乳腺癌手术标本BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增的临床意义

乳腺癌手术标本BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增的临床意义

阮建波康东平

阮建波康东平（东莞市太平人民医院广东东莞523901）

【摘要】目的:研究乳腺癌患者乳腺癌手术标本中乳腺癌易感基因1(breastcancersusceptibilitygene1，BRCA-1)蛋白表达、原癌基因HER-2的基因扩增与蛋白表达及其与临床病理特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学和显色原位杂交的方法，检测乳腺癌手术切除肿瘤组织中的HER-2和BRCA-1蛋白表达以及HER-2基因扩增情况，对这两个基因的表达与临床相关病理特征之间的关系进行分析。结果:BRCA-1和HER-2蛋白表达在不同组织类型中差异无统计学意义，但在不同肿瘤大小、不同组织分级和有无淋巴结转移中差异有显著性(P<0.05)。BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增率呈负相关。结论:BRCA-1和HER-2蛋白表达对乳腺癌的发生发展具有一定作用,检测BRCA-1和HER-2蛋白表达在乳腺癌的早期诊断、判断生物学行为、预测预后中有重要意义。另外BRCA-1与HER-2可能存在相关性，须进一步研究。

【关键词】乳腺癌；BRCA-1；HER-2；蛋白表达；基因扩增

【中图分类号】R710【文献标识码】A【文章编号】1672-2523（2011）03-0036-02

乳腺癌是指发生于乳腺导管上皮细胞的恶性肿瘤，是女性常见的肿瘤之一，约占全身恶性肿瘤的7%-10%。我国近20年来发病率有增高趋势，有可能超过宫颈癌而居女性恶性肿瘤的首位。近年来，随着分子生物学研究的迅速进展，肿瘤发生基因学说研究突飞猛进，使得乳腺癌的早期诊断和治疗有了希望。目前，原癌基因-2(HER-2)、乳腺癌易感基因（BRCA-1和BRCA-2）是研究较多的三种致癌基因，它们对于乳腺癌的发生、发展、诊断和治疗具有十分重要的作用。本研究组采用免疫组织化学和显色原位杂交的方法，检测乳腺癌手术切除肿瘤组织中的HER-2和BRCA-1蛋白表达以及HER-2基因扩展情况，对这两个基因的表达与临床相关病理特征之间的关系进行分析。

1材料与方法

1.1临床资料及标本收集东莞市太平人民医院2007年6月到2008年12月经病理证实的乳腺癌患者手术切除标本124例，患者年龄38岁～67岁，平均52岁。所有标本采用WHO分类标准复查切片，记录患者年龄、肿瘤大小、病理分型、分级、淋巴结转移、TNM分期等临床病理资料。手术切除标本经10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm切片4张，分别用于HER-2和BRCA-1的蛋白质HE和免疫组化染色，6μm切片1张，用于HER-2的DNA显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization，CISH)。

1.2主要试剂和方法

1.2.1免疫组化染色BRCA-1和HER-2鼠抗人单克隆抗体及试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，切片常规二甲苯脱蜡、梯度酒精水化，3%H2O2去除内源性过氧化物酶，高压锅修复抗原，加入鼠抗人BRCA-1和HER-2单克隆抗体(稀释度1∶50),4℃过夜，加入酶标抗鼠聚合物，室温30min，DAB反应显色，苏木精对比染色，中性树胶封片。光镜观察阳性信号，阳性信号为棕黄色，正常上皮定位于胞核，异型上皮定位于胞核、胞浆、胞核胞浆。每例免疫组化染色切片由两名病理医师双盲观察。结果根据阳性细胞数分级:(-):阳性细胞数0；(1+):阳性细胞数<25%；(2+):阳性细胞数25%～50%；(3+)阳性细胞数50%～75%；(4+):阳性细胞数>75%。

1.2.2CISH法检测HER-2基因扩增原位杂交、HER-2CISHTM检测试剂盒(美国Zymed公司)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡切片，常规脱蜡水化，加热预处理液煮沸20mim，胃蛋白酶消化10-20min，脱水、晾干；每片滴加10μL探针，杂交，95℃变性5min后，37℃湿盒孵育过夜，漂洗，滴加封闭液室温封闭10min，滴加鼠抗地高辛抗体30min，PBS/Tween20漂洗，滴加HRP抗鼠抗体30min，PBS/Tween20漂洗，DAB显色30min，复染苏木精，烤干，中型树脂封片。结果判定标准:HER-2基因扩增定位于细胞核中，呈棕黄色的点或簇，>50%的癌细胞中HER-2基因扩增信号>10个点或呈大簇为高扩增：>50%的癌细胞中HER-2基因扩增信号5～10个点或呈小簇为低扩增：>50%的癌细胞中，HER-2基因扩增信号为1～5个点为无扩增。

1.3统计学方法采用统计软件SPSS13.0进行数据分析。统计数据采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

表1BRCA-1及HER-2蛋白的表达、HER-2基因扩增与临床病理特征之间的关系

2结果

2.1BRCA-1及HER-2蛋白的免疫组化结果如表1显示，BRCA-1及HER-2蛋白的表达与临床病理特征之间存在密切关系，不同大小、组织级别和淋巴结转移的乳腺癌的BRCA-1及HER-2表达率均存在统计学差异性（P<0.05），但在不同组织学类型中BRCA-1及HER-2表达率则无统计学差异性（P>0.05)。

2.2BRCA-1蛋白表达与HER-2蛋白表达的关系经相关分析，提示BRCA-1蛋白的表达与HER-2呈负相关且差异有统计学意义(r=-0.579，P<0.001)。

2.3BRCA-1蛋白表达与HER-2基因扩增率成正相关，且差异有统计学意义(r=0.154，P<0.005)。

3讨论

乳腺癌的病因是国内外学者非常重视的研究课题，大量的实验结果支持BRCA-1基因为抑癌基因，其抑癌作用是呈隐性存在的。当基因发生突变时所编码的蛋白质表现为功能降低或丧失，它的失活使细胞分化受阻，失去正常分化对增殖的作用，从而导致细胞恶变和肿瘤的发生［1］。

本研究结果显示BRCA-1表达阴性或弱阳性的乳腺癌例子在组织分级和淋巴结转移发生率均高于BRCA-1表达阳性者，提示相对于BRCA-1阳性表达的乳腺癌而言，BRCA-1表达阴性者更具有更强的增殖活性。这可能导致BRCA-1阴性的乳腺癌具有更为恶性的生物学行为。

研究发现，BRCA-1相关性乳腺癌有着类似于三阴性乳腺癌（ER、PR与HER-2均为阴性的一类乳腺癌）的表型和分子病理特征，多数学者认为二者之间可能存在一定的相关性。有研究表明，80%-90%BRCA-1相关性乳腺癌为三阴性乳腺癌。本研究发现，BRCA-1相关性乳腺癌中HER-2阳性率低于非BRCA-1相关性乳腺癌。这个结果提示，在BRCA-1相关性乳腺癌中，HER-2是一个相对独立的预后指标。至于BRCA-1是否能作为一个独立的预后指标，这仍是个有争议的问题［2］。根据BRCA-1相关性乳腺癌的病理学特点，组织分化性差和ER阴性提示预后差，但HER-2阴性又是预后好的指标。根据报道，BRCA-1通过调节下游基因(如VEGF)进一步对肿瘤的增殖发挥作用［3］。而HER-2也可通过抑制凋亡、上调血管内皮生长因子和血管通透性因子，协助形成新生血管，帮助肿瘤细胞的浸润和肿瘤的生长［4］。但BRCA-1与HER-2之间可能的调节机制尚不清楚。本实验结果初步显示，BRCA-1表达与可HER2基因有关，但具体机制仍需进一步探讨。

HER-2基因，是人类原癌基因，定位于人染色体17q21。HER-2基因的表达产物c-erbB-2蛋白属于人类表皮生长因子受体(EGFR)家族中的第2个成员，是具有刺激生长活性的跨膜酪氨酸激酶受体，包括细胞内区、跨膜区和细胞外区3部分，在细胞的增殖、分化、迁移、黏附、转化、凋亡中起调控作用。HER-2基因过表达可导致乳腺上皮细胞的恶性转化，增加乳腺癌细胞的侵袭性，并与淋巴结转移、激素受体阴性状态及预后差有关［5］。本研究结果支持以上结论,检测BRCA-1和HER-2蛋白表达在乳腺癌的早期诊断、判断生物学行为、预测预后中有重要意义。

参考文献

［1］王玉林,赵荣宇,张丽芝.BRCA-1和BRCA2在乳腺疾病中的表达和意义［J］.中国医师进修杂志,2005,28(5):13-15.

［2］DengCX.BRCA21:cellcyclecheckpoint,geneticinstability,DNAdamageresponseandcancerevolution［J］.NucleicAcidsresearch,2006,34(5):1416-1246

［3］KawaiH,LiH,ChunP,etal.DirectinteractionbetweenBRCA-1andtheestrogenreceptorregulatesvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)transcriptionandsecretioninbreastcancercells［J］.Oncogene,2002,1(50):7730-7739.

［4］PowellWC,HicksDG,PrescottN,etal.Anewrabbitmonoclonalantibody(4B5)fortheimmunohistochemical(IHC)determinationoftheHER2statusinbreastcancer:comparisonwithCB11,fluorescenceinsituhybridization(FISH)andinterlaboratoryreproducibility［J］.ApplImmunohistochemMolMorphol,2007,15(1):94-102.

［5］TsutsuiS,OhnoS,MurakamiS,etal.Prognosticvalueofcerb-2expressioninbreastcancer［J］.JSurgOncol,2002,79(4):216-223.