头孢克肟相关物质的RP-HPLC方法建立分析

头孢克肟相关物质的RP-HPLC方法建立分析

孙威

孙威(辽宁省沈阳市骨科医院110044)

【中图分类号】R97【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）18-0146-02

【摘要】目的对采用RP-HPLC法对头孢克肟相关物质进行检测分析的具体情况，为今后实验室工作提供参考。方法色谱条件：C18柱，规格250mm×4.6mm，10um；流动相为：PH值为7.0，浓度为0.1mol/L的醋酸铵缓冲液-乙腈(96︰4)，检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为35℃。在以上条件下对头孢克肟相关物质进行测定。结果头孢克肟浓度在1754.9-88.3ug/L范围内时存在良好线性关系，r=0.9999，10小时内稳定性号良好，重现性良好。结论采取RP-HPLC法检测头孢克肟相关物质含量时具有分析速度快，重现性好，能够将其作为对头孢克肟的含量以及相关物质的测定方法。

【关键词】RP-HPLC头孢克肟相关物质测定

临床上头孢克肟为第三代口服头孢菌素，该药物的抗菌谱广且杀菌效果十分显著，特别是对肺炎链球菌、淋球菌、产气杆菌、沙变形菌、雷菌属等存在较高的抗菌活性，体内分布相对较广，同时针对各种细菌形成的β-内酰胺酶稳定性良好，能够对大多数革兰阴性菌包括奈瑟球菌属、嗜血菌属、肠杆菌科等的大多数菌种进行有效的抑制，现阶段在临床上主要对耳鼻咽喉感染、呼吸道感染、胆囊炎、胆道炎、尿道感染等进行积极治疗[1]。本次研究中出于对对采用RP-HPLC法对头孢克肟相关物质进行检测分析的具体情况，为今后实验室工作提供参考的目的，在以上色谱条件下对不同批号的头孢克肟胶囊及其相关物质进行测定，并对测定结果进行了评价分析，现汇报如下。

1仪器与试剂

本次研究中所用仪器包括：Waters1525高效液相色谱仪(配套柱恒温箱、自动进样器)；Empower色谱管理系统；Waters2487型紫外检测器；UV2401-PC型紫外分光光度计。所用试剂为：头孢克肟原料购自印度Orchid公司，批号分别为XMEP100119，XMEP100120，XMEP100121；头孢克肟对照品(纯度为85.2%)购自中国药品生物制品检定所；所用乙腈、甲醇等均为色谱纯；醋酸铵、H2O2均为分析纯；所用水均为去离子水通过Milli-Qplus纯水器予以处理[2]。

2色谱条件

色谱条件：HypersilBDSC18柱，规格250mm×4.6mm，10um；流动相为：PH值为7.0，浓度为0.1mol/L的醋酸铵缓冲液-乙腈(96︰4)，检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，进样量为10ul，柱温为35℃[3]。

3方法与结果

3.1线性范围

精密称取头孢克肟对照品适量，采用甲醇进行溶解，经流动相稀释配制成浓度分别为0.10、0.25、0.49、0.98、1.97、4.93、9.87、14.80、19.73、39.46、49.33μg/mL的溶液，进样测定，对所得色谱图进行记录。结果的线性方程为：A=16204C-30676,r=0.9999。并且发现头孢克肟浓度在1754.9-88.3ug/L范围内时存在良好线性关系。

3.2精密度实验

精密量取有关物质项下的同一份供试品溶液，以以上所述色谱条件连续6次进样测定，结果得到：单个最大杂质峰面积的RSD为1.1%(n=6)，总杂质峰面积的RSD为1.2%(n=6)，这一结果显示出该方法的重复性理想。

3.3供试品溶液的稳定性实验

精密量取有关物质项下的同一份供试品溶液，在室温条件下放置0、2、4、8、10小时后进行进样检测，结果发现，各杂质以及杂质总量未发生比较明显的变化。且最大单个杂质峰面积的RSD为1.2%(n=5)，总杂质峰面积的RSD为1.2%(n=5)，结果显示出在室温供试品溶液放置10小时之内具有良好的稳定性。

3.4准确度考察与供试品的测定

精称适量对照品，以甲醇为溶剂进行充分溶解，而后用流动相进行稀释，配制成每毫升含10ug的溶液作为对照品溶液。精称适量供试品，同样以甲醇为溶剂进行稀释，配制成每毫升含1mg的溶液作为供试品溶液，对照品溶液10ul进样，对检测灵敏度进行调节，使主成分色谱峰的峰高占满量程20%，而后分别取空白溶剂、对照品溶液、供试品溶液进行分别进样，对色谱图进行记录。以外标法通过峰面积对有关物质的含量进行计算，同时与2010年药典进行对比，结果发现，本次试验与药典测得的总杂质含量的最大偏差为0.14%，单个最大杂质的含量的最大偏差为0.05%，t检验显示测定结果不存在显著性差异（P>0.05）。

4讨论

在国内外诸多版本的药典中，均对头孢克肟的质量标准有收载，且为利用HPLC法对头孢克肟有关物质进行测定，流动相则是选用离子对试剂四丁基氢氧化氨与乙腈(75∶25)[4]。然而在实际的工作当中我们发现，采取以上离子对作为流动相时色谱柱需要长时间的平衡，一般均在2小时以上，并且头孢克肟同其反式异构体的的分离度相对较差，柱效以及峰形也不是十分的理想。曾有相关文献报道，采取磷酸盐和乙腈做为流动相对头孢克肟的含量进行测定，然而由于磷酸盐不具有挥发性，无法在LC-MS分析中对其进行直接利用[5]。在本次研究中采取易挥发的醋酸胺和乙腈为流动相，结果发现，头孢克肟同其反式异构体的分离度在7.2左右，并且该流动相体系能够在LC-MS分析中进行联用，从而更好地对头孢克肟的杂质结构进行研究提供了可靠的参考条件，最终实现更好地对产品的质量进行控制，值得关注。

参考文献

[1]张媚,金乐红,唐婷.高效液相色谱法测定头孢克肟咀嚼片的含量[J].健康研究,2011,21(01):314-415.

[2]曾荣华,卢慧娴,邓雪媚.HPLC法流动相选择及相浓度比例对头孢克肟分散片含量测定分析[J].海南医学院学报,2010,24(07):152-153.

[3]刘正芳,陈芳芳.头孢克肟及其片剂RP-HPLC流动相优化与定量分析[J].中国现代药物应用,2009,25(19):415-416.

[4]韩加怡,张昀,王新月.RP-HPLC梯度洗脱法测定泮托拉唑钠的有关物质及含量[J].中国药科大学学报,2009,15(06):425-426.

[5]张慧文,肖彦琨.RP-HPLC测定头孢克肟的含量[J].中国现代应用药学,2009,23(12):245-247.