肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型检测的临床意义

肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型检测的临床意义

王辉

王辉

（山东省寿光市人民医院262700）

【摘要】目的探讨肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型，了解肺癌患者的基线免疫状态。方法采用流式细胞仪分别检测60例肺癌患者（肺癌组）和20例正常人（对照组）外周血淋巴细胞免疫分型，并对两组进行比较。结果肺癌患者CD3（+）、CD4（+）、自然杀伤细胞（NK细胞）比例及CD4（+）/CD8（+）比值均低于对照组(P<0.05)，CD8（+）细胞比例高于对照组(P<0.05)，CD19（+）细胞比例与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。结论肺癌患者免疫功能与正常人群相比存在降低趋势，外周血淋巴细胞免疫分型可作为肺癌患者免疫监测的一种方法。

【关键词】肺肿瘤淋巴细胞免疫分型免疫监测

【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）22-0097-01

机体免疫功能在抗肿瘤过程中起着重要的作用，不同淋巴细胞免疫分型在机体免疫的调控和抗肿瘤免疫中起重要作用。肺癌的发生、发展与宿主免疫监视功能低下有关。近年来研究发现，肺癌患者免疫功能低下主要表现为T淋巴细胞和NK细胞功能紊乱与缺陷。监测肺癌患者免疫状态有助于合理选择最佳的治疗方法并评价疾病的预后。本研究采用流式细胞仪检测了肺癌患者外周血淋巴细胞免疫分型的变化情况，以初步探讨肺癌患者的免疫功能状态变化，评估病情状况，指导免疫治疗。

1资料和方法

1．1研究对象和分组2006年10月～2007年4月在我院经病理确诊为肺癌的患者60例（肺癌组），其中男性47例，女性13例，年龄34～82岁（中位年龄66岁）。根据美国联合癌症分类委员会（AJCC）和国际抗癌联盟（UICC）2002年制定的肺癌的TNM分期标准临床分期如下：Ⅱ期1例，Ⅲ期23例，Ⅳ期36例；病理类型为：鳞癌23例，腺癌20例，小细胞癌7例，未定型10例。对照组20例均为既往无相关疾病的健康体检者，其中男性16例，女性4例，年龄51～78岁（中位年龄64岁）。

1.2实验方法

1.2.1标本采集及处理取肺癌组患者及对照组健康体检者静脉血3ml加入含肝素的抗凝管中混匀后备用。取专用试管6支，各试管加入外周血标本100μl，分别加入CD45-异硫氰酸荧光素（FITC)/CD14-藻红脘（PE）,IgG1-FITC/IgG2a-PE，CD3-FITC/CD19-PE，CD3-FITC/CD4-PE，CD3-FITC/CD8-PE，CD3-FITC/CD16（+）56-PE单克隆双色抗体15μl，与之充分混匀，室温避光下孵育15min，然后每管加入10×FACS(红细胞裂解液)溶血剂2ml，充分混匀，室温避光下溶血10～15min（15～22℃）至完全透明，1500r/min离心10min，弃上清液，PBS洗涤3次，每管加入0.5mlPBS液悬浮，混匀放置室温下待测。

1.2.2淋巴细胞免疫分型检测用Becton-Dickinson公司生产的FACSCalibur型流式细胞仪测定。

1.3统计学处理本实验数据采用SPSS11.0软件处理，检测结果以±s表示。肺癌患者与对照组之间的比较采用独立样本的双侧t检验，P<0.05为差异有显著性。

2结果

肺癌组外周血CD3（+）、CD4（+）、NK细胞比例及CD4（+）/CD8（+）比值均低于对照组（P<0.05），而CD8（+）细胞比例高于对照组（P<0.05），CD19（+）细胞比例与对照组相比差异无显著性（P>0.05）。见表1略。表1肺癌患者与正常人淋巴细胞免疫分型的比较与对照组比较：*P<0.05

3讨论

机体免疫监视功能缺陷可能是肿瘤发生发展过程中的常见事件。随着对肿瘤病因的认识的深入，人们发现淋巴细胞亚群改变导致的免疫功能损害可能与肿瘤的发生、发展和预后相关，目前研究最多的是T细胞亚群的测定[1]。

T淋巴细胞不仅是细胞免疫的效应细胞，而且在调节免疫反应中起重要作用。T细胞亚群表面分子主要包括CD3（+）、CD4（+）和CD8（+）等。CD3（+）T细胞存在于所有成熟T细胞膜上，代表了宿主总的T细胞数量和细胞免疫状态。CD4（+）分布在辅助细胞诱导亚群和抑制细胞诱导亚群表面，又称T辅助或诱导细胞，在抗肿瘤免疫中起着积极的作用，其主要功能是通过分泌淋巴因子，增加和扩大免疫应答过程，辅助诱导其它免疫细胞共同发挥抗肿瘤作用。CD8（+）分布在抑制性T细胞和杀伤性T细胞表面，不仅具有负调节效应，同时具有维持抗肿瘤免疫记忆的功能，并能抑制B细胞产生抗体。CD4（+）/CD8（+）比例的恒定维持着细胞免疫反应的平衡，肿瘤抗原识别和杀伤分别通过CD4（+）T细胞和CD8（+）T细胞完成。Trojan等研究表明，在非小细胞肺癌的患者中，CD8（+）T细胞虽然能浸润入肿瘤细胞中，但由于不能被充分激活而无法产生有效的抗肿瘤作用。Prado-Garcia等发现CD8（+）T细胞亚群的比例不受T细胞产生的细胞因子刺激而改变，这种改变是导致肺癌患者抗肿瘤免疫效应低下的原因之一。此外，NK细胞也是机体免疫监视系统的主要组成部分，是机体抗肿瘤的第一道防线，参与T淋巴细胞、B淋巴细胞的调节，是细胞免疫中的非特异性成分[2]。在多数情况下，NK细胞不依赖抗体、补体及预先致敏，可自发启动杀伤功能，并与单核细胞、粒细胞等协同发挥抗肿瘤、抗感染的免疫调节作用，但其活性可被肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子抑制，从而降低机体对肿瘤的抵抗力。近年来的研究还表明：NK细胞不仅在非特异性抗肿瘤免疫中发挥重要作用，并且具有激活和增强重要的抗原递呈细胞树突状细胞（DC）的功能，因此，NK细胞起到连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁作用。我们的研究发现，和对照组相比，肺癌患者机体免疫活性细胞比例存在异常，主要表现为淋巴细胞免疫分型比例失调，如CD3（+）、CD4（+）、NK细胞比例下降，CD8（+）细胞比例上升，CD4（+）/CD8（+）比值下降。提示肺癌患者存在免疫抑制和免疫调节功能紊乱，CD4（+）T细胞辅助诱导其它免疫细胞发挥抗肿瘤作用的功能减弱，CD8（+）T细胞数量增多，负调节效应增强；CD4（+）/CD8（+）比值下降，有利于肿瘤增殖。

CD19是B淋巴细胞膜表面标志，B淋巴细胞主要介导体液免疫。本研究结果显示，肺癌患者与正常人相比CD19（+）细胞比例差异无显著性，显示体液免疫在肿瘤免疫中并非处于主要地位。

我们认为，肺癌患者细胞免疫功能较正常人群存有降低趋势，外周血淋巴细胞免疫分型测定可用于肺癌患者的免疫功能监测。研究肺癌患者的免疫功能状况在指南个体化治疗、疗效评价、功能状态评分及预后中的作用有待于更多前瞻性的临床研究。

参考文献

[1］任秀红，刘莉，刘平平，等.恶性肿瘤患者T细胞亚群变化及其与肿瘤分期的关系［J］.第三军医大学学报,2006,28(18):1906-1908.

[2］刘颖，吕桂蓉，吕秀荣.T细胞及其亚群指标在晚期肺癌化疗疗效评价中的应用［J].山东医药,2005,45(25):69.