HPLC法检测罗己降压片中盐酸吡哆辛含量

HPLC法检测罗己降压片中盐酸吡哆辛含量

刘信奎

刘信奎

（齐齐哈尔市食品药品检验检测中心黑龙江齐齐哈尔161006）

【摘要】目的：建立HPLC法测定罗己降压片中盐酸吡哆辛含量。方法：使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH至3.0）-甲醇(85:15)为流动相，检测波长为291nm进行测定。流速1.0mL?min-1，柱温35℃。结果:平均加样回收率盐酸吡哆辛为99.04%，RSD=0.17%(n=9)。盐酸吡哆辛在0.4000～1.600?g范围内，进样量与峰面积值呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论：方法简便、结果准确、重现性好，可为罗己降压片的质量控制提供依据。

【关键词】HPLC法；罗己降压片；盐酸吡哆辛；含量

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）10-0046-03

DeterminationofPyridoxineHydrochlorideinLuojijiangyaTabletsbyHPLC

LiuXinkuiFoodandDrugInspectionTestCenterofQiqihaerCity,HeilongjiangProvince,Qiqihar161006,China

【Abstract】ObjectiveHPLCmethodwasestablishedforthedeterminationofPyridoxineHydrochlorideinLuojijiangyaTablets.MethodsODSC18columnwasused.Themobilephasewas0.04%sodiumpentanesulfonate(adjustedtopH3.0withaceticacid)-methanol(85:15).Thedetectionwavelengthwas291nm.Theflowratewas1.0mL?min-1withthecolumntemperatureat35℃.ResultsTheaveragerecoverieswere99.04%,RSD=0.17%(n=9).ThelinearrangeofPyridoxinewaswithin0.4000～1.600?g(r=0.9999).ConclusionThemethodissimple,accurate,stableandreliable.ItcanbeusedforqualitycontrolofLuojijiangyatablets.

【Keywords】HPLC;Luojijiangyatablets;PyridoxineHydrochloride;Content

罗己降压片为中西药结合复方制剂，该制剂国家质量标准收载于《中成药地方标准上升国家标准部分内科—心系分册》131页；标准编号：WS-11304（ZD-1304）-2002；处方中十二味药含罗布麻叶浸膏43.7g、防己浸膏30.7g、野菊花浸膏28.5g、三硅酸镁15g、硫酸胍乙啶1.3g、硫酸双肼屈嗪1.6g、氢氯噻嗪1.6g、盐酸异丙嗪1.05g、氯氮卓1g、维生素B10.5g、维生素B6（盐酸吡哆辛）0.5g、泛酸钙0.25g、硬脂酸镁1.3g、淀粉4.3g，混匀，用乙醇制成颗粒，低温干燥，压片包薄膜衣制成1000片。该制剂具有平肝、清热、降压功效，临床上常用于治疗高血压病。质量标准【鉴别】项下只针对盐酸异丙嗪、氯氮卓、罗布麻、野菊花处方中的四味药做了鉴别考察；【含量】项下只针对氢氯噻嗪一味药做了含量考察；没有针对盐酸吡哆辛的鉴别考察和含量测定考察；因此本研究课题采用高效液相色谱法测定罗己降压片中盐酸吡哆辛的含量。

1.仪器及试药

Agilent1100全自动高效液相色谱仪（美国安杰伦公司），工作站AgilentChemstationforLCandLC/MSSystems；电子天平BP211D（德国赛多利斯）。

盐酸吡哆辛对照品（中国食品药品检定研究院提供，批号：100119-201103）；甲醇（色谱纯，美国TEDIA）；水(屈臣氏蒸馏水)；戊烷磺酸钠（天津市光复精细化工研究所）；罗己降压片（通化仁民药业股份有限公司提供，国药准字：Z20027079；批号120701、120912、130202）。

2.溶液配置

2.1对照品溶液

精密称取盐酸吡哆辛对照品100.8mg，置100ml量瓶中，加流动相约50ml，超声5min，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为浓对照品溶液，精密吸取浓对照品溶液5.0ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为含量测定项下对照品溶液。

2.2样品溶液

取罗己降压片20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸吡哆辛1mg)，置50ml量瓶中，加流动相25ml，超声5min，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45?m滤膜滤过，即得。

2.3空白对照液

取处方中除盐酸吡哆辛各原料药及对照品，包括辅料，按照处方配比混匀，按2.2样品溶液制备方法制备空白对照溶液。

3.色谱条件及系统适应性试验

色谱柱：Agilent-C18(4.6mm×150mm,5?m)，流动相：0.04%戊烷磺酸钠溶液(用冰醋酸调节pH至3.0)-甲醇(85:15)，流速：1.0?l?min-1，检测波长291nm。

分别取对样品溶液、样品溶液、空白溶液精密量取20?l注入色谱仪，记录色谱图，见图1。空白对照色谱图在对照品峰位置无干扰峰，即本试验条件下对测定无干扰；分离度1.5以上；理论塔板数维生素B6（盐酸吡哆辛）峰计算不低于4000。

分别取对样品溶液、样品溶液、空白溶液精密量取20?l注入色谱仪，记录色谱图。空白对照色谱图在对照品峰位置无干扰峰，即本试验条件下对测定无干扰；分离度1.5以上；理论塔板数盐酸吡哆辛峰计算不低于4000。色谱图见图1。

图1对照品溶液（A）供试品溶液（B）供试品阴性对照溶液（C）空白溶剂（D）色谱图

Fig1HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)sample(B)negativecontrol(C)andblank(D)

1.盐酸吡哆辛峰

4.方法和结果

4.1线性关系考察

分别精密量取浓对照品溶液2.0，4.0，5.0，6.0，8.0ml分别置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。进样10?l，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标进行线性回归，结果表明，两种组分峰面积与进样量呈良好的线性关系。回归方程：盐酸吡哆辛A=30.03+31.69C，r=0.9999，线性范围为0.4～1.6?g。

4.2加样回收率

精取已知盐酸吡哆辛含量的罗己降压片样品溶液9份(批号：120701，含量：101.6%)，相当于将盐酸吡哆辛1mg，分别置于9个50ml量瓶中，精密加入盐酸吡哆辛对照品浓溶液相当于供试品中已知含量的80%，100%，120%各3份(精密量取对照品浓液0.8，1，1.2ml各3份)置于上述9个50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别进行含量测定，计算回收率，测得平均回收率为99.04%，RSD=0.17%(n=9)。

4.3稳定性试验

取同一样品溶液(批号：120701)，在0、5、10、15、24h分别进样10?l，依法测定，表明样品溶液在1d内稳定。

4.4精密度试验

依法取同一对照品溶液连续进样5次，每次20?l，盐酸吡哆辛峰面积RSD=0.5%(n=5)。

4.5样品测定

取对照品溶液和样品溶液用0.45?m微孔滤膜滤过，各进样10?l，按3.1色谱条件进行试验，记录色谱图，读取峰面积值，按外标法计算含量(标示量%)，结果见表。

表三批供试品样品测定结果（n=2）

批号标示量%RSD%

120701101.600.52

120912101.120.23

130202101.900.46

5.讨论

维生素B6即盐酸吡哆辛，化学名：6-甲基-5-羟基-3，4吡啶二甲醇盐酸盐，分子式：C8H11NO3?HCl，分子量：205.64，是一种水溶性维生素，遇光或碱易破坏，不耐高温。一种含吡哆醇或吡哆醛或吡哆胺的B族维生素；为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。临床上应用维生素B6制剂防治妊娠呕吐和放射病呕吐。人类生理日需要量2mg左右，服用过量会引起药物不良反应，会导致感觉性神经变性疾病，使患者产生感觉性共济失调，触觉、痛觉及温度感觉受损，出现走路不稳、平衡失调、反应不灵敏等症状，并常伴有腱反射减低或消失。因此增强该制剂维生素B6的质量控制有着安全性上重要的意义。本文采用RP-HPLC法对该中西药结合的复方制剂里复杂的化学成分及辅料分离、分析，使得测定结果更加准确、可靠、专属性强。

本研究色谱系统采用中国药典2010版收录的维生素B6原料药项下的色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.04%戊烷磺酸钠溶液（用冰醋酸调节pH值至3.0）-甲醇（85：15）为流动相；检测波长为291nm。理论塔板数按维生素B6峰计算不低于4000。有机溶剂浓度和离子对溶液浓度，根据“等同效应”原理，改变有机相甲醇的比例、调节pH值，使得维生素B6在流动相中稳定电离，调节色谱仪与固定相达到良好的分配系数。流速、柱温，还有流动相比例等参数，做验证试验时可根据实验仪器品牌、环境等因素进行调整。罗己降压片，中西药结合治疗高血压一种制剂形式，具有平肝、清热、降压功效，临床常用、疗效确切、稳定。传统中医善用复方，该制剂是促进中医药现代化的代表制剂，提高该制剂产品质量标准势在必行；国家食品药品监督管理总局批准了4家生产企业生产该制剂，生产工艺及人员存在差异，因此更应该提高质量标准，约束生产质量。本文针对维生素B6通过RP-HPLC法，进行分离分析，对含量提供技术依据，对该制剂质量标准提升存在科学技术价值。

【参考文献】

[1]国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].YBZ17272005,2005.[2]GB/T14702-2002,饲料中维生素B6的测定高效液相色谱法[S].北京:中国标准出版社,1997.

[3]杨志斌，毛平生.维生素B6分光光度测定法[J].南昌大学学报：理科版，1993,17（04）：59-63.

[4]李少旦，彭卫芳.反相高效液相色谱法同时测定维生素B6、烟酰胺和泛酸钙。理化检验-化学分册，2009；45（7）：800-802.

[5]化学药品地方标准上升国家标准第十四册[S].2003；172.