反相HPLC法测定注射用氨苄西林钠的含量夏永

反相HPLC法测定注射用氨苄西林钠的含量夏永

夏永

哈药集团制药总厂150000

【摘要】在本次分析当中使用了反相类型HPLC方法，将酸碱度为4.5的醋酸盐溶液和乙腈溶液按照4:1的比例进行混合，将混合液作为流动相使用，将检测波的具体长度设定为254纳米，用外表方法来进行注射类型氨苄西林钠当中氨苄西林的具体含量。最后测定的结果线性范围为0.1毫克每毫升到1.6毫克每毫升，r=0.9997。这种测定方式有着操作简便、测定效果准确、专一性强的特点，同时讲解产物以及各种杂质对于实验也不断在干扰。

【关键词】反相HPLC；氨苄西林钠；注射；测定方法

注射类型的氨苄西林在现代临床方面运用较为广泛，目前药典当中记载的的氨苄西林钠中所含物质含量测定方式较多，比如有硫醇汞盐测定法、铜盐测定法、液相色谱测定法以及汞电位滴定类型测定技术，这些技术在实际的操作中往往具有过程繁琐并且专属性较差的问题。因此也就需要更加高效、快捷并且准确度高的测定方式进行氨苄西林钠中各物质含量的测定。

1仪器以及药品

美国SP880()高效液相色谱仪;SP100可变波长紫外检测器;sp4290积分仪;超纯水器;氨节西林三水合物对照品(中国药品生物制品检定所提供);注射用氨节西林钠(华北制药股份有一限公司等三家药厂`产品);6—氨基青霉烷酸乙睛为色谱纯;其它试剂均为分析纯;水为去离子超纯水

2色谱具体条件

色谱柱4.6mnrx250mm5μm;流动相,pH45醋酸盐缓冲液(醋酸钠1.89加冰醋酸0.98ml,加水至1000ml，乙睛(80:20);纸速0.25厘米每分钟;积分仪衰减,64;柱温,室温;检测波长,254nm。

3标准曲线以及精密度

在该环节中，先精确化的称量氨苄西林钠药物水合物对照物质适量，用流动相调配成浓度为2.0mg/ml的溶液。之后再精确化的量取0.5毫升、1.0毫升、2.0毫升、3.0毫升、4.0毫升、5.0毫升、6.0毫升、7.0毫升以及8.0毫升的溶液，分别将这些溶液放置到10毫升规格的量瓶当中，向其中添加流动相直至达到刻度线。分别量取10微升注入分析色谱仪中进行测定实验。将浓度数值设定为横坐标，将峰面积设定为纵坐标，回归线方程为：

Y=3.302x105·X+7.4x103

线性范围区间为0.1毫克每毫升l到1.6毫克每毫升之间。量取浓度为1.0毫克每毫升的溶液，反复进行样6次，RSD结果为百分之5。

4干扰实验分析

由于当前生产工艺方面存在的不足，半合成品类型的氨苄西林钠当中可能会残存一定量的合成前体，因此为了排除可能出现的干扰，将合成体混入到氨苄西林钠当中，将混合物的三水和物对照物质使用色谱设备进行分析，分析结果如图1。

图1合成前体干扰实验分析色谱图

氨苄西林但在加热条件下稳定性较差，尤其是在含水量较高的条件下，可能会直接降解为不具备效用的青霉噻唑酸。由此，在自制降解产物的阶段中，需要拿取注射类氨苄西林钠1瓶，将氨苄西林钠瓶口敞开，放置三天，使氨苄西林钠能逐渐潮湿降解。同时，领取1瓶氨苄西林钠，向其中滴入一滴蒸馏水之后放置到40度的环境中，保存4小时。之后分别对这两种物质进行色谱分析实验，最终发现降解产物组成和存储期间内生成的降解产物是同一种物质，分析结果见图2。

图2降解之后的样品成分色谱分析图

5样品含量测定分析

在分析中精确量取3家药品生产企业所生产的5批次样品，同时使用流动相配置成浓度为1.0毫克每毫升的溶液。另外取氨苄西林钠药物三水和物对照物质适量，使用流动相配置成浓度为1.0毫克每毫升的溶液。分别精确量取两种溶液各10微升进行色谱检测分析，同时运用外标法来计算成分的百分比含量。

6溶液稳定性情况考察

量取含量测定环节的溶液，分别将溶液静置2小时、4小时、8小时之后再次测定成分含量，其平均含量数值为百分之91.2，RSD数值为百分之0.8，这也表明氨苄西林物质在酸性类型流动相中也具有良好的稳定性。

7讨论

注射用氨苄西林钠，适应症为适用于敏感菌所致的呼吸道感染、胃肠道感染、尿路感染、软组织感染、心内膜炎、脑膜炎、败血症等。化学名称：(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-[(R)-2氨基-2-苯乙酰胺基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钠盐。

目前在临床治疗中使用较多，氨苄西林钠溶液浓度愈高，稳定性愈差。在5℃时1%氨苄西林钠溶液能保持其生物效价7天，但5%的溶液则为24小时。浓度为30mg/ml的氨苄西林钠静脉滴注液在室温放置2～8小时仍能至少保持其90%的效价，放置冰箱内则可保持其90%的效价至72小时。稳定性可因葡萄糖、果糖和乳酸的存在而降低，亦随温度升高而降低。供肌内注射可分别溶解125mg、500mg和1g氨苄西林钠地0.9～1.2ml、1.2～1.8ml和2.4～7.4ml灭菌注射用水中。氨苄西林钠静脉滴注液的浓度不宜超过30mg/ml。

同时在使用的时候有时候也会出现一些不良现象，其不良反应与青霉素相仿，以过敏反应较为常见。皮疹是最常见的反应，多发生于用药后5天，呈荨麻疹或斑丘疹；亦可发生间质性肾炎；过敏性休克偶见，一旦发生，必须就地抢救，予以保持气道畅通、吸氧及给用肾上腺素、糖皮质激素等治疗措施。粒细胞和血小板减少偶见于应用氨苄西林的病人。抗生素相关性肠炎少见，少数病人出现血清转氨酶升高。大剂量氨苄西林静脉给药可发生抽搐等神经系统毒性症状，婴儿应用氨苄西林后可出现颅内压增高，表现为前卤隆起

在使用的时候该种药物还可能与其他药物发生相互作用。与丙磺舒合用会延长本品的半衰期。氨苄西林钠与卡那霉素对大肠埃希菌、变形杆菌具有协同抗菌作用。本品宜单独滴注，不可与下列药物同瓶滴注：氨基糖苷类药物、磷酸克林霉素、盐酸林可霉素、多粘菌素B、琥珀氯霉素、红霉素、肾上腺素、间羟胺、多巴胺、阿托品、葡萄糖酸钙、维生素B族、维生素C、含有氨基酸的营养注射剂和琥珀酸氢化可的松等。别嘌呤可使氨苄西林皮疹反应发生率增加，尤其多见于高尿酸血症。氨苄西林能刺激雌激素代谢或减少其肝肠循环，因而可降低口服避孕药的效果。

从药物动力学角度来看，氨苄西林钠为广谱半合成青霉素。对溶血性链球菌、肺炎链球菌和不产青霉素酶葡萄球菌具较强抗菌作用，与青霉素相仿或稍逊于青霉素。氨苄西林对草绿色链球菌亦有良好抗菌作用，对肠球菌属和李斯德菌属的作用优于青霉素。本品对白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌、放线菌属、流感嗜血杆菌、百日咳鲍特杆菌、奈瑟菌属以及除脆弱拟杆菌外的厌氧菌均具抗菌活性，部分奇异变形杆菌、大肠埃希菌、沙门菌属和志贺菌属细菌对本品敏感

硫醇汞盐法对氨节西林进行含量测定时,6一APA的存在对实验有干扰,可使测定结果偏高。本文实验结果证实了这一结论。从表1可以看出,A药厂的2批样品均无6-APA峰出现,二法测定结果基本一致;而B、C药厂的3批样品均有6洁尸A峰,则硫醇汞盐法明显高于HPLC法。实验结果表明,本法能更好地对生产进行质量控制。7.2流动相中,醋酸盐缓冲液的州对色谱峰分离有较大影响,选择pH4.5时,分离效果较为满意。

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