Ezrin蛋白和iNOS在胃癌组织中的表达及相关性分析

Ezrin蛋白和iNOS在胃癌组织中的表达及相关性分析

黎玉容张庆飞丁瑜杨兵(通讯作者)

黎玉容张庆飞丁瑜杨兵(通讯作者)

(广东省深圳市龙岗中心医院消化内科518116)

【摘要】目的探讨Ezrin蛋白和iNOS在正常胃粘膜、不典型增生、胃癌组织中的表达情况，分析其相关性以及与胃癌生物学特性的关系。方法采用免疫组化法检测45例胃癌组织、25例不典型增生胃粘膜和20例正常胃粘膜中Ezrin蛋白、iNOS的表达并加以分析。结果①Ezrin蛋白和iNOS在胃癌组织中的阳性表达率分别为77.8%和73.3%，明显高于正常胃粘膜和不典型增生组(P<0.001)。②Ezrin蛋白、iNOS的表达水平与肿瘤的浸润深度、分化程度及有无淋巴结转移／远处转移有关(P<0.05)，与性别、年龄及肿瘤大小无关(P>0.05)。③Ezrin蛋白与iNOS的表达呈正相关(r=0.403，P<0.05)。结论Ezrin蛋白、iNOS在胃癌中的表达与胃癌的发生、侵袭和淋巴结转移有关，二者联合检测可能成为预测胃癌转移及预后的指标。

【关键词】胃癌EzriniNOS免疫组化

【中图分类号】R730.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）16-0023-03

AnalysisoncorrelationandexpressionofEzrinproteinandiNOSingastriccarcinoma

LIYurong，ZhangQingfei，DingYu，YangBing*(DeptofGastroenterology，LonggangCentralHospitalofShenzhen；*Correspondingauthor，E-mail：yangbing6708@163.corn)

【Abstract】ObjectiveTodetecttheexpressionofEzrinproteinandInducibleNitricOxideSynthase(iNOS)innormalgastricmucosa,dysplasiaandgastriccarcinoma,andtoexploreitsrelationshipwithtumorbiologycharacters．MethodsTheexpressionofEzrinproteinandiNOSin45specimensofgastriccancer，25specimensofgastricdysplasiaand20specimensofnormalgastricmucosaweredetectedbyimmunohistochemistry.Results①Ingastriccarcinoma,thepositiveexpressionofEzrinproteinandiNOSwere77.8%and73.3%respectivelywhichhigherthanthatinnormalgastrictissuesandgastricdysplasia(P<0.001).②TheexpressionofEzrinproteinandiNOSwererelatedtothetumorinvasiondepth，thedegreeofdifferentiationandlymphnodemetastasisordistantmetastasis(P<0.05)，buttheseswerenotrelatedtogender,ageandtumordiameter(P>0.05).③TheexpressionofEzrinproteinwaspositivelycorrelatedtothatofiNOSingastriccarcinoma(r=0.403，p<0.05)．ConclusionTheexpressionofEzrinproteinandiNOSwerecorrelatedtodevelopment，invasionandlymphnodemetastasisofgastriccarcinoma．Jointexaminationofthesetwoparametersisusefulforforecastmetastasisandprognosisofgastriccarcinoma．

【Keywords】GastriccarcinomaEzriniNOSImmunochemistry

埃兹蛋白（Ezrinprotein）及诱导型一氧化氮合酶(inducibleNitricOxideSynthase，iNOS)可在人体多种肿瘤如胃癌、结肠癌、卵巢癌、喉癌等组织中呈高表达。近年来有研究表明Ezrin蛋白和iNOS在肿瘤组织中的表达存在相关性[1]，提示Ezrin蛋白和iNOS可能在肿瘤的发生发展过程中发挥着协同或促进作用。目前国内外有关联合检测胃癌组织中Ezrin蛋白和iNOS表达的研究报道很少。本研究旨在探讨Ezrin蛋白和iNOS在胃癌发生、发展过程中的作用及关系，从而为胃癌的早期诊断及临床防治提供一些理论依据。

1材料与方法

1.1临床资料选取2009年9月至2012年1月在深圳龙岗中心医院收治的45例胃癌患者，除外胃癌家族史、转移性胃癌、胃癌术后、已行放疗、化疗或其他针对肿瘤的特殊治疗的患者。其中男性27例，女性18例，平均年龄(54.22±14．85)岁。另选同期25例不典型增生胃粘膜组织及20例正常胃粘膜组织作为对照组，其中不典型增生组男性14例，女性11例，平均年龄(50.13±12.36)岁，正常组男性10例，女性10例，平均年龄(49.55±15.63)岁。

1.2试剂鼠抗人Ezrin蛋白单克隆抗体、免疫组化MaxVision试剂盒及DAB显色试剂盒购自福州市迈新生物技术开发公司。iNOS兔抗人单克隆抗体购自晶美生物工程。免疫组织化学染色所需的常规试剂：过氧化氢、苏木素、枸橼酸盐缓冲液、磷酸氢二钠、氯化钠、二甲苯等购自北京中杉金桥生物制品有限公司。

1.3实验方法采用免疫组化MaxVision二步法，具体步骤严格按免疫组织化学试剂盒说明书进行操作，DAB显色，苏木素复染后中性树胶封片。以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，以证实的Ezrin蛋白、iNOS染色阳性的切片作阳性对照。

1.4免疫组化结果判断Ezrin蛋白和iNOS阳性表达主要在细胞浆内，呈棕黄色或棕褐色颗粒(图1)。由两名病理医师采用双盲法阅片，每张切片随机观察5个高倍视野，判定标准根据肿瘤细胞显色细胞数和显色强度两个方面判断。按显色细胞数计分：0分，无细胞显色；1分，细胞显色比例<50％；2分，细胞显色比例≥50％；按显色强度计分：0分，无细胞显色；1分，呈淡黄色；2分，呈棕黄色或棕褐色。两者积分乘积小于2分表示阴性、大于或等于2分表示阳性[2]。

1.5统计学处理采用SPSS17.0软件进行统计分析。计量资料，两组之间的均数比较采用两样本t检验，多组间的比较采用单因素方差分析；计数资料比较采用χ2检验；相关性分析采用Spearman相关分析法，以p＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1Ezrin蛋白、iNOS在胃癌组织、不典型增生、正常胃粘膜组织中的表达

Ezrin蛋白及iNOS阳性表达主要位于胃癌组织的细胞浆内，呈棕黄色或棕褐色颗粒(见图1，2)。Ezrin蛋白在胃癌、不典型增生、正常胃粘膜组织中的阳性表达率为77.8%、36.0%和5.0%，三组间差异有统计学意义(χ2=36.481，P<0.001)；iNOS在胃癌、不典型增生、正常胃粘膜组织中的阳性表达率为73.3%、40.0%和10.0%，三组间有统计学差异(χ2=23.600，P<0.001，见表1)。

3讨论

Ezrin蛋白是膜细胞骨架连接蛋白、ERM(Ezrin-Radixin-Moesin)家族成员之一，具有调节细胞骨架肌动蛋白、维持细胞形态、粘附和活性，参与信号转导途径，促进肿瘤侵袭和转移等功能。近年来有很多研究报道Ezrin蛋白在多种恶性肿瘤如宫颈癌[3]、肺癌[4]、胃癌[5]等组织中存在高表达，与肿瘤的侵袭、转移密切相关。王琦等[6]等研究结果表明Ezrin蛋白在胃癌组织中表达显著高于正常对照组，随着组织学分级、临床分期的提高及淋巴结转移，Ezrin表达逐渐升高。本研究结果与其相符，Ezrin蛋白在胃癌组织中的表达明显高于正常胃组织及不典型增生组织，且阳性表达率与胃癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关，表明Ezrin蛋白可能与胃癌的发生发展有关，Ezrin蛋白的高表达可预示胃癌有较高的侵袭性及淋巴结转移倾向。

一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)是合成NO的关键酶。iNOS是生物体内NOS中的一种类型，其活性作用缓慢而持久，可由炎症刺激因子等作用产生大量NO。iNOS诱导产生的NO为其参与病理作用的基础。iNOS参与肿瘤发生、发展的机制仍不十分清楚，目前认为可能与iNOS产生持续高量的NO导致基因突变、促进肿瘤血管生成、抑制肿瘤细胞凋亡等有关[7]。目前已在多种肿瘤组织中检测到iNOS的表达明显高于正常组织，例如在胃癌、前列腺癌、肺腺癌、结肠癌、喉癌、口腔癌表达均是增加的。本研究发现，iNOS在胃癌组织中的表达均显著高于正常胃粘膜和不典型增生组织，且表达水平与胃癌浸润深度、淋巴结转移的发生、肿瘤分化程度显著相关，浆膜外组iNOS的表达率明显高于浆膜下组；淋巴结转移组iNOS的阳性表达率显著高于淋巴结未转移组，与文献报道一致[8]。提示iNOS对胃癌的发生、发展和转移有促进作用，是胃癌发生发展的危险因素之一。

目前少有关于Ezrin蛋白和iNOS在胃癌中相互关系的报道，本研究发现胃癌组织中Ezrin蛋白和iNOS的表达水平呈正相关（r=0.403，P＜0.05），我们推测，Ezrin蛋白可能通过iNOS调节NO的生成或存在着相互表达调控机制而对胃癌的生成、浸润、转移等生物学行为发挥作用，二者在胃癌的发生发展中可能具有相互协同和促进作用，但其相互作用机制尚待进一步研究。联合检测胃癌组织中Ezrin蛋白和iNOS的表达水平，对胃癌的早期诊断、临床治疗、判断预后有一定的指导意义。

参考文献:

[1]米洋，岳卓立，李连贺，等．Ezrin和Inos在喉癌组织中的表达及相关性研究[J]．疑难病杂志，2011，10(3)：194-196.

[2]张庆飞，杨兵.Ezrin和c-Met在胃癌组织中的表达及意义[J]．山西医科大学学报，2012，43(4)：257-259.

[3]TanJ,ZhangC．QianJ.ExpressionandsignificanceofSix1andEzrinincervicalcancertissue[J].TumorBiol,2011,32:1241-1247.

[4]韦唯，茅乃权．Ezrin功能特点及其肺癌关系的研究进展[J]．医学综述，2010，4(16)：1019-1023.

[5]ZhaoJ,ZhangX,XinY.Up-regulatedexpressionofEzrinandc-Metproteinsarerelatedtothemetastasisandprognosisofgastriccarcinomas[J].HistolHistopathol,2011,26:1111-1120.

[6]王琦，梁涛，张更棉，等．ERK-1及相关蛋白在胃癌中的表达及相关性分析[J]．中西医结合杂志，2013，22(9)：916-918.

[7]魏房，谢强，张德巍，等．iNOS/NO与胃癌关系的研究进展[J]．现代肿瘤医学，2013，21（9）：2121-2122.

[8]王鹏，郭琳，王强，等．胃癌中Maspin与iNOS的相互关系及临床病理意义[J]．东南大学学报（医学版），2010,29（6）：635-638.

本论文为深圳市龙岗区科技计划项目，项目编号：YS2011104