两种不同给药计算方法对体外药效实验结果的影响

两种不同给药计算方法对体外药效实验结果的影响

肖凯

肖凯

湖南省妇幼保健院药学部湖南长沙410000

【摘要】目的探究根据浓度和单个细胞药物剂量给药计算方法对体外药效实验结果的影响。方法体外培养人肝星状细胞株（HSC－LX2），应用MTT法测定MFA对HSC－LX2的抑制增值效应，选择三个不同浓度进行实验，将两种不同数量细胞置于培养皿，分别以上述三个浓度与单个细胞MFA剂量进行干预，72小时后检测HSC－LX2细胞α－SMAmRNA表达，以及细胞内α－SMA蛋白含量。结果在两种不同数量细胞下，经过单个细胞MFA剂量干预后，相同MFA剂量组α－SMAmRNA表达与蛋白含量相同，而经过浓度计算干预后，相同MFA剂量组α－SMAmRNA与蛋白表达呈现显著差异。结论在MFA对HSC－LX2体外药效实验中，采用单个细胞药物剂量计算方法具有稳定性效果。

【关键词】给药计算方法；药物效应；甲基阿魏酸（MFA）；细胞实验

药物剂量和药物作用联系紧密，两者在确定范围内呈比例，剂量改变后会激活剂量相关靶，进而使药物效应出现变化，主要是质或者量产生改变。在实践中评估药物作用，要极其重视药物剂量这个影响因素。现阶段细胞实验中普遍应用的给药计算方法是根据质量分数、体积分速、摩尔浓度等。本文主要基于药物效应和单个细胞药物剂量具有相关性，对根据质量浓度、单个细胞药物剂量这两种给药计算方法对药物干预，研究不同细胞数量时两种不同给药计算方式，对体外药效实验结果的影响。现将报告如下。

1.材料与仪器\\zuozhaimeidakuan

（1）细胞材料：选取人肝星状细胞株（HSC－LX2）。

（2）药物试剂：甲基阿魏酸（MFA）、高糖DMEM培养基、胎牛血清、TGF－β1、高纯总RNA快速提取试剂盒、第一链合成试剂盒、鼠抗人GAPDH/α－SMA单克隆抗体、HRP标记兔抗鼠二抗[1]。

（3）仪器：培养箱、冷冻离心机、PCR仪、显微镜、凝胶电泳仪／电泳槽、全自动凝胶成像分析系统、蛋白电泳仪／电转膜仪。

2实验方法

2.1细胞培养

人肝星状细胞株（HSC－LX2）置于浓度为10%的胎牛血清、含有100U／mL青霉素和100nmol/L链霉素高糖ＤＭＥＭ培养基，培养温度为37℃，培养箱内二氧化碳浓度为5%（5%CO2）[2]，次日更换培养液，细胞为80%密度情况下，将0.25%EDTA胰蛋白酶消化，隔2~3小时传代1次，实验取按照指数繁殖的细胞进行。

2.2实验分组与给药

将HSC－LX2细胞接种于培养皿，各培养皿细胞数分别为5×10４和10×10４个，各16皿[3]。实验建立对照组、TGF－β1模型组、根据浓度分成1.25、2.5、5mg/L组，根据单个细胞MFA剂量分成1.13×10－7、2．25×10－7、4．5×10－7mg组。选择MTT法检测MFA对TGF－β1刺激HSC－LX2增殖的影响，RT－PCR检测HSC－LX2细胞α－SMAmRNA表达，检测细胞内α－SMAmRNA蛋白含量[4]，得出胶片由凝胶成像分析系统分析，取三次平均值统计分析。

2.3统计学分析

对本次研究所得数据均采取SPSS17．0统计软件展开分析。其中，计量资料以（）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验；若P＞0.05时，差异没有统计学意义。

3.结果

3.1MFA对HSC－LX2细胞增值的影响

MFA质量浓度范围在0.31～5.0mg/L情况下，MFA浓度越高，对HSC－LX2的增殖抑制作用越强，两者成正相关；MFA质量浓度范围在5.0～40.0ｍｇ／Ｌ情况下，MFA浓度越高，对HSC－LX2的增殖抑制作用越弱，两者成负相关；MFA浓度为5mg/L时对HSC－LX2增殖抑制作用最强。选择浓度较小、抑制作用较强的三个浓度继续实验，分别是1.25、2.5、5mg/L。

3.2两种不同给药计算方法对MFA抑制细胞α－ＳＭＡｍＲＮＡ表达的影响

分别根据浓度对MFA干预72小时后，培养皿细胞数是5×10４情况下，MFA2.5mg/L组抑制α－SMAmRNA表达效果相比于模型组更好（P＜0.01），MFA1.25mg/L、5mg/L组抑制α－SMAmRNA表达效果与模型组对比差异不显著（P＜0.05）。培养皿细胞数是10×10４个情况下，MFA1.25mg/L组抑制α－SMAmRNA表达效果与模型组对比差异不显著，而MFA2.5mg/L、5mg/L组抑制α－SMAmRNA表达效果与模型组比较差异明显（P＜0.01）。根据单个细胞MFA剂量给药72小时后，两种不同细胞数量下每个相同MFA含量组α－SMAmRNA表达趋势相同，相比于与模型组，2．25×10－7、4．5×10－7mg两组差异明显（P＜0.01），1.13×10－7mg组无统计学差异。

3.3两种不同给药计算方法对ＭＦＡ抑制细胞α－ＳＭＡ蛋白表达的影响

分别根据浓度对MFA干预72小时后，培养皿细胞数是5×10４情况下，MFA2.5mg/L组抑制α－SMA蛋白表达效果相比于模型组更好（P＜0.01），MFA1.25mg/L、5mg/L组抑制α－SMA蛋白表达效果与模型组对比差异不显著（P＜0.05）。培养皿细胞数是10×10４个情况下，MFA1.25mg/L组抑制α－SMA蛋白表达效果与模型组对比差异不显著，而MFA2.5mg/L、5mg/L组抑制α－SMA蛋白表达效果与模型组比较差异明显（P＜0.01）。根据单个细胞MFA剂量给药72小时后，两种不同细胞数量下每个相同MFA含量组α－SMA蛋白表达趋势相同，相比于与模型组，2．25×10－7、4．5×10－7mg两组差异明显（P＜0.01），1.13×10－7mg组无统计学差异。

4.讨论

在细胞试验过程中，药物效应是药物分子和细胞间互相作用的结果，药物效应受到细胞原本功能水平变化、细胞密度、细胞受体位点、细胞亲和力等影响。本次研究结果中，在两种不同数量细胞下，经过单个细胞MFA剂量干预后，相同MFA剂量组α－SMAmRNA表达与蛋白含量相同，而经过浓度计算干预后，相同MFA剂量组α－SMAmRNA与蛋白表达呈现显著差异（P＜0.01）。在适当的细胞密度条件下，根据浓度给药也会得出相应试验结果，这就说明在对细胞接种时必须控制好细胞数量[5]。在MFA对HSC－LX2体外药效实验中，采用单个细胞药物剂量计算方法具有稳定性效果。

参考文献：

[1]杨成芳，李丽，李勇文，钟毓娟，熊美丽，方舒萍.两种不同给药计算方法对体外药效实验结果的影响[J].实验技术与管理，2016，01：35-39.

[2]程钰.甲基阿魏酸对人肝星状细胞的增殖抑制作用及对α-SMA和Ⅰ型胶原表达的影响[D].桂林医学院，2014.

[3]容明智，李丽，李勇文，庞文肖，程钰，何善云，冯小珍.甲基阿魏酸对肝星状细胞增殖和细胞外基质的影响[J].中国医药科学，2012，23：32-34.

[4]秦棪楠，钟耀刚，李铮.人肝星状细胞激活和抑制及其相关分子机制的研究进展[J].中国细胞生物学学报，2011，10：1127-1136.

[5]杨成芳，李丽，李勇文，容明智，庞勇军，方舒萍，韦冰华.甲基阿魏酸对乙型肝炎病毒转基因小鼠的抗病毒作用研究[J].中国药房，2016，13：1791-1793.