探讨4种血样采集管对同型半胱氨酸(Hcy)的测定结果的影响

探讨4种血样采集管对同型半胱氨酸(Hcy)的测定结果的影响

薛李荣1刘元军2

薛李荣1刘元军2

(1山西省吕梁市柳林县人民医院检验科033300；2山西省吕梁市柳林县人民医院普外科033300)

【摘要】探讨4种血样采集管对同型半胱氨酸(Hcy)的测定结果的影响。方法：通过全自动生化分析仪和柠檬酸钠抗凝管、EDTA-K2抗凝管、肝素锂抗凝管、普通血清管，对78人的血液样本进行检测。结果：EDTA-K2、肝素锂抗凝管和普通血清管的检测结果之间无差异；在2-8度保存状态下，Hcy随时间的变化，EDTA-K2抗凝管的Hcy浓度在所有时刻均比普通血清管浓度低，在6h之前，浓度变化不超过5%，保存时间越长，普通血清管的浓度增加明显，变化的幅度加大。及时分离血清血浆与细胞层后，Hcy浓度在0h和7d的检测结果中，浓度反而降低了2%。结论：Hcy测定的准确性在很大程度上取决于样本收集过程中的采血管的选择以及样本的存放时间，需要积累更多的临床经验。

【关键词】采集管同型半胱氨酸(Hcy)测定

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）17-0153-02

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是20世纪30年代由VincentduVigheaud从膀胱结石中分离得到，1969年McCully博士即发现高胱氨酸尿症和胱硫醚尿症可引起全身动脉粥样硬化并可形成血栓，首次提出了同型半胱氨酸与动脉粥样硬化可能有关的观点。Hcy又称高半胱氨酸。是含硫氨基酸在细胞内蛋氨酸脱甲基生成。有关Hcy与冠状动脉硬化心脏病的联系引起人们的广泛的关注，有研究发现Hcy水平与心血管疾病存在密切的联系。临床研究表明,血浆中同型半胱氨酸如下降3μmol/L可使缺血性心脏病危险减少16%、静脉血栓危险减少25%、卒中危险减少24%。美国疾病控制中心2004年曾宣布补充叶酸全美国全年可减少卒中死亡人数31000人、减少心血管病死亡人数17000人[1]。所以从预防及治疗角度讲，重视同型半胱氨酸的检测和研究也是不言而喻的。Hcy测定的准确性在很大程度上取决于样本收集过程中的采血管的选择以及样本的存放时间。现将本次研究检测情况报道如下。

1资料与方法

1.1仪器与试剂本次研究选择的仪器为东芝-120全自动生化分析仪。对Hcy校准，保存校准数据。试剂采用：Hcy检测试剂盒(北京万泰生物技术有限公司，20120804)。抗凝剂的选用；(1)柠檬酸钠；(2)乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)(上海紫一试剂厂)；(3)肝素锂抗凝管(山东奥赛特医疗器械公司)。(4)普通血清管：所用血清管为不加任何促凝剂的红色普通管。

1.2方法检测采用自愿参加的组织方式，获得78人的样本，分别抽4管静脉血，分别存放与不同的抗凝管中，柠檬酸钠抗凝管、EDTA-K2抗凝管、肝素锂抗凝管、普通血清管。对前3种抗凝管实施混匀、编号、分类、静置。做完离心，对4类存放样本的血清、血浆进行全自动分析仪检测，所有结果全部统计记录；随机抽取19人的4种血样，对EDTA-K2抗凝管、普通血清管2种方案进行分别检测。方案1：第一步，吸管一次性采取中段的血清或血浆，第二步，存入1ml离心管并2-8度保存。方案2：第一步，将剩余的血清或血浆未与血细胞层分离的采血管存放在2-8度保存。第三步，方案1、2血样每小时检测1次，检测7次；然后按第2d、3d检测1次。第四步，第7d，分别对方案1、2进行检测。全部检测数据统计记录。

1.3统计学处理采取SPASS17.0和MicrosoftEXCEL2007软件进行分析处理。

2结果

2.1Hcy浓度的比较样本剔除标准：对不符合说明书中试剂盒检测范围(3.0～50μmol/L)的样本不纳入比较范围。Hcy浓度结果：柠檬酸钠抗凝管结果为(13.64±5.84)μmol/L、EDTA-K2抗凝管结果为(17.33±5.89)μmol/L、肝素锂抗凝管结果为(15.46±5.99)μmol/L、普通血清管的结果为(15.77±6.12)μmol/L。柠檬酸钠抗凝管结果与普通血清管结果比较，差异有统计学意义(p=0.0319)，其他2种(EDTA-K2、肝素锂)抗凝管结果与普通血清管结果比较差异无统计学意义(p=0.7341、0.8145)。

2.2时间变化浓度比较(1)针对未分离血清血浆与细胞层的样本数据分析，Hcy随时间的变化，其中Hcy浓度在0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、1d、3d、7d的结果分别为21.96μmol/L、22.035μmol/L、22.75μmol/L、22.86μmol/L、22.94μmol/L、23.01μmol/L、23.56μmol/L、24.98μmol/L、27.34μmol/L、31.57μmol/L，显示EDTA-K2抗凝管的Hcy浓度在所有时刻均比普通血清管浓度低，随着时间的增长，浓度均增加，其中，在6h之前，浓度变化不超过5%，保存时间越长，普通血清管的浓度增加明显。(2)及时分离血清、血浆与细胞层后，Hcy浓度在0h和7d的检测结果分别为(14.73±4.12)μmol/L、(13.25±4.87)μmol/L，差异均无统计学意义(p=0.8965)。

3讨论

同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸代谢过程中去甲基化所产生的重要中间产物。同型半胱氨酸于1932年由DeVgneaud首次发现，1962年Carson和Neil报道某些智力迟滞的儿童与同型半胱氨酸尿症有关，1969年McCully提出了动脉粥样硬化和同型半胱氨酸水平相关的病理学机制，1976年Wilken等人报道冠心病人常有同型半胱氨酸代谢异常，直到1988年，Kang等发现亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)与Hcy的代谢有关以后，Hcy与冠心病的关系引起了人们极大的关注[1]。近年来，许多研究发现同型半胱氨酸与心血管疾病及脑中风有密切关系，体内同型半胱氨酸浓度被视为心、脑及周围血管疾病的独立危险因子。同型半胱氨酸是近年来很热门的研究项目，经研究发现同型半胱氨酸为心血管、脑血管、周围血管系统疾病、先天性畸形等疾病的独立危险因素，与许多疾病的发生有密切的相关性。近年来对同型半胱氨酸与众多疾病关系的研究也取得了突破性的进展，对同型半胱氮酸测定的方法学研究更是突飞猛进。然而就同型半胱氨酸应以何种标本(血清或血浆)测定为佳，文献尚无统一规定[2]。

同型半胱氨酸的检测在美国、英国已较广泛开展，在我国普及尚不够，其原因之一是原有的检测方法较复杂，难以在日常工作中被广泛应用。检测同型半胱氨酸采用高效液相色谱、高效液相电化学检测、气相色谱/质谱法及毛细管电泳法等都需有特殊设备，一般临床实验室开展有困难，以后又相继出现了荧光偏振免疫检测法、酶免疫测定法等，逐步解决了检测中的某些困难，近年来出现的循环酶法可利用自动生化分析仪进行同型半胱氨酸的测定,进一步为普及这项检测创造了良好条件，普及同型半胱氨酸的检测的指日可待[3-4]。

在正常机体内。同型半胱氨酸的生成和清除保持着严格的动态平衡。正常成人Hcy浓度大约为5～15μmol/L，其中约70％～80％与血浆蛋白(主要是清蛋白)结合，约1％以游离硫醇的形式存在于血液循环中，约20％～30％自身结合成同型胱氨酸二聚体，或与其它的硫醇(如半胱氨酸)结合形成混合二硫化物。

血样采集后，由于在全血状态下，血细胞在体外的继续代谢作用，会使Hcy浓度随时间的增长而升高。保存的时间越长，Hcy的浓度水平可升高，需及时分离血浆，尽可能减少上述原因造成的误差。本次研究显示，在2-8度保存状态下，Hcy随时间的变化，其中Hcy浓度在0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、1d、3d、7d的结果，显示EDTA-K2抗凝管的Hcy浓度在所有时刻均比普通血清管浓度低，随着时间的增长，浓度均增加，其中，在6h之前，浓度变化不超过5%，保存时间越长，普通血清管的浓度增加明显，变化的幅度加大。及时分离血清血浆与细胞层后，Hcy浓度在0h和7d的检测结果中，浓度反而降低了2%，主要原因是由于没有血细胞中的Hcy释放到血清中，在加上血清中Hcy的分解，所有其浓度反降。本次同时发现，EDTA-K2、肝素锂抗凝管和普通血清管的检测结果之间无差异。

质量是检验工作的保证。首先要选择质量可靠的试剂盒，才能保证检验结果的准确性，由于检测系统的不同，实验室间检测结果会有差异，目前室间质评尚未开展，所以实验室间应进行比对，积累经验。

参考文献

[1]荣嵘,张爱民,樊喜红.血清同型半胱氨酸与冠心病患者及多项生化指标关系的分析[J].中国实验诊断学,2009,13(13):77-78.

[2]彭军,谭海明.4种不同血样采集管对同型半胱氨酸项目测定结果的影响[J].国际检验医学杂志,2013,34(10):1301-1302.

[3]王清涛,秦晓光.同型半胱氨酸的检测和临床应用[J].中华检验医学杂志,2006,3(29):193.

[4]梁廷中.不同血样采集管对全血微量元素测定的影响比较[J].右江民族医学院学报,2010,4(32):228.