HICN液对结核分枝杆菌杀菌效果观察

HICN液对结核分枝杆菌杀菌效果观察

胡永林1韦永慧2

胡永林1韦永慧2

(1遵义医学院附属医院563003;2遵义医学院学生贵州遵义563003)

【摘要】目的：探究用HICN液对结核分枝杆菌的杀菌效果。方法：将罗氏培根基上生长的典型结核分枝杆菌菌落，制成约1个麦氏浊度浓度菌悬液，试验组用两倍菌悬液体积的HICN液分别处理结核分枝杆菌菌液5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min后，接种于罗氏（L-J）培养基斜面，对照组用生理盐水代替HICN液。一并放到37℃培养箱培养42d后观察生长情况，并取培养后的菌落涂片染色镜检。结果：对照组各培养管结核分枝杆菌生长良好，菜花状菌落典型，布满整个培养基，涂片抗酸染色镜检可见典型结核分枝杆菌形态；经HICN液分别处理5min、10min、15min、20min后观察组各管结核分枝杆菌均有不同程度生长，但生长情况依次呈递减趋势，涂片镜检可见结核分枝杆菌形态；经HICN液分别处理25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min后观察组各管无菌落生长。结论：两倍于菌悬液浓度的HICN液对结核分枝杆菌有杀菌作用，杀菌时间≥25分钟，因HICN液是较好的溶血剂，实验室可采用HICN液处理带血标本进行结核分枝杆菌的涂片检查。

【关键词】HICN液结核分枝杆菌杀菌效果

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）22-0394-01

TheHICNliquidbactericidaleffectobservedagainstMycobacteriumtuberculosis

【Abstract】ObjectiveToexploretheusetheHICNliquidbactericidaleffectagainstMycobacteriumtuberculosis.MethodThetypicalM.tuberculosiscoloniesgrownonthefoundationofRochetraining,madeaboutaMaxwellturbidityconcentrationofbacterialsuspension,thetestgroupwiththetheHICNsolutiontwicethevolumeofbacterialsuspension,respectively,dealwithMycobacteriumtuberculosisbacteria5min,10min,15min,20min,25min,30min,35min,40min,45min,50min,55min,60minafterinoculationRoche(L-J)mediumslantinthecontrolgroupwithsalineinsteadofHICNliquid.Togetherintothe37℃incubator42dobservethegrowthofsmearstainingandculturedcolonies.ResultsInthecontrolgroup,eachculturetubeofMycobacteriumtuberculosisgrowwell,typicalcauliflower-likecoloniesspreadaroundthemedium,acid-fastsmearmicroscopyandthetypicalMycobacteriumtuberculosisform;thetheHICNsolutiontreatedseparately5min,10min,15min,observed20minaftereachtubeofMycobacteriumtuberculosishavevaryingdegreesofgrowth,butgrowthisfollowedbyadecreasingtrend,smearmicroscopyshowsM.tuberculosisform;theHICNliquidrespectivelydealwith25min,30min,35min,40min,45min,50min,55min,60minaftertheobservationgroup,possessionofcolonygrowth.ConclusiontwicetheconcentrationofbacterialsuspensiontheHICNfluidofMycobacteriumtuberculosissterilization,sterilizationtime≥25minutes,duetothetheHICNliquidisbetterhemolyticagent,thelaboratorycanbeusedHICNliquidhandlingbloodspecimensforMycobacteriumbacillismear.

【Keywords】HICNliquidMycobacteriumtuberculosisBactericidaleffect

目前，全球大约有2000万活动性肺结核患者，每年新发病例900万人，每秒钟就有一人受到结核分枝杆菌感染，每年大约有300万人死于结核病。近年来，由于艾滋病（AIDS）的发病率呈上升趋势，而艾滋病（AIDS）患者又极易患结核病，因此，结核病已经成为威胁人类健康的一个重要的全球性公共卫生问题；世界卫生组织（WHO）已把结核病与艾滋病（AIDS）、疟疾一起列为人类健康的最主要杀手[1]。本文作者在前期的研究发现，用HiCN试剂处理血性标本用于抗酸杆菌涂片检查可以提高检出率[2]，HiCN试剂是否对结核分枝杆菌有消毒杀菌作用？为回答这个问题，我们随机收集了临床呼吸二科实验室结核杆菌培养阳性菌株1例，探究HICN液对结核分枝杆菌杀菌效果观察，现报道如下。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源：随机收集来源于我院呼吸实验室培养生长良好的结核分枝杆菌1株。

1.1.2试剂：①0.9％生理盐水。②灭菌PBS稀释液（含0.1％吐温80的PBS）。③灭菌滤纸过滤后的氰化高铁血红蛋白转化液（HICN）。④罗氏（L-J）培养基。

1.1.3仪器：①细菌培养箱，型号为：光明DHP-600。②生物安全柜，型号为：BHC-1300ⅡA/B2。③高速离心机，型号为：SS3000。④试管研磨器。⑤旋涡混合仪，型号为：M369543。

1.1.4接种环灭菌器、接种环、灭菌滤纸、灭菌漏斗、灭菌三角烧瓶、灭菌定量加样枪头、灭菌高速10ml刻度离心试管若干。

1.1.5试剂菌悬液制备：罗氏（L-J）培养基斜面上经37℃培养30d结核分枝杆菌生长的菌落，用灭菌的接种环刮洗下菌落，转移到试管研磨器内，加入3-5ml灭菌PBS稀释液（含0.1％吐温80的PBS）充分研磨。将所得菌悬液转移到一灭菌的小试管内，把小试管放在漩涡混合仪上震荡10min，然后用灭菌的PBS稀释液稀释至约1个麦氏浊度的浓度备用。

1.2方法

1.2.1氰化高铁血红蛋白转化液（HICN）处理：用灭菌滤纸过滤HICN液于经灭菌的三角烧瓶内备用。

1.2.2取灭菌10ml刻度高速离心试管13支，各支离心管内分别加入菌悬液1ml。

1.2.3对照管1支，加无菌生理盐水2ml，60min后另加7ml的生理盐水于高速离心管中（8000转/分）离心10min。测定管12支，分别于5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min后另加7ml的生理盐水于各高速离心管中（8000转/分）离心10min。

1.2.4离心后立即将以上各管（包括对照管）上清液用无菌吸管吸出，放入废液瓶中，吸出的过程中注意交叉污染，要单管单用。

1.2.5加入无菌生理盐水2ml于以上各管内,振荡将沉淀物混匀，再加无菌生理盐水至10ml刻度，8000转/分离心10min，去掉上清液，如此反复3次，洗净残留的HICN液，最后留沉淀物1ml，混匀。

1.2.6用加样枪吸取沉淀物菌悬液100μl,加入罗氏培养基斜面上，尽量使液体在培养基上分布均匀。同样方法将每一菌悬液加入三支罗氏培养基斜面上，总共39支(对照管3支，试验管36支）。

2结果

2.1结核分枝杆菌在罗氏培养基斜面上的生长情况和镜检结果：对照组各培养管结核分枝杆菌生长良好，菜花状菌落典型，布满整个培养基，涂片抗酸染色镜检可见典型结核分枝杆菌形态。

2.2经HICN液分别处理5min、10min、15min、20min后观察组各管结核分枝杆菌均有不同程度生长，但生长情况和菌落数量依次呈递减趋势，涂片镜检可见结核分枝杆菌形态；经HICN液分别处理25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、60min后观察组各管无菌落生长。

3讨论

临床上目前用于结核分枝杆菌消毒杀菌的方法主要有紫外线法、含氯消毒剂法、戊二醛消毒剂杀菌法、84消毒法等方法、乙醇消毒法等，其中紫外杀菌效果较好[3-6]。

本文实验的目的是为了观察HICN对结核分枝杆菌杀菌实验效果，因HICN液是较好的溶血剂，在实际工作中，很多血性标本(如血性胸腹腔积液，血痰，血尿和血性脑脊液等)在抗酸染色检查时染色背景与抗酸杆菌对比不鲜明，查找辨认抗酸杆菌较困难，使用HICN液作为处理血性标本进行抗酸杆菌涂片检查，可以提高血性标本中抗酸杆菌的检测效果[2]。本研究随机收集了我院呼吸实验室生长良好的结核分枝杆菌菌株，用HICN处理后放入37℃的细菌培养箱内培养42d，观察生长情况和涂片镜检结果。实验结果表明：HICN对结核分枝杆菌有很好的杀菌效果，当两倍于菌悬液浓度的HICN液作用结核分枝杆菌25min以上培养阴性，说明两倍于菌悬液浓度的HICN液对结核分枝杆菌有杀菌作用，杀菌时间≥25分钟。

本作者不建议使用HICN液用于被结核污染物品的消毒处理，因HICN液中有微量的剧毒物质氰化钾，处理不当会造成对人员的伤害和环境的污染，但HICN液是较好的溶血剂，实验室可采用HICN液处理带血标本进行结核分枝杆菌的涂片检查，既可达到杀菌的目的，又能收到良好的检查效果。

参考文献

[1]倪语星，尚红.临床微生物学与检验[M].人民教育出版社,2007:241.

[2]胡永林,彭明，杨优，等.用HiCN试剂处理血性标本用于抗酸杆菌涂片检查[J].临床检验杂志,2011,29(2):159.

[3]袁青春，侯秀丽，张伟，郭晓东.两种紫外灯杀菌效果观察[J].预防医学文献信息，1996，2(1):42-43.

[4]李素英.紫外线灯杀菌试验.中国消毒杂志，1992，9（1):59.

[5]陈越英，周士新.部分含氯复方消毒液稳定性影响因素的探讨[J].中国消毒学杂志，2003，20(1):46.

[6]王国庆，张朝武，刘衡川.戊二醛消毒剂对四种快生长分枝杆菌的杀菌效果[J].现代预防医学，2005，32(5):413.