研究药品微生物检查方法及方法适用性

研究药品微生物检查方法及方法适用性

周敏

上药东英（江苏）药业有限公司江苏南通226000

摘要：目的探讨并研究药品微生物检查方法及其方法适用性。方法通过对检验方法的选择，以及检验方法的建立和确认等方面对检查方法的适用性展开研究。药品微生物的检查方法适用性试验对于检验结果有着直接影响，因而在检验应用中必不可少。结论应该提高对药品微生物检验方法适用性的重视，并进一步加强对检验人员的培训与检验质量的控制。

关键词：药品；微生物检查；方法适用性

药品在人们的生活中始终扮演着重要角色，它不仅能够预防疾病发生与发展，也能为人们的身体健康提供可靠保障。而提高对药品质量的重视，加强对药品微生物检查方法的应用与其适用性的重视，则能进一步确保人们的安全用药。而在《中国药典》2005年版中第一次对药品微生物的检查方法验证进行了规定，其中明确提出了对于在用于药品质量控制中的检查方法，都应先对其验证，从而避免因方法不当而导致误判或漏检。且在《中国药典》2015年版中更是将其方法验证修订为适用性试验。因而在本次的研究分析中，将主要对药品微生物检查方法及其方法适用性试验展开探讨。

1药品微生物检查方法的选择和建立

1.1药品微生物检查方法的选择

药品微生物在对其检查中，在选用检查方法时要遵循两个原则。首先要确保检查方法的操作快速、简单；无论是试液制备、抑菌成分的消除还是在微生物计数方法的应用上，都要选择操作简单的方法，从而避免供试品中污染的微生物受到损伤，或是因操作较为复杂导致其出现人为污染。其次则是方法选择要适宜，在对药品微生物进行检查时，要根据实际情况来选择检查方法，例如加入了中和剂、消除抑菌成分的方法，在选择时要避免对药品中污染的微生物造成损伤，同时要减少人为破坏。在对检验方法的选择中要对供试品的处方工艺、用药途径及抑菌程度等因素均考虑全面，而在供试液的稀释度选择上，不仅要注意其样品的特性，也要认识到它在微生物限度标准中受到的制约。通常平皿法是微生物计数方法中最常用的一种，也是检查方法适用性试验的首选；薄膜过滤法则多用于有着较强抑菌作用与较强溶液性的供试品中；最可能数法则多用于受微生物污染程度较低的供试品中。

1.2药品微生物检查方法的建立

一般检验方法的选择主要是根据药品自身特点与其标准限值为依据，然后进行适用性试验，并对其结果的有效性进行确认。例如通过不同方法来对某中成药口服液的需氧菌总数进行测定，因中药制剂受到微生物污染的可能性相对较大，因而先拟用平皿法与薄膜过滤法，并对其展开适用性试验。首先准备供试品10g，随后加入pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100mL，使其溶解为1:10的供试液备用；其次将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌与铜绿假单胞菌的新鲜培养物接种到胰酪大豆胨液体培养基中，确保温度在30~35℃，持续培养18~24h；然后用0.9%无菌氯化钠稀释至菌落数104cfu/mL的菌悬液；最后对检查方法进行试验。①平皿法试验组。取9.9mL供试液加入0.1mL菌悬液中，使其融合，再吸取混合液1mL于无菌平皿中，并倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，使其均匀混合，逐渐凝固，再平行制备两个平皿，确保温度在30~35℃，持续培养3d。②薄膜过滤法试验组。试验前取少量pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液进行滤过，并对滤膜进行润湿，再取1mL供试液与其100mL稀释液进行混合，随后进行全量滤过，并用该稀释液对滤膜冲洗，每次100mL，持续三次；在第三次冲洗时要加入100cfu以下的菌悬液，使其混合后再行抽滤；随后将滤膜转移，让菌面朝上，并将其贴于胰酪胨大豆琼脂培养基面板上，保持30~35℃温度，培养3d。③供试品对照组。取供试液，以稀释液替代菌液，操作方法与试验组一致。④菌液对照组。供试液用稀释液替代，并以试验组操作方法将试验菌液加入其中。

1.3药品微生物检验结果的确认

1.3.1平皿法

根据试验结果，三株试验菌回收率均在50%以下，因而该检查方法不适用于对药品的需氧菌总数测定，详见表1。

1.3.2薄膜过滤法

经试验结果分析，三株试验菌回收率皆在90%以上，因而该检查方法适用于对药品的需氧菌总数测定，详见表2。

表1需氧菌总数平皿法试验结果

表2需氧菌总数薄膜过滤法试验结果

2检查方法中的问题

在对药品微生物检查方法进行适用性试验过程中，要提高对质量控制的重视，尤其是在对用菌的浓度控制，对加菌量的把握上，试验方法的选择与过程的控制上，及其环境选择与仪器设备的准备上都需注意。同时检查人员的能力也会对试验结果产生影响，因而要进一步加强对相关检验人员专业能力的培训与考察，提高其检验技术能力，以确保检验结果的准确性与真实性。

2.1检验方法的考量

采用平板法测定中成药口服液中需氧菌总量。该药物的主要活性成分为黄芩、金银花等，被认为具有明显的抗菌活性抑菌成分抑制了试验溶液和试验溶液中菌落的生长，使测定值变小。当做薄膜过滤时，由于使用本体稀释剂稀释试验产品，在稀释剂中溶解抑菌成分，滤膜过滤后反复冲洗。最后一次冲洗时加入测试菌液，大大降低了测试液对测试结果的影响，保证了测试结果的真实性和有效性，提高了测试的准确性。

2.2加菌方式的选择

在2015年版《中国药典》中，微生物限度检查法适宜性检验的主要变化是细菌添加法的变化。根据药典规定，如果在测试溶液中加入一定数量的菌悬液，添加菌悬液的体积不应大于液体总量的1%，为了使操作更方便，可以通过适当的稀释度是液体9.9mL是液体，添加0.1mL适合细菌悬液的浓度，因此，每个1mL在每个被过滤膜过滤液体或液体细菌内容不要超过100个cfu，整个操作过程的准确性和再现性要求较高，它将直接关系到检验结果的成败。

2.3菌活性的去除或灭活

对于具有抗菌活性的药物，应及时有效地去除或灭活抗菌活性。主要方法有:增加稀释剂或培养基的体积;增加冲洗液量;添加适当的中和剂或灭活剂并确认对微生物的有效性和无毒性;采用薄膜过滤法。几种方法结合使用。在此过程中，应注意操作方法的方便性，确保操作方法对检测产品中微生物污染的影响最小。当执行药品微生物计数法的适用性测试，我们应该首先关注质量控制在检验过程中，尤其是计算介质的适应性测试，测试细菌的浓度控制，控制细菌剂量，测试方法的选择、检验过程的控制、监测仪器、设备和环境条件。第二，加强检验人员的专业培训和系统学习，及时对检验人员的能力进行检验和比较，提高专业技能和专业素养。该方法不仅可以确定非无菌制剂及其原料是否符合药典要求，而且可以指导质量标准的制定，使企业更方便有效地监控其生产过程的质量。微生物的计数方法适用性测试将直接影响测试结果和产品质量，因此有必要研究测试方法的适用性，并选择确定最合适的测试方法测试，以便有效地确保测试结果的真实性和准确性。

结束语

微生物检查方法不仅能够用于对非无菌制剂与原料、辅料等是否符合药典规定进行判断，同时也能作为质量标准制定的指标，并对其生产过程质量进行控制。因而通过对方法的适用性试验来选择适用性高的检查方法对于提高检验结果的准确性有着积极意义。

参考文献

[1]刘小静，王亚婷，刘建芬，刘素彦.肝素钠微生物限度检查方法适用性研究[J].中国抗生素杂志，2018，43(12):1533-1537.

[2]田怀平，林志燕，王冉冉，王玲，杜毅.小儿呋麻滴鼻液微生物限度检查方法适用性研究[J].儿科药学杂志，2018，24(11):45-48.

[3]庞云娟，樊文研，刘康连，周晓婷.珍黄胶囊微生物限度检查方法适用性试验的研究[J].中成药，2018，40(03):711-715.

[4]李辉，杨晓莉，梁泽梅，秦亚红，绳金房.不同剂型硝酸咪康唑微生物限度检查方法适用性研究与评价[J].中国抗生素杂志，2018，43(01):80-84.

[5]田怀平，王玲，胡燕峰，唐跃年.白色洗剂《中国药典》2015年版微生物检查的方法适用性研究[J].药学与临床研究，2017，25(04):321-324.

[6]潘震宇，汤茜，李瑞莲.硝酸布康唑栓微生物限度检查方法适用性试验研究[J].中国药事，2017，31(01):43-48.