US-2100干化学分析仪与UF-100尿沉渣分析仪联合检测尿白细胞复检规则的初步制定及假性原因分析

US-2100干化学分析仪与UF-100尿沉渣分析仪联合检测尿白细胞复检规则的初步制定及假性原因分析

黄小天张春平

黄小天张春平（四川省人民医院检验科四川成都610072）

【摘要】目的探讨干化学试纸法与全自动尿沉渣分仪法联合检测尿液白细胞(WBC)复检规则的制定及假性原因分析。方法对病人的尿液标本按照仪器说明进行SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪的检测和显微镜检查，并对检测结果进行统计分析。结果当SysmexUF-100全自动尿沉渣分析与SysmexUS-2100尿干化学分析结果不符时以及当BAC与NIT其中有任意一样阳性的，需对这些异常标本做显微镜镜检来进行确认复查试验。结论临床工作中对于使用SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪的实验室，通过对白细胞复检规则的制定能够降低漏检率、减轻复检工作量、提高工作效率。

【关键词】尿沉渣定量分析仪尿干化学分析仪显微镜镜检白细胞

目前全自动尿液分析仪已广泛应用于临床，全自动尿液分析仪与干化学尿液分析联合检测方法现已为我们增加工作效率，准确性及灵敏度也有大大的提高，但在实验过程中对发现时常出现假阴性或假阳性情况，尤其是白细胞(WBC)还未有一个确切的原因。但目前干化学试纸法与全自动尿沉渣分仪法联合检测尿液白细胞的筛查现无统一规则，如果不在本室制定严格的复检规则可能会导致错误的报告及漏检。因此根据本室的SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪的性能制定出合理的尿白细胞复检规则，对保证检测结果的质量和提高工作效率非常重要。现已SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪两种仪器结合并以手工的尿液沉渣镜检方法进行验证，并对WBC几种假性原因做一个分析，现报告如下：

1对象与方法

1.1标本来源

2008年3月2008年4月随机收集我院的门诊病人清洁中段尿标本共2589例

1.2仪器与试剂

SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪以及Sysmex公司提供的相关配套的试剂、试纸条；日本OLYMPAS光学显微镜。

1.3检测方法

随机收集我院门诊病人尿液，用一次性无菌尿样采集杯收集清洁中段尿。

SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪每天开机检测前先对仪器进行空白测定，并用配套质控液做质控试验，质控合格后开始检测样本。SysmexUS-2100尿干化学分析仪：每天均做质控,质控合格后开始检测样本.取被检清洁中段尿标本10ml于洁净试管中，将试条充分浸入尿液中(时间为1s),取出置干化学分析仪上进行测定。人工显微镜法：按《全国临床检验操作规程》规定方法操作。操作如下：取刻度离心管，倒入混匀新鲜尿液10ml，用1200-1300r/min转速，离心5min。弃上清尿液留下0.2ml沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有形成份充分混匀。取尿沉渣0.02ml，滴在载玻片上，用18mm*18mm的盖玻片覆盖后镜检。

1.4暂定规则的制定;

利用SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪自身的报警系统提示对白细胞结果异常进行判断，并结合SysmexUS-2100尿干化学分析仪进行判断。暂定US-2100干化学分析仪与UF-100尿沉渣分析仪联合检测尿白细胞复检规则。由于UF-100细菌BAC测定值>8000/μl提示尿路感染[1]。当尿路感染时大肠埃希菌等革兰氏阴性杆菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐使之阳性，而尿路感染也会使得尿液中的白细胞升高。因此设计规则时把细菌量BAC>8000/μl和NIT也做为WBC的筛查指标。把BAC和/或NIT阳性，而两种仪器均阴性的设计为规则5、6、7（表1）。

表1暂定US-2100干化学分析仪与UF-100尿沉渣分析仪联合检测尿白细胞复检规则

注：US干化学结果WBC±以上为ｕｓ阳性，UF尿沉渣结果WBC＞15.4/ｕｌ为UF阳性；

US亚硝酸盐NIT阳性±以上为ｕｓ阳性，UF尿沉渣结果细菌量＞8000为UF阳性。

1.5复检规则评估应用手工镜检的结果对暂定复检规则进行统计学评估，对评估的真阳性、假阳性、真阴性、假阴性进行定义（表2）

表２统计学评估的定义

2结果

2.1规则评估应用规则的2589个标本的结果，对暂定复检规则的真阳性、假阳性、真阴性、假阴性率进行评估（表３）。

表３暂定复检规则的阳性率

2.2按形镜检态学评估将所有的手工镜检结果统计分析，根据离心镜检结果白细胞超出5/HP视为阳性。评估结果触发规则1共347例，假阳性21例,假阳性率：6.05%。触发规则2共1253例，真阴性1250例，真阴性率：100%。触发规则3共231例，假阳性226例,真阳性5例，假阳性率为：97.84。触发规则4共758例，真阳性100例，真阳性率:100%。

3讨论

3.1SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪运用激光和流式细胞计数对尿中有形成分进行直接鉴别和计数。将染色的尿有形成分液路聚焦使其通过鞘流细胞室，用激光光束照射每个有形成分，产生散射光信号，尿液有形成分发出荧光，同时对散射光和荧光的变化进行测定和分析。流式细胞入口两端电极间的恒定直流电使有形成分通过时产生与细胞大小呈正比的电阻变化。通过测定前向散射光、荧光的波幅和强度及电阻抗的变化报告12个参数，对细菌、白细胞等5种有形成分进行分析。从而对尿液标本中的细菌量进行技术，可用于临床尿路感染的筛检。从而对尿液标本中的细菌量进行技术，可用于临床尿路感染的筛检。SysmexUS-2100尿干化学分析法检测尿液中的白细胞的原理是利用中性粒细胞浆内的酯酶，水解试带膜块中含色原的酯类，释放出的色原与重氮盐反应形成呈色的缩合物，其颜色深浅与细胞的多少成比例。使得试纸条只是与中性粒细胞非特异性酯酶发生反应,而不与淋巴细胞反应,各种原因引起的淋巴细胞尿时会出现假阴性结果。伴随着尿路感染，尿液中的白细胞数会大量增高，大多数尿路感染由大肠埃希菌引起的，当尿液中有大肠埃希菌增殖时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，可导致US-2100干化学分析的亚硝酸盐NIT阳性。SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪运用荧光核酸染色和流式细胞检测技术快速、有效的改善人工主观识别的精确性和重复性不理的问题、降低劳动力等特点，但仍然不能避免有假阳性或假阴性的存在，SysmexUS-2100尿干化学分析仪使用的干化学法也有一定局限性很多药物等因素容易对其造成干扰。因而，有必要对两种仪器检测WBC的符合率进行探讨，并制定必要的WBC复检规则。

3.2对各暂定规则进行形态学评估发现出现假阳性最多的规则是规则1和规则3，出现假阳性分别为21例和226例。估计为仪器进行相关检测与形态学的判定标准有所差异，原因有待进一步探讨。本次研究发现仅通过对SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪进行判断有5例漏检，占总标本数的0.2%，主要为SysmexUF-100尿沉渣分析仪只能对尿中完整细胞有形成分进行检测，尿在膀胱内存储时间过长或标本放置时间过长，导致WBC破坏成碎片溶解，难以看到完整细胞，而破损的WBC则不能被UF-100尿沉渣分析仪检测出来，造成结果的假阴性。其假阳性率有21例，占标本总数的0.81%。由镜检我们可以发现大量的上皮细胞增多尤其是小圆上皮细胞。由于有一些小圆上皮细胞的产生的散射光信号与WBC产生散射光信号相似。当尿液中存在大量小圆上皮细胞时，就有可能使得UF-100尿沉渣计数的白细胞假性增高。仅通过对ysmexUS-2100尿干化学分析仪进行判断有326例漏检，占标本总数的12.59%。在试验过程中我们发现高糖与高蛋白可使WBC阳性率降低，这是由于蛋白与模块结合过程中的某些中间产物或氧化酶氧化葡萄糖产生的过氧化氢抑制WBC浆内酯酶活性及葡萄糖影响氧化有关［3］。以及尿中有含头孢霉素Ⅵ、先锋，庆大霉素，四环素，硼酸，草酸浓度较高时也会抑制粒细胞酯酶的活性常造成US-2100干化学分析仪结果的假阴性。其假阳性率有226例，占标本总数的8.7%我们发现尿中含甲醛，呋喃坦啶和大量胆红素时则可引致使WBC成假阳性。由镜检我们可以发现大量的白细胞，结果与UF-100尿沉渣结果符合。故白细胞审核时应联合两种仪器进行判定降低假阴性率，防止漏检。当SysmexUF-100全自动尿沉渣分析仪与SysmexUS-2100尿干化学分析仪同时为阳性或阴性（BAC和NIT均为阴性）时。我们可以发现镜检结果与两者结果完全相符，假阳性率与假阴性率均为0.0%。所以我们认当两种仪器检测结果均为阳性或阴性（BAC和NIT均为阴性）时可不需镜检复查。

3.3BAC阳性，NIT阴性时，真阳性率占标本总数的0.2%。干化学对NIT的检测有很多原因可导致其假阴性得出现。1.亚硝酸盐的检测与菌种类有着密切的关系，由于细菌种类的不同有些细菌并不能产生还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐，从而造成硝酸盐试验的假阴性；2.当患者使用利尿剂可使尿液中硝酸盐含量降低导致尿亚硝酸盐试验出现假阴性。3.尿液中含有硝基呋喃可能降低亚硝酸盐反应的灵敏性导致尿亚硝酸盐试验出现假阴性。4.病人尿液中含有大量维生素C时，维生素C竞争性抑制作用使亚硝酸盐试验可出现假阴性结果。当BAC阴性，NIT阳性时，真阳性率占标本总数的0.08%。当BAC和NIT同时阳性时真阳性率占标本总数的0.4%，我们通过镜检可以发现尿液中白细胞数也明显增高。当我们在规则5.6.7出现时为防止标本的漏检应该对此进行手工镜检复查。

3.4通过以上的评估以及假性原因的分析，结合我室标本量大的特点，对两者的优缺点进行综合分析，对站定规则进行调整，现规则调整如下：去掉规则2，4当SysmexUF-100全自动尿沉渣分析与SysmexUS-2100尿干化学分析结果不符时以及当BAC与NIT其中有任意一样阳性的，需对这些异常标本做显微镜镜检来进行确认复查试验，用显微镜沉渣检查可以弥补仪器法的不足，并结合三者出报告。这样不仅使得检测结果的有很高的准确性和可靠性、减少仪器误差，还大大的减少了离心、分样、镜检的数量有效的降低了工作量，为临床诊断、鉴别诊断、疗效观察及预后提供可参考的实验数据。

参考文献

[1]OkadaH,Sakai,Detectionofsignificantbacteriuriabyautomatedurinalysisusingflowcytometry[J].ClinMicrobio,2000:2870-2872.

[2]王海燕.干化学法尿白细胞假阴性原因探讨[J].陕西医学检验杂志,2000,15（1）：37.

[3]丛玉隆，马俊龙，李之莲.尿沉渣测定四种方法的参考值范围调查[J].中华医学检验杂志，1997，20(4)：229,231.