野黄刺玫果粗总黄酮的提取工艺研究

野黄刺玫果粗总黄酮的提取工艺研究

史萌史志辉

史萌史志辉(陕西辉胜新兴农业科技发展有限公司712000)

【摘要】目的：探讨野黄刺玫果粗总黄酮最佳提取工艺。方法：以野黄刺玫果为原料，以总黄酮含量和提取率为评价指标，乙醇浓度，料液比，提取时间为考察因素，进行三因素三水平L9(34)正交试验、方差分析和验证实验。在上述优选出最佳提取条件不变的情况下，又对提取次数进行了优选。结果：野黄刺玫果粗总黄酮的最佳提取工艺条件为：用12倍量75%乙醇，加热回流提取三次，每次2h。

【关键词】野黄刺玫果总黄酮正交试验方差分析

【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）15-0031-02野黄刺玫果为蔷薇科（Rosaceae）蔷薇属（Rosa）植物野黄刺玫（RosaxanthinaLindl）的干燥成熟果实。9月份果实成熟时采收，除去杂质，干燥。本品为野生落叶灌木，广泛分布于我国北方的山区和丘陵地带[1][2]。野黄刺玫的花、果、叶和根皮均可入药，味酸甘性平，具有健脾养血，理气活血之功效，用于消化不良，腹痛胀气、胃痛、气滞血瘀的胸痹，对冠心病心绞痛及高脂血症有奇效，并能治疗妇女月经不调[3]。民间广泛有食用野黄刺玫果和用其酿酒的习惯。现代研究表明，野黄刺玫果中含有丰富的黄酮。皂苷、植物SOD，多种维生素及大量有益的微量元素。野黄刺玫果具有抗氧化作用[4]，抗衰老和预防心血管病的作用及降压降脂作用[5][6]。毒理学实验研究表明，野黄刺玫果属于无毒级，可安全使用的药食两用资源[7]。由于总黄酮为野刺玫果的降压，降脂及治疗冠心病心绞痛的有效成份，本实验研究黄刺玫果粗总黄酮提取的最佳工艺条件，用紫外一可见分光光度法测定野黄刺玫果总黄酮的含量，为野黄玫果最佳粗总黄酮提取工艺的筛选提供了理论根据。

1、材料与检测方法

1.1材料与试剂

野黄刺玫果采自陕西旬邑县石门山区，9月份果实成熟时采摘，除去杂质，干燥。

芦丁对照品由中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用，试剂皆为分析纯。

1.2仪器与设备

UV?765型紫外一可见分光光度计上海精密科学仪器有限公司；BS210S型电子天平，北京赛多利斯天平有限公司；RE-52A型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；Ⅲ型高速中药粉碎机，浙江省瑞安永西制药机械有限公司。

1.3野黄刺玫果总黄酮的测定

1.3.1对照品溶液的制备取芦丁对照品50mg,精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得（每1ml中含芦丁0.2mg）。

1.3.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml与6ml、分别置25ml量瓶中，各加水至6.0ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的试剂为空白，照紫外一可见分光度法（中国药典2010年版一部附录VA）,在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵座标，浓度为横座标，绘制标准曲线。

1.3.3测定法取野黄刺玫果提取物干燥细粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加热回流至提取液无色，转移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取50ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取5ml，置25ml量瓶中。照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6.0ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮以芦丁（C27H30O16）计的重量（?g），计算，即得。

2、野黄刺玫果加热回流提取工艺的考察

2.1加热回流提取正交试验固定加热回流提取三次的条件下，以乙醇浓度，每次加乙醇量为所提野黄刺玫果粗粉的倍数及提取时间为考察因素，进行三因素三水平L9(34)正交试验，以总黄酮百分含量和提取率（%）为评价指标（以下皆同），筛选最佳回流提取条件。总黄酮百分含量和提取率的权重系数分别为0.5、0.5，并以综合评分作为提取效果的衡量指标。试验结果见表1、表2。

表1因素水平表

注：加热回流提取两个评价指标，采用综合评分法进行数据分析，总黄酮含量和提取率的权重系数分别为0.5、0.5。

总黄酮含量评分=总黄酮含量/最大总黄酮含量×0.5×100

提取率评分=提取率/最大提取率×0.5×100

综合评分=总黄酮含量评分＋提取率评分

从表2极差R值大小显示，各因素对提取效果影响大小顺序为A＞B＞C，再从各因素水平来看（K值分析），因素A为K2＞K3＞K1，因素B为K3＞K2＞K1，因素C为K3＞K2＞K1。从以上直观分析，最佳加热回流提取条件为A2B2C3。考虑到大生产实际情况，有必要对各因素下水平的显著性进行方差分析，结果见表3。

表3加热回流提取效果方差分析

表4显示，验证试验结果与正交最佳加热回流提取条件试验结果一致。因此，确定野黄刺玫果加热回流提取条件为：75%乙醇12倍量，加热回流提取三次，每次2小时。

2.2加热回流提取次数的选择

精密称取除杂，洗净，烘干并粉碎成粗粉的野黄刺玫果160g，加入75%浓度12倍量乙醇（每次回流提取皆加12倍量提取浓度乙醇），每次回流提取2小时，350目滤布趁热过滤，滤液回收乙醇，减压（60℃，-0.08MPa）浓缩至相对密度为1.30（50℃）的稠膏，减压（60℃，-0.08MPa）干燥，粉碎过100目筛，得干膏细粉，精密称定，测定含量并换算成在野黄刺玫果中的百分提取量，结果见表5。

表5加热回流次数的选择试验

*指前三次75%乙醇提取总黄酮提取量及提前率在该成分提取总量及总提取率中所占的百分比例。

**指第四次75%乙醇提取总黄酮提取量及提前率在该成分总提取量及总提取率中所占的百分比例。

试验结果表明，第四次75%乙醇提取总黄酮提取量在该成份提取总量中所占的百分比例很小；说明三次75%乙醇回流提取已基本完全，为了省时节能，减少乙醇用量，故采用12倍量75%乙醇加热回流提取三次，每次2小时，在此生产工艺条件下，野黄刺玫果中总黄酮的转移率为91.5%（原生药含量为0.26%）。

3、结论

以野黄刺玫果为原料，以总黄酮含量和提取率为评价指标并设计出合理的权重系数，以乙醇浓度，料液比，提取时间为考察因素，进行了三因素三水平L9（34）正交实验，对提取效果进行方差分析，验证实验及提取次数的优选，研究出了野黄刺玫果粗总黄酮最佳提取工艺条件为：用12倍量75%乙醇，加热回流提取三次，每次2小时。在此生产工艺条件下，野黄刺玫果中总黄酮的转移率为91.5%。

参考文献

[1]山西植物志编委会。山西植物志[M]，北京：中国科学技术出版社，1998（4）：335-337

[2]苏俊霞，毕润成，刘卫军，等。黄刺玫群落特征及种群分布格局的研究[J]。山西师范大学学报:自然科学版，2002,16（1）：66-71.

[3]李萍，野生黄刺玫的开发利用[J]农产品加工，2010（6）：30-31.

[4]王常青，倪淑华，黄刺玫果汁的抗氧化作用及对大鼠血液流变学的影响[J].中国公共卫生学报，1995,14（3）:169-172.

[5]王常青，张义贤，黄刺玫果汁抗衰老作用的实验研究[J]。中国老年学杂志，1996,16（1）：30-31.

[6]王常青。黄刺玫果实的营养成分分析[J]，营养学报，1997,19[4]：484-486.

[7]王常青，李宁、段光明，等。黄刺玫果实原汁的毒性研究[J]，中国公共卫生学报，1994,18（5）：320-321.