探讨溶血和脂血两种因素对HBVDNA实时荧光定量PCR方法的影响

探讨溶血和脂血两种因素对HBVDNA实时荧光定量PCR方法的影响

王瑞雪

王瑞雪

河南省淮阳县疾病预防控制中心466700

【摘要】目的：对脂血与溶血两种因素对于HBVDNA实时荧光定量PCR方法的影响予以探讨。方法：随机选取我院2013年1月至2013年12月间收集的临床HBVDNA标本30例，依据其浓度划分为I水平、II水平，收集正常人标准以及HBVDNA阴性的重度乳糜状脂血标本，将这些标本按照不同的比例进行混合，将其制作成正常TG浓度不同HBVDNA水平：CI组、CII组；高TG浓度不同HBVDNA水平：BI组、BII组；极高TG浓度不同HBVDNA水平：AI组、AII组，并开展实施荧光定量PCR扩增。并收集临床上的HBVDNA标本，为每个人采集到3份血液标本，将其中两份在零下20度的环境中冷冻不同的时间，将其制成重度溶血DI、DII组，无溶血对照组FI、FII组，中度溶血EI、EII组，同样对其开展实时荧光定量PCR扩增，对各个检测结果进行对比分析。结果：不同浓度的溶血与脂血的两种水平的HBVDNA荧光定量PCR检测结果之间的差异不具备统计学意义。结论：溶血与脂血两种因素对于HBVDNA实施荧光定量PCR的结果没有影响。

【关键词】溶血；脂血；HBVDNA；实施荧光PCR

【中图分类号】R556.6【文献标识码】A【文章编号】1276-7808（2015）-07-363-01

临床上进行标本的采集与检测的过程中，不同类型的标本存在着各种不同的性质，对于血清标本来说，不同的血清标本通常会存在不同程度的脂血与溶血标本[1]，本文主要对溶血与脂血两种因素对于HBVDNA实时荧光定量PCR方法结果的影响予以探讨，现报告如下：

1资料与方法

1.1一般资料

随机选取我院2013年1月至2013年12月间收集的临床HBVDNA标本30例，所有标本都没有血脂异常，没有溶血，每例采集3毫升血液，依据HBVDNA的浓度将浓度大于等于1×105的15例标本设定为I水平，将另外15例临界浓度处于1.0×103~1.0×104的标本设定为II水平，并要收集乙肝表面抗体为阳性或者是两对半为全阴性的没有溶血、肝功能正常的重度乳糜状脂血标本5例，正常人血清标本5例，都采集3毫升血液，及时进行血清分离，并放于零下20度的环境中保存。

1.2方法

本次研究中需要用到的仪器与试剂有：三酰甘油生化试剂、紫外可见分光光度计、全自动生化仪、HBVDNA试剂、荧光定量PCR仪等。收集正常人标准以及HBVDNA阴性的重度乳糜状脂血标本，将这些标本按照不同的比例进行混合，将其制作成正常TG浓度不同HBVDNA水平：CI组、CII组；高TG浓度不同HBVDNA水平：BI组、BII组；极高TG浓度不同HBVDNA水平：AI组、AII组，并开展实施荧光定量PCR扩增。并收集临床上的HBVDNA标本，为每个人采集到3份血液标本，将其中两份在零下20度的环境中冷冻不同的时间，将其制成重度溶血DI、DII组，无溶血对照组FI、FII组，中度溶血EI、EII组，依据相关的试剂盒使用说明书，对待测标本及室内质控标本同时开展检测[2]。

1.3统计学分析

本次研究中相关数据的处理应用统计学处理软件SPSS17.0来开展，若P<0.05，表示差异具有统计学意义。

2结果

不同TG浓度对于HBVDNA实施荧光定量PCR的检测结果没有影响，具体数据如表1所示：

3讨论

实时荧光定量PCR在开展标本检测的过程中，具有很高的特异性与灵敏度，这使得其在临床诊断中具有广泛的应用，这也有利于相关疾病诊断准确性的快速提升，但是临床上的标本具有多样性的特点，在药物、脂血、溶血等多种因素的影响之下，也很容易出现检测结果假阴性的情况发生[3-4]。有研究理论认为，不同脂血与溶血程度会对HBVDNA定量检测结果产生影响，本次研究中，通过对不同脂血与溶血的标本同时开展实时荧光定量PCR检测发现，不同溶血标本的HBVDNA实时荧光定量PCR检测结果的差异不具备统计学意义；同时不同脂血标本的HBVDNA实时荧光定量PCR检测结果的差异不具备统计学意义。由此可见，溶血与脂血两种因素对于HBVDNA实施荧光定量PCR的结果没有影响。

参考文献：

[1]张翠莉，刘萍，魏文波.脂血和溶血对HBVDNA实时荧光定量PCR检测的影响[J].武警医学，2012，15（22）：432-433.

[2]于倩，杜菁，王蓓.溶血和脂血两种因素对HBV-DNA实时荧光定量PCR方法的影响[J].中外医学研究，2015，25（2）：123-125.

[3]毛雄英，王卫华，王德扬，陈辉.模板提取方法对HBVDNA实时荧光定量PCR检测的影响[J].中国卫生检验杂志，2010，10（5）：678-679.

[4]边立忠，宋广辉，赵素芝，王清.LNA探针实时荧光定量PCR检测HBVDNA的研究[J].中华临床医师杂志（电子版），2013，15（11）：235-236.