参数设置终点法。样本量3.0μl，试剂R1100μl，试剂R240μl，波长340nm/410nm；反应方向：下降；计算点：17~27（每两点间隔18秒）；两点定标：4.15mmol/L、6.25mmol/L。

1.3仪器与试剂BECKMANCX9全自动生化分析仪，RANDOX公司原装钾离子试剂盒（酶法），批号：0113J；校准品由上海-申能德赛技术公司提供，批号：60022536；RANDOX公司提供的定值质控血清UN1557、UE1558（人基质血清），批号：306UN/3和187UE/2。AUDICOMAU900全自动电解质分析仪，所用试剂由镇江奥迪康医疗仪器有限公司提供原装配套试剂。

1.4方法

1.4.1线形范围将RANDOX公司定值质控血清UE1558一瓶加去离子水复溶后，按1/5、2/5、3/5、4/5制成一系列不同浓度与原液一起测定。每份重复测定4次，记录结果。从配制关系可计算出每个实验样品内的预期K+浓度（X），各样品的实测值为Y，按NCCLSEP06-A文件进行线性分析。

1.4.2精密度取高、中、低3个不同K+水平样品，每天测定2次，2次间隔时间不少于2小时，每次测定均作双份，按NCCLSEP05-A文件进行精密度评价。

1.4.3回收率测定取新鲜无黄疸、无溶血、无脂浊混合血浆0.9ml加入不同浓度的校准品0.1ml，分别测定3次，取其平均值，并计算回收率。

1.4.4干扰实验将新鲜无黄疸、无溶血、无脂浊混合血浆分成2份，1份加入含TBil校准液（552ummol/L），1份不加。按1/10、2/10、3/10、4/10、5/10的比例制成不同浓度。同样方法加入含TG22.5mmol/L的脂肪乳，使成不同浓度的脂血样本。分别测定3次，取均值。将实际测定值与预期值相比较，以误差大于10%为判断标准，观察黄疸和脂血对该法的影响。

1.4.5比较实验随机选取46份无黄疸、无溶血、无脂浊新鲜病人肝素钠抗凝血浆，分别用酶法和离子选择电极法（ISE）—直接电位法测定，进行相关分析和配对t检验。

1.4.6试剂的稳定性分别用原装配对缓冲液溶解相应的干粉试剂R1和R2，溶解后的应用液R1和R2，分别置4℃，每2天在BECKMANCX9全自动生化分析仪上测定试剂空白吸光度和4.15mmol/L校准品吸光度，连续测定15次，观察吸光度的变化。

1.4.7统计学处理采用SPSS9.0软件进行数据处理。

2结果

2.1线性分析在系列浓度下，各组结果间呈明显的直线趋势。在2～10mmol/L范围内线性良好。

2.2精密度三个样本的CV（%）分别为2.9%、2.46%、2.41%，均小于3.0%。

2.3回收率酶法测定血浆K+的回收率在93.3%~110.0%，平均为101.9%。

2.4干扰实验结果血浆中TBil、TG终浓度分别为281.5ummol/L、11.4mmol/L时，干扰值均在10%允许范围内，对酶法测定结果基本无干扰。

2.5比较实验以离子选择电极法（ISE）测定结果为X，酶法测定结果为Y，两种方法回归方程式Y=0.9765X+0.1695，r=0.9758；酶法与ISE比较有0.9715的比例误差和0.1695的恒定误差。经配对t检验，差异无显著性（t=20.04，P>0.05）。

2.6试剂稳定性酶应用液置4℃性质稳定，30天内试剂空白吸光度和4.15mmol/L校准液吸光度波动不大，分别为-0.0048～0.000和0.3471～0.3621。

3讨论

血钾的检测是检验科非常重要和必须的项目之一。目前国内检测钾离子的方法主要有：火焰光度分析法、离子选择电极法和酶法。三种方法各有利弊。

本专题认为RANDOX公司的酶法检测钾离子试剂盒在BECKMANCX9全自动生化分析仪上使用，其各项系统参数均符合临床要求，并且因自动化程度高、速度快、样本用量少，可与其他生化项目一起在分析仪上测定，而不需另取标本，不仅在工作程序上为检验者带来了方便，减少了工作量，也为患者和临床医护人员带来了方便。但由于进口试剂成本较高，可能成为此方法广泛推广的阻碍之一。

参考文献

[1]叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程[M],第二版.南京:东南大学出版社,1997:179-181.

[2]杨萍,陈建文.三种血液样本对测定K+、Na+、Cl-的影响[J].蚌埠医学院学报,1999,24(4):280.