乌索酸对不同性别小鼠酒精性肝损伤保护作用研究

乌索酸对不同性别小鼠酒精性肝损伤保护作用研究

李庆宇，叶淑姿，过欣彤，申玉华，孙叶盛，刘慧（通讯作者）

（长沙医学院湖南长沙410219）

摘要：目的研究乌索酸对不同性别小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法将小鼠分为按照性别分为雌雄两大组，再按不同性别例将小鼠分为3组，采取对其采取损伤和保护措施，实验结束后采集其血清，并制作肝匀浆，然后测定比较其ALT、AST以及MDA，对结果进行分析与讨论。结果研究结果表明不同时间段各组小鼠体重差异明显具有统计学意义（P＜0.05）；研究还对各组不同性别小鼠的各项指标进行了比较，其中AST、ALT、MDA差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论乌索酸对雄性小鼠酒精性肝损伤的保护作用和效果均优于雌性小鼠。

关键词：乌索酸；乙醇性肝损伤；保护作用；小鼠

近些年来随着酒精消费的不断增长以及人们生活方式的改变等因素，我国酒精性肝损伤引起的酒精性肝病（AlcoholicliverDisease-ALD）,ALD发病率呈逐年上升的一个趋势，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，引起了社会各方面的重视[1]。乌索酸（Ursolicacid)别名又为熊果酸，是天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。有研究表明乌索酸可以有效阻止肝细胞坏死，能够对抗乙醇所致的肝脏脂质过氧化反应，减轻乙醇对肝细胞的损坏。于是本研究运用乌索酸对不同性别小鼠酒精性肝损伤的开展干预措施，观察其保护作用。

1对象与方法

1.1研究对象：昆明种小鼠，雄雌各45只，体重18—22g。将小鼠适应性喂养一周后采用随机数字法将其平均分为对照组、损伤组、保护组，每组15只。

1.2主要仪器及药剂

1.2.1主要仪器为：实验中所用到的仪器主要有离心机，分光光度计，水浴锅，匀浆器、微量天平等，均由长沙医学院所提供。

1.2.2主要试剂：熊果酸（纯度＞95%），聚山梨酯（熊果酸助溶剂）由长沙中仁生物科技有限公司提供，乙醇则使用市售52度红星二锅头。

1.2.3检测试剂盒：包括ALT谷丙转氨酶测定试剂盒，AST谷草转氨酶测定试剂盒，MDA丙二醛

测定试剂盒，均为南京建成生物工程研究所出品。

1.3实验内容及方法

1.3.1构建乙醇性肝损伤模型:对损伤组和保护组小鼠使用52度红星二锅头进行灌胃，按照小鼠的体重以10ml/kg的剂量进行灌胃，持续灌胃14天。

1.3.2各组小鼠给药：不同组别小鼠采取不同的实验方法，具体如下。

（1）对照组：对照组小鼠均进行正常喂养，在其他组别小鼠灌胃时，按照10ml/kg·bw灌胃生理盐水水以保证实验的公平。

（2）损伤组；损伤组小鼠均在每日上午使用酒精按10ml/kg·bw灌胃，使其造成肝损伤；在保护组灌胃保护药物时按10ml/kg·bw灌胃生理盐水，保证公平性。

（3）保护组：保护组小鼠在上午使用酒精造成损伤后，间隔8小时，将乌索酸、聚山梨酯和蒸馏水按1∶1∶2配比制备成乌索酸试剂，再按10ml/kg·bw对小鼠进行灌胃。连续14天。

1.4观察指标本研究主要从以下四个方面去评价小鼠肝脏的损伤程度

1.4.1体重：在实验开展前与实验结束后对小鼠的体重进行称量与记录。

1.4.2AST和ALT：取出小鼠肝脏，使用预冷的生理盐水进行冲洗，然后剪取0.2g，按1:10的固液比制成10%的肝匀浆，再使用试剂盒，严格按照说明书步骤进行测定。

1.4.3MDA：采用眼球取血，收集小鼠血液，在室温下静止30min，再使用离心机以3500r/min的速度离心10分钟，取其血清使用试剂盒进行MDA含量的测定。

1.4.4形态学观察：每日灌胃酒精及保护药物后对各组雌雄性小鼠的活动进行观察并记录。

1.5统计分析对实验中记录的数据进行整理；然后使用SPSS21.0统计软件对数据进行统计分析。计量资料用(均数±标准差)进行描述，多组之间采用F检验，两组以上采用方差分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同组别小鼠各时段体重变化比较

研究对不同组别不同性别的小鼠体重进行了称量与比较，其中发现第0天各组小鼠体重（F=0.19，P=0.96）差异无统计学意义（P＞0.05），而第十天各组小鼠体重（F=19.80，P=0.00）差异明显具有统计学意义；其中还发现保护组小鼠第十天雌雄性别的体重对比（t=2.08，P=0.04）差异具有统计学意义（P＜0.05），具体情况见表1。

注：*表示差异有统计学意义。

2.2不同组别小鼠不同性别各指标的比较

研究还对各组不同性别小鼠的各项指标进行了比较，其中AST（F=11.30，P=0.00）、ALT（F=14.72，P=0.00）、MDA（F=33.36，P=0.00）差异均具有统计学意义（P＜0.05），具体情况见表2。

注：*表示差异有统计学意义。

2.3各组小鼠形态学观察

实验在开展阶段对各组小鼠进行了细致的观察和记录，结果发现，大部分雄性小鼠在酒精灌胃后出现较为严重的醉酒反应，如陷入昏睡状态、行动失衡、步态不稳；而雌性小鼠醉酒反应大部分仅呈现步态不稳，部分则无明显异常。

3讨论

随着当代人的社交活动中酒精性饮料的消费不断增加，酒精性饮料在给人带来适度欢愉同时也给健康带来负担。其中最常见的主要为酒精性肝病，酒精性肝损伤的病理机制及其复杂，有多种途径都参与酒精性肝损伤，如乙醇及代谢产物乙醛造成的损伤、固有的氧化应激机制、炎症机制等等[4]。乌索酸对酒精性肝损伤的保护机制主要是在氧化应激以及脂质过氧化上产生作用[5]。研究结果发现，在体重上三组雄性小鼠的体重都要明显高于雌性小鼠，这可能与雌雄身体发育有关，雄性小鼠在一般的情况下体重都要重于雌性小鼠。而各项指标的结果比较表明，在损伤时雌性小鼠AST、ALT、MDA指标升高幅度大于雄性小鼠的升高程度，而在保护时，下降幅度也要优于雌性小鼠。乙醇可以激活氧分子产生氧自由基导致肝细胞膜的脂质过氧化损伤，使AST、ALT从受损肝细胞内逸入血液，因此AST和ALT值的高低一定程度上可以表明肝脏细胞的损伤程度；而MDA的量也是反应机体内脂质过氧化的程度的一个指标，MDA的高低能够间接的去表明了机体细胞受自由基攻击的严重程度，也能够反映出细胞损伤的程度[6,7]。

综上所述，酒精对雌性小鼠的肝损伤较大，但形态学表现不明显，而雄性小鼠在形态学上表现较为明显，但损伤较少，且原花青素对其保护和恢复作用较好，其原因和机制有待进一步探索。

[参考文献]

[1]郑佳露,闫霞,沈克平,胡兵.乌索酸防治肿瘤作用及机制[J].现代中西医结合杂志,2018,27(03):335-338+342.

[2]董小英,彭国良,唐胜球.乌索酸生物学功能的研究进展[J].广东饲料,2017,26(12):25-27.

[3]吴计超,祝杰,聂东雷,潘思颖,黄群.钩藤中乌索酸和钩藤碱对肝癌细胞株HepG2的影响[J].中国中医药信息杂志,2017,24(05):63-66.

[4]周恒,李俊,王华.酒精性肝病动物模型研究进展[J].中国药理学通报,2016,32(04):468-472.