PCR和FISH技术在子宫颈淋巴瘤与淋巴瘤样病变诊断和鉴别诊断中的作用

PCR和FISH技术在子宫颈淋巴瘤与淋巴瘤样病变诊断和鉴别诊断中的作用

罗小娟

益阳市中心医院湖南益阳413000

【摘要】目的分析子宫颈淋巴瘤样病变与淋巴瘤临床分别采用PCR、FISH技术诊断、鉴别的效果。方法对我院2015.1-2017.9期间收治的5例子宫颈淋巴瘤样病变、8例原发性子宫颈弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者回顾性分析，观察患者临床分别以FISH检查、PCR-IgH重排检测诊断情况。结果DLBCL者均发生IgH基因重排，同时间期FISH检测IgH、bcl-6基因断裂，bcl-2、myc基因未断裂；子宫颈淋巴瘤样病变PCR—IgH检测，2例出现单克隆重排；间期FISH检测无IgH、bcl-2、myc、bcl-6基因断裂，1例myc基因多拷贝现象。结论FISH检测能帮助临床鉴别、诊断子宫颈淋巴瘤样病变、淋巴瘤疾病，可临床推广应用。

【关键词】FISH；淋巴瘤；PCR；淋巴瘤样病变

淋巴瘤是临床较见为常见的疾病类型，但原发性子宫颈淋巴瘤发病率较低，相关数据统计显示其发病率仅为非霍奇金淋巴瘤的0.5%，目前原发性瘤体免疫表型以B细胞多见，其中DLBCL为发病率最高原发性淋巴瘤疾病[1]。子宫颈淋巴瘤样病变是病理特征表现受良性炎症刺激淋巴组织增生主线增生的一种疾病，由于疾病临床在活检中有B细胞浸润情况，导致临床时容易出现误诊，将淋巴瘤样病变与淋巴瘤混淆[2]。本文观察子宫颈淋巴瘤样病变与淋巴瘤者临床分别以PCR、FISH技术诊断、鉴别的情况，旨在为后期临床疾病诊断提供依据。

1资料与方法

1.1一般资料

对2015.1-2017.9期间收治的5例子宫颈淋巴瘤样病变、8例原发性子宫颈弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者回顾性分析，患者入院后取活检标本、附件切除标本行PCR、FISH检测，患者年龄区间37～70岁，平均（52.9±4.3）岁。

1.2方法

PCR—IgH检测选择半巢式PCR方法，将两组引物分别扩增到IgH基因的CDRIII和CDRII区，第一轮引物为FR2A或FR3A和LJH，第二轮引物为FR3A和VLJH或FR2A.其中FR3A片段大小为80～120bp，FR2A为240～280bp，阳性对照为淋巴瘤组织标本DNA（有单克隆性重排），阴性对照组为无模板DNA的PCR扩增产物、增生淋巴结组织DNA。

FISH检查通过对bcl-6、bcl-2、myc等基因行断裂检测，采用双色分离探针（美国Vysis公司）LSImyc、LSIbcl-6、LSIbcl-2来分别检测myc基因、bcl-6、bcl-2是否存在断裂。同时在间期FISH于4～5m厚石蜡切片上进行切封片，操作步骤按照说明书进行，后切片在荧光显微镜下。

1.3观察指标

患者经FISH检查、PCR-IgH重排检测结果，本次诊断标准参照WHO中关于淋巴造血组织肿瘤的分类。

2结果

2.1子宫颈淋巴瘤病理变化PCR—IgH检测经电泳（10%聚丙烯酰胺凝胶），溴化乙锭染色，可在紫外透射仪下出现清晰、特异、锐利的电泳条带，IgH基因发生单克隆重排；间期FISH检测IgH、bcl-6基因断裂，bcl-2、myc基因断裂未检出。具体情况见表1。

3讨论

DLBCL临床组织学检查主要表现为固有层内淋巴细胞增生浸润，腺体被破坏，且浸润多呈弥漫性、致密性，同时细胞多胞质丰富、体积较大、核仁明显、核大，易见核分裂，核多显类圆形、染色质粗。而子宫颈淋巴瘤样病变者临床组织学多显示子宫颈黏膜内淋巴细胞增生浸润，且侵润呈片状、弥漫性，同时细胞核仁明显、体积较大、易见核分裂，有中心母细胞分化现象[3]。两种疾病在组织学检查中相似处较多，导致临床若仅通过活检诊断，易出现误诊，故有学者提出通过结合分子生物学检测结果进行综合判断。

本次DLBCL、子宫颈淋巴瘤样病变临床检测，发现PCR—IgH检测中2例子宫颈淋巴瘤样病变者出现IgH基因重排，但淋巴瘤样病变是一种良性增生性病变，目前临床未发现其与淋巴瘤之间明确的相关性，提示IgH基因重排非B细胞淋巴瘤特有，淋巴瘤样病变也可能存在IgH基因改变[4]。同时本文间期FISH检测，虽然子宫颈淋巴瘤样病变有myc基因出现多拷贝现象，但bcl-2、IgH、bcl-6未检出基因断裂情况，结果表明通过对患者进行间期FISH检测不仅能有效诊断疾病，还可鉴别子宫颈淋巴瘤样病变、淋巴瘤。但需要注意的是FISH、PCR只能作为辅助行诊断手段，临床在判断疾病时，仍需要结合患者组织形态、免疫组化检查结果，进行综合判断，以提高临床诊断准确度[5]。

综上所述，FISH检测能帮助临床鉴别、诊断子宫颈淋巴瘤样病变、淋巴瘤疾病，可临床推广应用。

参考文献

[1]张济,李羿,李君君等.应用RT-PCR和荧光原位杂交监测急性早幼粒细胞白血病微小残留白血病[J].中国实验诊断学,2012,16(3):423-425.

[2]吴禹,梁治平,步军等.原发性子宫颈非霍奇金淋巴瘤1例[J].中国医学影像技术,2017,33(6):911.

[3]江冬瑞,王弦,吴强等.荧光原位杂交技术操作的常见问题分析[J].临床与实验病理学杂志,2015,31(12):1426-1427.

[4]何玥,吴玉梅,赵群等.Ⅰ期子宫颈癌和子宫颈上皮内瘤变Ⅲ患者合并阴道上皮内瘤变的临床分析[J].中华妇产科杂志,2015,50(7):516-521.

[5]姚时贤,冯华英.HPV-DNA分型及SCCA在宫颈上皮内瘤样病变与宫颈癌中的检测和临床意义[J].中国妇幼保健,2013,28(11):1743-1746.