蚁芪胶囊的质量标准研究

蚁芪胶囊的质量标准研究

毛玲

毛玲(湖南衡阳市中医医院湖南衡阳421001)

【摘要】目的建立蚁芪胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)对处方中的黄芪和三七进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中黄芪甲苷的含量。结果TLC法可检出黄芪、三七的特征斑点；黄芪甲苷的线性范围为1.042～10.42μg(r=0.9999)，平均回收率为97.81%(RSD=1.17%，n=6)。结论该质量标准可有效控制蚁芪胶囊的质量。

【关键词】蚁芪胶囊质量标准薄层色谱法高效液相色谱法

蚁芪胶囊是由黄芪、黑蚂蚁、板蓝根、重楼、三七和鹅不食草6味中药制成的复方制剂，具有益气健脾，清热解毒，活血，祛瘀通络的功效。用于气虚血瘀所致胸痹胸痛，心悸气短等症，以及冠心病、心绞痛有上述见症者；也可用于急、慢性乙型肝炎、乙肝病毒携带者。为保证蚁芪胶囊的质量，本研究采用薄层色谱(TLC)对方中黄芪和三七进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法(HPLC)对方中君药黄芪的主要有效成分黄芪甲苷进行了含量测定。

1仪器与试药

1.1仪器

Waters高效液相色谱系统Waters2695泵，Alltech500型ELSD检测器，Empower色谱处理系统。

1.2试药

蚁芪胶囊及阴性样品（衡阳市中医医院制剂室），三七对照药材、黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所），硅胶G（青岛海洋化工厂），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2定性鉴别

2.1黄芪的鉴别[1-5]

取本品内容物4g，加甲醇25mL，加热回流1h，滤过，滤液加于中性氧化铝柱（100-120目,5g,内径为15mm）上，用40%甲醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20mL，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1毫升含1mg的溶液，作为对照品溶液。再取缺黄芪的阴性样品，同法制成阴性溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述3种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。见图1。

2.2三七的鉴别[6-11]

取本品内容物5g，加无水硫酸钠适量，加甲醇30ml，密塞，浸泡15分钟，超声提取15分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水使溶解，置D101型大孔树脂柱（内径1.5cm×柱高10cm）上，先用水洗脱至洗脱液无色，再用95％乙醇洗脱至树脂无色，收集乙醇洗脱液，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液；另取三七对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取缺三七阴性样品同法制成阴性溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述溶液各1ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙脂-甲醇-水（7:30:11:5）下层液，下层液-甲醇（5:2），再加2滴醋酸为展开剂，展距为8cm展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇试液,在110℃加热至斑点清晰，供试品色谱中，在与三七对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图2。

3含量测定[12,13]

3.1色谱条件与系统适应性

色谱柱MerkRP-18e(5μm)250mm，柱温30℃，流动相乙腈-水(30:70)，流速1.0ml/min，检测波长203nm。蒸发温度100℃，载气流量2.5L/min。理论板数按黄芪甲苷峰计算不低于4000。

3.2对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

3.3供试品溶液的制备

取本品内容物10g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨试液充分，洗涤2次，每次50ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.4阴性溶液的制备

取缺黄芪的阴性样品，按3.3项下方法制备，即得。

3.5系统适用性实验

分别精密吸取黄芪甲苷对照溶液、供试品溶液、阴性溶液各10μL注入高效液相色谱仪，测定，色谱图见图3～5。黄芪甲苷的保留时间约为24min，与其他组分分离良好（R>1.5），阴性溶液色谱图在黄芪甲苷峰位置无干扰。

3.6方法学考察

3.6.1线性关系考察精密称取黄芪甲苷对照品5.21mg，用甲醇定容至10ml，制成含黄芪甲苷0.521mg/mL的溶液，作为对照品溶液。精密吸取对照品溶液2、8、10、12、16、20μL注入高效液相色谱仪，按拟定色谱条件测定峰面积，以对照品进样量X(μg)为横坐标、峰面积值Y(微伏*秒)为纵坐标，进行线性回归，黄芪甲苷，回归方程分别为Y=1553564X-6457.3(r=0.9999)，线性范围分别为1.042～10.42μg。

3.6.2精密度试验

精密吸取对照品溶液10μl，连续重复进样6次，黄芪甲苷的峰面积值的RSD为0.82%(n=6)，表明本测定方法精密度良好。

3.6.3稳定性试验

取同一供试品溶液，分别在0，1，2，4，6，8小时进样10μl测定，以峰面积计算得黄芪甲苷的峰面积RSD为1.42%(n=6)，表明供试品溶液中黄芪甲苷在8小时内稳定。

3.6.4重复性试验

取同一批号样品(120303)6份，精密称定，按3.3项下方法制备，进样10μl测定，测得黄芪甲苷0.35mg/g，RSD为2.37%(n=6)，表明本测定方法具有良好的重复性。

3.6.5准确度试验

采用加样回收法，取具塞锥形瓶6只，分别精密加入含黄芪甲苷对照品0.804mg/ml，的对照品溶液1ml，水浴挥干溶剂，再取已知含量样品(120303)，精密称取2g，6份，分别置上述6只锥形瓶中，按3.3项下方法制备，进样10μl测定，测得黄芪甲苷回收率97.81%，RSD=1.17%(n=6)。结果见表1。

表1准确度试验结果

结果表明，本测定法具有较好的回收率。

3.7样品测定

取三批样品(110518、110602、110817)，按3.3项下方法制备，分别精密吸取10μl注入液相色谱仪，测定样品中黄芪甲苷的含量。结果，3批样品的黄芪甲苷含量分别为每克0.35、0.32、0.38mg。

4讨论

黄芪和三七的薄层色谱鉴别方法操作简便，结果准确，重现性好，斑点清晰，阴性无干扰。黄芪为方中君药，因此控制黄芪的质量能确保蚁芪胶囊的临床疗效。黄芪药材按中国药典2010年版I部黄芪含量测定项下检验，含黄芪甲苷总量为0.031%。蚁芪胶囊的规格为每粒0.25g，处方1000粒胶囊所含的黄芪药材量为40g，我们测得胶囊内容物含黄芪甲苷量为0.35%，经过计算，与黄芪药材(含黄芪甲苷0.35%)比较，黄芪甲苷的转移率为71%。实验结果表明，本文测定黄芪甲苷的方法稳定性、重现性好，精密度、回收率都较满意，因此，能有效控制蚁芪胶囊的质量。

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