HPLC在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用研究

HPLC在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用研究

杨泰然1石亚囡2

杨泰然1石亚囡2

1辽宁省营口市药品检验所115000

2辽宁省大连市药品检验所116021

【摘要】：目的研究高效液相色谱法（HPLC）在清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量测定中的应用。方法选用Diamonsil-C18为色谱柱，乙腈一0.05mol·L-I磷酸二氢钾溶液(27：73)为流动相，对清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量进行测定，流速为1.0ml·min-1，检测波长为345mm。结果盐酸小檗碱线性范围为9.1到130.5μg·ml-1之间，平均回收率为99.89％，RSD=0.28％(n=6)。结论使用高效液相色谱法（HPLC）测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量科学有效、回收率高。

【关键词】：HPLC；清肺抑火丸；盐酸小檗碱含量

清肺抑火丸主要由黄柏、栀子、黄苓、浙贝母、苦参、知母等十味中药制成。主要用于治疗痰热阻滞而引起的口干舌燥、咽喉肿痛、咳嗽、痰液粘稠色黄、便秘等症状[。盐酸小檗碱是该药的有效成分，具有清热解毒的功效，但是目前还没有文献报道使用HPLC测定该药物中盐酸小檗碱的含量[1]。本文应用高效液相色谱法测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱含量，以丰富该产品的质量控制内容。

1.资料仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪，型号：e2695,检测器：2489型紫外检测器；生产公司：美国Waters。色谱柱：Diamonsil-C18柱。

1.2试药

选用乙腈和甲醇为色谱纯，水为重蒸水，磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸等为分析纯。盐酸小檗碱对照品（上海瑞齐生物科技有限公司制造，批号20150408），清肺抑火片（吉林修正药业集团股份有限公司生产，国药准字Z22025033）。

2.方法与结果

2.1色谱条件

Diamonsil-C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm)；流动相为乙腈一0．05mol·L-I磷酸二氢钾溶液(27：73)，流速为1．0ml·min-1；检测波长为345m，色谱柱温为室温。

2.2供试品溶剂

将清肺抑火丸研磨成粉末，精密称量2g放入100ml容量瓶当中，加入100ml盐酸-甲醇溶液（1%），采用超声处理30分钟，冷置后补足盐酸-甲醇溶液，摇晃均匀，选用0．45μm的微孔滤膜对溶剂进行过滤，过滤后所得即为供试品溶剂。

2.3对照品溶剂

精密称量适量的盐酸小檗碱对照品，同样加入100ml盐酸-甲醇溶液（1%）溶解，进行超声处理、摇匀，最终制成对照品溶剂。

2.4阴性对照溶液

选取清肺抑火丸中不含黄柏以外的其他成分制成阴性对照溶液，其制作方法与供试品溶液制作方法相同。

2.5线性关系研究

精细量取9.1、18.2、36.4、72.8、145.6μg·ml-1的对照品溶液各20μl，按照上述色谱条件层顶峰面积，以峰面积值（A）为纵坐标，以盐酸小檗碱浓度（C）为横坐标进行线性回归，最终获得线性方程A=70798C+35454，r=0.9997（n=5）。线性回归方程表明盐酸小檗碱在9.1和130.5μg·ml-1范围之间时峰面积值（A）与盐酸小檗碱浓度（C）有较好的线性相关性。

2.6精密度测验

精密量取20μl的供试品溶液，连续量取5次，结果显示：每次峰面面积值都为644.4，RSD为0.91%，测验证明仪器精密度良好。

2.7稳定性测验

在0时、2时、4时、6时、8时、12时分别取供试品溶液20μl，结果发现12小时内盐酸小檗碱峰面积平均值为613.9，RSD为2.32%，这表明供试品溶液在12小时内的稳定性良好。

2.8重复试验

按照2.2供试品溶剂的制备方法制备6份，对其分别进行测定，最终得到清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量约为2.637mg·g－1，RSD为1.42%（n=6），实验结果表明本测定方法重复性良好。

2.9加样回收测验

选取同批清肺抑火丸样品共6份，加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按照2.2供试品溶剂的制备方法制备溶剂并进行测定，统计回收率，统计结果显示样品回收率的平均值为99.89%，RSD的平均值为0.28%。数据显示该测定方法具有良好的回收率。具体情况如表1.

表1.回收率测验结果

2.10样品测定

选取3批清肺抑火丸按照2.2与2.3供试品溶剂、对照品溶剂的制备方法制备溶剂，分别吸取两种溶剂各10μl注入HPLC仪器当中，测定得出清肺抑火丸中盐酸小檗碱的质量分别为2.233，2.047，2.632mg·g－1。

3.讨论

清肺抑火丸主要由盐酸小檗碱发挥药效，盐酸小檗碱广泛存在于各种植物当中，清肺抑火丸中的盐酸小檗碱的成分测定多采用薄层扫描法和HPLC法进行测定[2]。关于薄层扫描法测定清肺抑火丸中的盐酸小檗碱的方法早有文献报道，但是关于采用HPLC法进行测定尚没有相关报道[3]。曾有试验用药典黄柏与黄连含量测定法提取盐酸小檗碱成分[4]，此方法表明该提取方法提取率高，适于运用，因此为采用HPLC法进行测定奠定了基础。

本研究用HPLC法测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量，研究中采用甲醇、乙腈为色谱纯，加入磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠、磷酸等为分析纯，对清肺抑火丸中的盐酸小檗碱进行分离和测定。研究表明使用该方法进行测定其精确度、稳定性和重复性均较好，而且测定后药品的回收率高，平均回收率为99.89%，最大限度的降低了药品的浪费。

本研究选用的测定波长为345mm，这是多次研究后选用的盐酸小檗碱的最佳测定波长。本研究曾经过多次试验证明盐酸小檗碱的最佳测定波长为340-350mm之间，因此本观察以345mm波长进行测定，最大限度的消除杂质峰的干扰，科学的进行测定。

另外研究中关于流动相的测定也是经过多次试验后的结果，试验曾采用不同比例的乙腈和磷酸二氢钾溶液为流动相进行研究，最终确定乙腈一0．05mol·L-I磷酸二氢钾溶液(27：73)是最佳的流动相比例。

综上所述，采用HPLC法测定清肺抑火丸中盐酸小檗碱的含量科学、有效，且回收率高，值得推广使用。

【参考文献】：

[1]孙艳涛.HPLC法同时测定安脑丸中栀子苷、盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].中国药房,2016,27(3):389-391.

[2]毛爱丽.HPLC法测定黄连上清片中4种成分的含量[J].中国药师,2016,1(1):196-197.

[3]彭艳梅.HPLC法测定金英胶囊中盐酸小檗碱的含量[J].湖南中医杂志,2014,30(2):129-130.

[4]缪珊.HPLC法测定参蛇软膏中盐酸小檗碱的含量[J].中国药师,2014,1(9):1576-1578.