黄芪多糖的提取及含量测定方法简述

黄芪多糖的提取及含量测定方法简述

惠秋沙

惠秋沙（山东中医药大学药学院山东济南250014）

【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）22-0220-02

【摘要】黄芪是一种传统中药材，含有多种有效成分，其中黄芪多糖是黄芪补气的主要活性成分之一，现就其提取方法和含量测定做一简单的分析。

【关键词】黄芪多糖提取含量测定

TheExtractingandtheContentDeterminationMethodofAstragaluspolysaccharides

HuiQiu-sha(PharmaceuticalCollege,ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,Jinan,China250014)

【Abstract】AstragalusisakindoftraditionalChineseherbalmedicine.Itcontainavarietyofeffectiveingredients,inside,astragaluspolysaccharidesareoneofthemaincompositionstonifyingqiastragalus.Currently,wemakeasimpleanalysisontheextractingandthecontentdeterminationmethodofastragaluspolysaccharides.

【Keywords】Astragaluspolysaccharidesextractioncontentdetermination

黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，是一种传统的中药材，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。现代研究表明，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种成分，其中黄芪多糖是黄芪补气的主要有效成分。

黄芪多糖的其提取方法包括传统的回流法、水提醇沉法以及现代提取方法，现总结了近年来研究应用比较多的提取方法，并对其含量测定方法作一综述。

1提取方法

黄芪多糖的传统提取方法包括回流法和水提醇沉法[1]，就目前研究状况来看，水提醇沉法由于其方法简单、设备要求低等优点应用更为广泛，但该法提取率不高，且会将植物细胞内的可溶性蛋白质一起溶出，故使得所得多糖含杂志较多，近年来，学者们对水提醇沉法进行了改善，如将水提改为碱提从而提高了多糖收率[2]。

随着现代技术的发展，多糖的提取方法也日益丰富起来，如超声技术、微波提取技术以及酶技术都逐渐运用到对黄芪多糖的提取中来。

超声提取法由于其时间短、耗时少、得率高等优点已经被广泛的应用到对药物有效成分的提取以及溶解中来，一般地，该法配合水提法、回流法或其他方法时可取得更好的效果。实验表明该法会受到超声频率、超声时间等因素的影响，故优化实验条件时需考虑最佳提取条件[3]。

微波辅助提取是近年来新兴的一种提取技术，其利用物质在微波场中吸收微波能力的差异从而达到提取目的，具有适用范围广、提取效率高、重现性好、污染小等特点。龚苏晓等就采用了微波技术提取了黄芪中的多糖，通过实验初步获得了提取多糖的优化条件，即在900W的功率下提取30min，并发现该法较回流法的提取时间缩短了近8倍[4]。

利用酶技术提取中药有效成分的研究亦日益普遍，常用的酶有纤维素酶和木瓜蛋白酶，由于中药中有效成分一般包裹在职务的细胞壁内，且常与水溶性蛋白结合，故可采用纤维素酶进行预处理，破坏细胞壁组织，用木瓜蛋白酶对蛋白质进行降解，从而提高多糖的收率。如张晓伟等就采取了纤维素酶提取黄芪多糖，并初步优化了其提取条件，即在pH=4.0，温度56.5℃条件下加入61U/g纤维素酶[5]。

此外还有其他提取方法，如超高压技术[6]等，但由于其设备的限制，尚未得到普及。

2含量测定

测定中药中多糖含量的方法有很多，如常用的滴定法、紫外分光光度法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法等，也有近年来新兴的毛细管电泳法等等[7]。一般地，对中药中多糖含量的测定，都是先将其经过预处理为单糖再进行测定的，由于单糖的还原性，故可通过还原性滴定来测定，还可用显色剂将其显色后通过比色法测定，或者通过HPLC等色谱技术实现对其单糖的分离和测定。针对黄芪多糖的含量测定，常用的方法是比色法的三种显色方法，详细讨论黄芪多糖的含量测定方法。

2.1苯酚硫酸法

苯酚硫酸法测定多糖含量的原理是多糖在浓硫酸作用下迅速水解生成单糖，并与苯酚脱水生成橙色衍生物，在480～490nm下采用紫外分光光度仪测定多糖的含量，该范围内其吸收值与糖浓度呈线性关系，崔翠云等就运用了该法测定了黄芪中多糖的含量，得到较为满意的结果[8]。在运用该法测定时会受到苯酚溶液用量、浓硫酸用量、反应时间和水浴温度这四个因素的影响，但具有不受蛋白质影响、稳定性好、准确度高的优点。

2.2蒽酮硫酸法

蒽酮硫酸法测定多糖含量的原理与苯酚硫酸法类似，不同的时该法须在625nm处测定，且蒽酮硫酸溶液需现用现配。影响蒽酮硫酸法测定多糖含量的因素包括蒽酮硫酸溶液用量、反应时间和水浴温度。有报道表明，该法受蛋白影响较大，但也有学者将其与苯酚硫酸法进行了比较，结果证明该法测定黄芪多糖含量的线性关系较好[9]。

2.3DNS法。

DNS法的原理是以3，5-二硝基水杨酸与多糖水解的还原糖共热后生成棕红色的氨基化合物完成显色，再在紫外最大吸收波长处其吸收值，其与糖浓度呈线性关系，夏春森等实验表明，取2mLDNS试剂于100℃下显色5min,在500nm处测定，得到较好的结果[10]。该法操作简单，重现性好，但由于DNS试剂配好后须静置一段时间，故耗时较长。

3讨论

黄芪多糖的提取包括传统的回流法、水提醇沉法和现代提取方法，现代提取方法又包括超声辅助提取、微波辅助提取、酶法提取等等，传统的提取方法操作简单、对设备要求低，但提取率不高且耗时长，近年来通过研究对传统提取方法进行了改善，提高了多糖收率。相对于提取而言，对黄芪多糖的含量测定相对滞后，目前基本上大多数针对黄芪多糖的含量测定只局限于紫外分光光度法，且同其他植物多糖相同，具有较为成熟的测定方法与体系，在未来发展中，可将分离性好、准确度高的HPLC法或高效毛细管电泳法等新技术运用到对黄芪多糖的含量测定中来。

参考文献

[1]朱虎成.黄芪多糖的提取与应用研究[J].中国动物保健.2011.(3):25-26.

[2]刘永录,张国祖,等.黄芪多糖的提取和纯化方法研究[J].河南农业科学.2010.(6):141-143.

[3]宋清焕,赵喜兰.物理条件对黄芪多糖提取的影响[J].安徽农业科学.2010,38(9):4422,4426.

[4]龚苏晓,高展,等.微波辅助提取黄芪多糖及含量测定[J].时珍国医国药.2008.19(4):784-786.

[5]张晓伟,张培正,等.酶法提取黄蔑多糖的工艺优化[J].食品与发酵工业.2007.33(5):158-161.

[6]刘春娟,张守勤,等.超高压技术提取黄芪多糖的研究[J].中成药.2009.1(9):1359-1363.

[7]邸明磊,单晓菊,等.中药多糖的含量测定方法概述[J].天津药学.2010.22(6):53-55.

[8]翟翠云,李晓平,等.黄芪多糖含量测定方法的探讨[J].广西畜牧兽医.2007.23(1):8-9．

[9]田喜莲,牟学文.黄芪中黄芪多糖含量测定方法的比较[J].中国民族民间医药.2010.(24):13-15.

[10]夏春森,韦史利,等.3,5-二硝基水杨酸比色法测定黄芪多糖的含量[J].中国民族民间医药杂志.2009.18(8):13-14.