乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ溶出度测定方法的改进

乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ溶出度测定方法的改进

钱小平毕秀玲栾爽赵迎春

钱小平毕秀玲栾爽赵迎春（大连市食品药品检验所辽宁大连116021）

【摘要】目的对乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的溶出度测定方法进行改进。方法色谱柱为KromasilC18（5μm,4.6mmI.D.×150mm），流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈梯度洗脱，检测波长为238nm，流速为1.5mL?min-1，进样量为20μL。结果利福平在0.1279mg?mL-1～0.1918mg?mL-1，异烟肼在0.06360mg?mL-1～0.09540mg?mL-1，吡嗪酰胺在0.3435mg?mL-1～0.5153mg?mL-1范围内线性关系良好。平均回收率为利福平98.3%，异烟肼100.0%，吡嗪酰胺99.8%。RSD为利福平0.4%，异烟肼0.4%，吡嗪酰胺0.8%。结论该方法专属性强，稳定性好，准确度高，可用于乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的溶出度检查。

【关键词】乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ溶出度高效液相色谱

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）18-0071-02

乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ为临床常用复方抗结核药，主要成分有利福平、异烟肼、吡嗪酰胺和盐酸乙胺丁醇。我国现行的质量标准为《国家食品药品监督管理局标准》YBH26692005[1]，仅采用紫外－可见分光光度法检查利福平的溶出度，而对其它三种成分的溶出度未做规定。USP32版[2]也收载了此品种，采用高效液相色谱法在两种色谱条件下检查四种成分的溶出度。为了更好地控制本品的质量，本文参照USP32版采用高效液相色谱法同时测定乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ中利福平、异烟肼和吡嗪酰胺的溶出量，并进行方法学验证。最后，采用本方法与《国家食品药品监督管理局标准》YBH26692005收载的紫外-可见分光光度法分别对9批样品进行测定，比较结果。结果表明，本方法专属性强，结果准确，灵敏度高。

1仪器与试药

Waterse2695/2489高效液相色谱仪（紫外检测器）；SartoriusBP211D电子天平。UV-2401PC紫外-可见分光光度计。利福平对照品（批号：130496-200702），异烟肼对照品（批号：100578-200401），吡嗪酰胺对照品（批号：100178-200403）均由中国食品药品检定研究院提供。乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ（批号：0906021，0909081，0909091，0911021，0911052，0912022，1001031，1002022，1004012）。乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1供试品溶液的制备

取样品，照溶出度测定法（《中国药典》2010年版附录XC第二法），以磷酸盐缓冲液（无水磷酸氢二钠1.4g，加水溶解并稀释至1000mL，用磷酸调节PH至6.8）900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，经45分钟时，取溶液适量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.1.2对照品溶液的制备

取利福平、异烟肼与吡嗪酰胺对照品适量，精密称定，用磷酸盐缓冲液-乙腈（96：4）稀释制成每1mL中含利福平0.16mg、异烟肼0.08mg与吡嗪酰胺0.43mg的溶液，作为对照品溶液。

2.1.3空白溶液的制备

按照处方比例制备不含主成分的空白样品，照“2.1.1项”下方法同法制备空白溶液。

2.2色谱条件

色谱柱：KromasilC18（5μm,4.6mmI.D.×150mm）；流动相：磷酸盐缓冲液-乙腈，按表1梯度洗脱；检测波长：238nm；流速：1.5mL?min-1；进样量：20μL。

表1梯度洗脱程序

2.3专属性试验

精密量取供试品溶液、对照品溶液与空白溶液各20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果表明，异烟肼峰与吡嗪酰胺峰分离度为5.0，吡嗪酰胺峰与利福平峰的分离度为25.3，空白溶液无干扰。

图1HPLC色谱图

A.空白溶液；B.对照品溶液；C.供试品溶液；

1.异烟肼；2.吡嗪酰胺；3.利福平

2.4线性关系考察

精密称取利福平、异烟肼与吡嗪酰胺对照品适量，加磷酸盐缓冲液-乙腈（96：4）溶解并稀释制成每1mL含利福平分别为0.1278mg，0.1438mg，0.1598mg，0.1758mg，0.1918mg，含异烟肼分别为0.06360mg，0.07155mg，0.07950mg，0.08745mg，0.09540mg，含吡嗪酰胺分别为0.3435mg，0.3865mg，0.4294mg，0.4723mg，0.5153mg的混合对照品系列溶液，分别精密量取20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归。利福平、异烟肼与吡嗪酰胺的回归方程分别为：A=0.000474C+0.0000609（r=0.99998）；A=0.000333C-0.000371（r=0.99951）；A=0.000214C+0.000949（r＝0.99961）。结果表明，利福平在0.1278mg?mL-1～0.1918mg?mL-1，异烟肼在0.06360mg?mL-1～0.09540mg?mL-1，吡嗪酰胺在0.3435mg?mL-1～0.5153mg?mL-1范围内线性关系良好。

2.5回收率试验

取利福平、异烟肼、吡嗪酰胺和盐酸乙胺丁醇对照品适量，精密称定，按处方量加入辅料，制备回收率试验样品。照“2.1.1项”下方法同法制备回收率试验溶液。精密量取20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积，代入线性回归方程，计算回收率结果。见表2。

表2回收率试验结果

2.6精密度试验

精密量取同一对照品溶液20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，重复进样6次，记录色谱图。结果利福平、异烟肼与吡嗪酰胺峰面积的RSD分别为0.6%，0.5%，0.9%。

2.7稳定性试验

精密量取同一批号供试品溶液20μL，照上述色谱条件，分别在0h、0.5h、1h、2h、3h、4h注入液相色谱仪，记录色谱图。结果利福平、异烟肼与吡嗪酰胺峰面积的RSD分别为2.1%，0.2%，0.2%。结果表明供试品溶液在4h内稳定。

2.8溶出度测定

精密量取对照品溶液与供试品溶液各20μL，照上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算溶出度。见表3。

表3溶出度测定结果

3讨论

3.1我国现行的质量标准控制乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的质量，仅测定利福平的溶出度，而对其它三种成分的溶出度未做规定。本文参照USP32版，考查在同一色谱条件下，同时测定利福平、异烟肼和吡嗪酰胺的溶出度的方法，对完善和提高乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的质量标准，更好地控制本品的质量有意义。

3.2本文按照我国现行质量标准《国家食品药品监督管理局标准》YBH26692005，采用紫外E值法，在474nm的波长处测定乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ中利福平的溶出度，并与按本文方法测定的利福平溶出度的结果比较。结果9批样品的溶出度均值按现行质量标准结果为95%，按本文所述方法为89%，按现行质量标准测定的结果偏高。考虑原因，利福平为红色粉末，本品又为红色薄膜衣片，因此在紫外E值法中，在474nm的波长处测定利福平，易受到红色薄膜衣颜色的影响使利福平溶出度结果偏高。而本文采用高效液相色谱法，在238nm同时测定利福平、异烟肼和吡嗪酰胺的溶出度，既避免了红色薄膜衣在474nm对利福平结果的影响，又增加了控制项目，结果准确、专属性强。

参考文献

[1]国家食品药品监督管理局标准.YBH26692005.

[2]USP.32[S].P3507.