浅析喉鳞癌微环境乏氧的客观评估及有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响

浅析喉鳞癌微环境乏氧的客观评估及有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响

武永胜徐珏张维明阎亮

湘乡市人民医院湖南湘潭411400

摘要：目的探讨喉鳞癌微环境乏氧的客观评估及有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响。方法选取我院在2012年9月到2013年9月收治的16例喉鳞癌患者病理组织切片为研究对象，随机分为两组，即对照组和观察组，每组各8例。在细胞培养中，对照组采用低氧培养，观察组采用常氧培养，对比两组Hep-2细胞和HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果①观察组的Hep-2细胞抑制率和凋亡率均显著低于对照组（P＜0.05）；②两组HIF-RNAi-Hep-2细胞增值抑制率差异较小（P＞0.05），但观察组HIF-RNAi-Hep-2细胞凋亡率显著低于对照组（P＜0.05）。结论有效改善乏氧，可以有效降低喉鳞癌患者Hep-2细胞和HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率，效果显著，值得临床推广。

关键词：喉鳞癌；乏氧；化疗抵抗

头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）是一种比较常见的恶性肿瘤，据统计发现，该疾病在全球的发病人数超过50万/年[1]。从临床治疗来看，喉鳞癌对放化疗的敏感度较低，且疗效不甚理想。其中，治疗抵抗和复发一直是摆在喉鳞癌治疗的重大问题。乏氧由肿瘤细胞增殖与血液供应平衡遭到破坏导致，属于实体瘤的重要病理特诊之一[2]，需要采取相应的措施予以解决。本文选取我院在2012年9月到2013年9月收治的16例喉鳞癌患者病理组织切片为研究对象，评估喉鳞癌微环境乏氧以及分析改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响，现将研究内容报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取我院在2012年9月到2013年9月收治的16例喉鳞癌患者病理组织切片为研究对象，所有患者术前均经放化疗处理。采用随机抽样的方法，将研究对象均分成对照组和观察组，每组各8例。对照组8例研究对象中，男6例，女2例；年龄42-79岁，平均年龄为（61.39±9.27）岁。观察组8例研究对象中，男5例，女3例；年龄43-80岁，平均年龄为（62.37±9.53）岁。两组在性别、年龄等一般资料的对比上无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1细胞培养

采用体外培养人喉鳞癌Hep-2细胞和HIF-RNAi-Hep-2细胞，在培养的过程中，采用含有10％小牛血清的RPMI-1640完全培养基进行培养。观察组的细胞在低氧环境下培养12h，然后加入3μg/ml的DDP继续培养，时间为24h。对照组细胞在常氧环境下培养12h，并且不采用DDP干预。

1.2.2监测方法

细胞培养结束后，采用0.25％胰酶消化收集细胞，并且用PBS对其进行漂洗3次，然后离心5min收集细胞，将70％冷乙醇1ml加入其中进行固定，置于4℃环境下过夜。在检测前，将乙醇去除留取细胞，加入10％鸡红细胞作为内参标准，加入RNA酶80μl，碘化丙啶150μl将其搅拌均匀，在4℃环境下避光反应半小时，接着上机检测。

1.3观察指标

观察四组研究对象Hep-2细胞和喉鳞癌HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率。

1.4统计学方法

采取统计学软件SPSS19.0对上述汇总数据进行分析和处理，计数资料采取率（%）表示，组间率对比采取X2检验；计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验，对比以P＜0.05为有显著性差异和统计学意义。

2结果

2.1两组Hep-2细胞和喉鳞癌增殖抑制率和凋亡率

经统计结果显示，观察组的Hep-2细胞抑制率和凋亡率均显著低于对照组，组间对比差异显著具有统计学意义（P＜0.05），详见表1。

3讨论

作为头颈部常见的恶性肿瘤之一，喉癌约占全身恶性肿瘤的5.7％-7.6％，对人类的健康造成严重的威胁[3]。在喉癌的众多类型中，以鳞状细胞癌最为常见，发病率约占喉癌的93％-99％[4]。在临床治疗中，由于喉鳞癌具有发病隐匿、侵袭性强等多方面的特点，给临床治疗带来很大的困难。

据大量研究证实，实体肿瘤中存在乏氧细胞，并且经多种路径产生肿瘤耐药，比如诱导P-糖蛋白过表达、诱导细胞内谷胱甘肽增多、诱导多药耐药基因（MDR）产生等，从而对喉鳞癌的化疗治疗产生抵抗作用[5]。因此，为了有效改善这一状况，需要采取相应的措施予以处理。DDP具有较强的抗癌作用，目前被广泛应用于头颈部恶性肿瘤的治疗中，主要机理是通过使DNA发生链间及链内交联，从而在体内形成DDP-DNA复合物，对DNA的复制产生抑制作用，或者与核蛋白及胞浆蛋白结合，对肿瘤细胞的生长产生抑制作用[6]。但是，在实际应用中，由于实体瘤中乏氧的存在，影响治疗效果。

在本文研究中，观察组中在低氧条件下进行培养，对照组没有进行DDP干预，结果显示，观察组的Hep-2细胞、HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率均有所改善，表明低氧可抑制细胞凋亡的发生，促使细胞对DDP产生耐药作用，进而有效改善患者化疗抵抗的作用。

综上所述，在喉鳞癌的临床治疗中，可以通过补氧、行DDP干预等方法来改善肿瘤组织的乏氧，从而大大改善化疗作用。

参考文献：

[1]孙旭.HIF-1α和c-met在喉鳞癌中的表达及其与微血管密度的关系[D].郑州大学,2011.

[2]屈永涛.低氧微环境对体外培养hep-2头颈鳞癌细胞系CSC增殖与分化的影响[D].河北医科大学,2011.

[3]张再兴.喉鳞癌相关蛋白质组学研究及肿瘤标志物的鉴定[D].北京协和医学院,2011.

[4]张海琴.ColI、ColⅣ、Fn在喉鳞癌中的表达及其与肿瘤的临床关系[D].青岛大学,2009.

[5]董凯峰,王宝山,修贺明等.HIF-1α与LOX在人喉鳞癌中表达的相关性研究[J].西南国防医药,2010,13（09）:943-946.

[6]徐鸥.喉鳞癌微环境乏氧的客观评估及有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响[D].河北医科大学,2012.