幽门螺杆菌的检查

幽门螺杆菌的检查

吴彩虹

吴彩虹(黑龙江省呼玛县人民医院165100)

【中图分类号】R446.62【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)5-0184-02

【摘要】自1983年Warren和Marshall从慢性活动性胃炎患者胃粘膜活检标本中分离到幽门螺杆菌(Helicobacterpriori，Hp)以来，国内外学者对其研究越来越深入，已从细胞水平深入到分子水平，现已认为Hp为慢性胃炎、消化性溃疡和胃MALT淋巴瘤的重要致病因子，并和胃癌j的发生密切相关。用正确的检查方法，确立患者Hp感染状态，对选择适当治疗方案，根洲Hp感染十分重要。现就Hp的生物学特性、检查方法作一概述。

【关键词】幽门螺杆菌检测

一、Hp的生物学特性

1.形态与染色Hp大小约0.3～1μtm×1.5μtm，菌体细长、弯曲，呈逗点状、“s”形或螺旋状，在陈旧培养物中可呈球状，排列不规则。革兰染色阴性，有1～6根端鞭毛，多数具4、根；运动活泼，无芽胞及荚膜。

2.培养特性Hp为微需氧菌，在有氧和厌氧环境中均不能生长。营养条件要求较高培养基中须加血液、血清、淀粉或活性炭才能生长。一般认为马血清、胎牛血清较好。最遗温度为35℃。37℃，28℃和43℃不生长。最适pH值为5.5～8.5。在巧克力琼脂、含5％～10％马血或羊血布氏琼脂上生长良好。马血清、可溶性淀粉、活性炭对Hp有明显刺激生长。作用。全羊血在琼脂固体培养基上可使Hp生长，而在液体培养基中却不能支持Hp生长。：在微需氧环境(10％CO2、5％O2、85％N2)下，于血平板或巧克力平板上培养3～4d，产生菌蘩约0.5～1mm，无色透明或灰白色，边缘整齐，中央隆起，轻度溶血。若加入4g/LTTC可产生黑色闪光菌落，易于识别。为提高标本阳性分离率，可加入抑制其他细菌生长的抗生素：剂量要适当，过量亦会对Hp产生抑制作用。一般用量：万古霉素为6～10mg/L，两性霉素耀2mg/L，多粘菌素B为25000IU/L，萘啶酸为20mg/L，TMP为5mg/L。

3.生化反应该菌不发酵葡萄糖，氧化酶、触酶、尿素酶均为阻性。碱性磷酸酶、酸碱磷酸酶阳性，动力阳性，H2s阳性(三糖铁)，硝酸盐还原、马尿酸、靛基质阴性。

4.抵抗力该菌对氧敏感，暴露于空气中易死亡，对热敏感，但对酸、碱抵抗力较酞一般对青霉素、羟苄青霉素、四环素、红霉素、卡那霉素、庆大霉素、利福平、头孢菌素等抗燮素敏感，对甲硝达唑、三钾二枸橼酸铋也敏感，35g/LNaCl可抑制其生长，可耐10g/L亚鬣酸钠、4g/L2，3，5-氯化三苯四氮唑(TTC)和萘啶酮酸。

二、标本的采集、处理和运送

1.活组织标本通过纤维胃镜取活检标本，应多采几个部位，包括十二指肠球部、胃囊部、胃小弯等处。一份用福尔马林固定，供组织学检查用；另一份置于无菌试管或0.5ml无菌生理盐水中，用组织匀浆器捣碎，也可直接放在培养基上，多面压印或用无菌剪刀反复剪碎后，压印涂布平板划线分离，于微需氧环境、37℃培养3～5d。标本接种应尽快完成，如布+能及时接种，可放在0.5ml浓度为200g/L的葡萄糖液中，3h内送检。

2.粪便标本收集新鲜粪便于已称重的密闭的无菌小瓶内，应在3min内完成，将粪便悬浮于0.1mol/L磷酸缓冲盐水(pH7.0)中，每10rnl磷酸缓冲盐水中放2g新鲜粪便。磷酸缓冲盐水(PBs)应新鲜配制，经121℃15min灭菌，冷却后将微氧混合气(5％O2、10％CO2、85％M)通过灭菌的微孔滤膜(0.22μm)加压(2.5P)充人PBS内。将粪便混匀，过滤二次(第一次通过500μm滤膜，第二次通过250μm滤膜)除去大颗粒物质。滤液经1500g离心30min，沉淀用PBS混悬，再离心。收集乳白色细菌沉淀，一部分接种平板培养基，一部分作快速脲酶试验。从标本收集到接种完毕应在1.5h内完成。

三、分离培养

Hp为微需氧菌，在空气中及绝对无氧环境中均不生长，在5％～6％O2、8％～10％CO2和80％N2的环境中生长较好，也有人用5％O2、7％CO2、8％H2、80％N2环境培养，阳性率较高。

四、Hp的快速检查方法

1.快速脲酶试验是利用Hp菌膜上存在的尿素酶使尿素分解产生氨气，引起pH值的改变，通过颜色的变化来显示结果。该试验具有简便快速的特点，是检测胃活检组织Hp常用的方法。方法：将胃粘膜活组织标本1～2块，用无菌剪刀剪碎，置于尿素培养基中，37％℃育，6h内出现红色为阳性。应注意，对于近期使用降低胃部细菌量或直接抑制细菌酶活性的药物的样本，应避免使用该方法。

2.病理组织学染色镜检用于Hp特殊染色的方法有Ciemsa染色法，银染色法，中性红、碱性品红染色法等，是临床诊断Hp感染常用的方法。现介绍碱性品红染色法如下：将标本制片，95％乙醇固定3min，水洗，加2.5g/L碱性品红染3min，加丙酮再固定3秒，吹干封片，镜检。该法由于胃镜取样范围的局限可造成假阴性。不同实验者其结果也会有差异。由于判断结果依据形态学特征，非Hp细菌也有可能被误判为阳性。

3.Hp抗体检测Hp感染可引起宿主产生局部或全身性的免疫应答而产生IgG和IgA抗体。Hp抗体阳性是诊断Hp感染的指标之一。国内外有多种检测Hp抗体的试剂盒，方法有胶乳凝集试验、血球凝集试验、荧光免疫、酶免疫、金标渗滤和蛋白印迹等。其中，Hp抗体定性最常用的方法有金标法和酶免(EIA)法。定量检测Hp抗体比定性检测更有意义。由于Hp是一种慢性感染，抗体不能自身消除，但当Hp清除后，其抗体滴度可下降。

4.尿素呼气试验是根据Hp能分泌尿素酶，迅速分解尿素而设计的。当患者服用同素标记的尿素后，胃内Hp分泌的尿素酶将尿素分解，释放出同位素标记的CO2被吸收到血液中，并经肺呼出体外。定量收集受试者呼出的气体样品，以液闪仪测定。乎气试验具有操作简便、快速和非损伤性等优点。是一种无放射性的同位素，但其价格墨贵，国内尚未广泛使用。具有放射性，对人体易造成一定的损害，不宜经常使用。此当患者服用抗Hp药物以及患者为残胃时易产生假阴性结果。由于该法检测的为Hp所给泌的尿素酶，因此不能区分有毒株和无毒株以及进行Hp的分子生物学分析等。

5．15N-尿氨排出试验其原理也是根据Hp能产生尿素酶而设计的。当患者口服15N标记的尿素后，尿素被分解为氨和CO2氨被吸收入血，由尿液中以15NH4+的形式排出。通过测定尿液中15NH4+的排出量和排出速率来判断Hp量。该方法简便、非损伤性、无放射性，随其与快速脲酶和尿素呼气试验一样，当患者服用抗生素、铋剂等抑菌剂时，易产生假阴性瞎果，也不能区分有毒株和无毒株等。

6.吞线团法检查幽门螺杆菌有鉴于培养、呼气试验等方法的不足，作者研制了一种鬈线团法取样检查Hp的方法。该方法具有简便、准确、非损伤性等优点，并能区分有毒株和无毒株感染，能广泛应用于Hp的诊断和研究。取样及检查方法：嘱患者早晨空腹，温开水吞入采样胶囊，根据患者体形，吞人线的长度约为从鼻尖到剑突的距离，其余部分留在口外，30～45min后，轻轻抽提取出线团，用无菌剪刀剪取线团部分，剪取线团的一半放入尿素培养基，置37℃，分别在6h、24h后观察培养基颜色变化，变红色为脲酶试验阳性；线团的另一半放入装有1ml灭菌生理盐水的1.5ml离心管中洗涤，弃线团，离心管中洗涤液经12000g离心10min后，弃上清液，用沉淀物提取DNA作PCR检测Hp-DNA或作其他分子生物学研究。

参考文献

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