血管紧张素原基因C521T多态性与脑梗死的关系

血管紧张素原基因C521T多态性与脑梗死的关系

孙洪英和姬苓杨国安张利荣宋瑞琦张佳

孙洪英和姬苓杨国安张利荣宋瑞琦张佳

（包头医学院第一附属医院神经内科014010）

【中图分类号】R743【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)23-0056-03

【摘要】目的本课题旨在研究血管紧张素原（AGT）基因C521T单核苷酸多态性与脑梗死的关系，从分子水平探讨脑梗死发病的机制及特点。方法采用病例-对照研究，结合聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术，检测82例脑梗死患者和89例对照者的AGT基因521位点基因型和等位基因，比较和分析病例组与对照组间该基因型及等位基因的分布频率差异。结果脑梗死组与对照组比较,AGT521TT基因型频率22.0%显著高于对照组6.7%,差异有显著性（P<0.05）；脑梗死组中AGT521T等位基因频率为28.0%，与对照组比较,显著高于对照组11.8%,差异有显著性（P<0.05）。有无高血压CI之间比较各基因型频率和各等位基因频率无显著性差异，P＞0.05。结论AGT521TT基因型和T等位基因可能为脑梗死的易患因素。在本组人群中AGTC521T碱基突变不依赖是否致高血压而与脑梗死的发病相关。

【关键词】脑梗死血管紧张素原基因多态性

脑梗死（CI）具有发病率高、死亡率高和致残率高的特点，其发病机制较为复杂，涉及多种危险因素，遗传因素在其中起了重要作用。近年来CI发病的基因基础已成为研究CI发病机制的新方向，尤其是肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensinsystem,RAS）基因多态性与CI的关系越来越得到人们的关注。本研究采用病例-对照研究的方法，结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-PRLF)技术，测定AGT基因C521T单核苷酸多态性，从分子基因水平为脑梗死易感者的筛检和识别提供依据。

1对象与方法

1.1对象（1）CI组：系2006年5月-2007年8月住院的CI患者82例,男65例，女17例；年龄57～81岁，平均（61.04±10.31）岁；病程2～60天，平均（32±13）天；高血压32例；吸烟史34例。全部病例符合第四届全国脑血管疾病会议制定的脑血管疾病诊断标准,均经CT/MRI证实。除外肝肾疾患。（2）正常对照组：系同期我院健康体检者89名，男66名，女23名；年龄55～76岁，平均（60.45±9.10）岁；对照组除外脑血管意外、冠心病、糖尿病、严重肝肾功能损害。研究个体间无血缘关系。

1.2方法

1.2.1血脂、血糖检测：CI组患者在住院次日，正常对照组在体检日清晨空腹采肘静脉血6ml，其中4ml入无菌干燥管，送生化室用全自动分析仪检测血浆总胆固醇（TC）、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、血糖(BG)浓度。

1.2.2AGT基因多态性的测定：2ml血标本入EDTA-Na2抗凝管，用常规酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA。应用PCR-RFLP技术检测AGTC521T基因多态性。AGTC521T引物参照CaulfieldM等[1]的设计，上游引物：5’-GATGCGCACAAGGTCCTG-3’;下游引物：5’-CAGGGTGCTGTCCACACTGGCTCGC-3’。PCR反应体系及条件如下：制备好的模板DNA1.8μl，加入PCR反应混合液，反应体系25μl(含引物各0.5μl，2×TaqPCRMasterMix12.5μl)，混匀后，液体石蜡封顶进行PCR反应，预变性94℃4min，变性94℃30s，退火58℃30s，延伸72℃45s，共35个循环；最后72℃延伸5min。AGTC521T基因扩增产物10μl加10U内切酶NcoI,2.5μl10×buffer，37℃水浴4h后终止酶切反应。2%琼脂糖凝胶电泳分型。

1.2.3统计学方法应用SPSS-13.0软件进行分析。AGT基因型分布及等位基因频率应用基因计数法得到并通过X2检验；按照Hardy-Weinberg平衡定律进行群体平衡验证。计量资料比较采用方差分析t检验；计数资料的比较采用X2检验；采用多因素Logistic回归方法分析AGT基因多态性对疾病的影响，并计算其95%可信区间（95%CI）。

2结果

2.2AGT基因C521T多态性基因型判断：

AGTC521T基因PCR扩增产物为303bp的DNA片段。PCR产物酶切后产生211bp和92bp条带，为TT型；酶切后产生303bp、211bp和92bp条带，为CT型；若酶切后电泳只得到303bp条带，为CC型。

2.2病例组与对照组一般临床资料的比较

经方差齐性检验，两组年龄、BMI等临床资料间方差均齐同。脑梗死组与对照组间年龄、性别及BMI无显著性差异，P＞0.05。

2.3Hardy-Weinberg平衡检验

为考察本实验资料的可靠性和代表性，对病例组和对照组两位点进行基因型Hardy-Weinberg平衡检验,均得P>0.05，显示病例组和对照组基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡，各基因频率达到遗传平衡。

2.4各组AGTC521T基因型及等位基因的分布频率

CI组TT基因型频率和T等位基因频率较对照组有升高，经卡方检验，P＜0.05；有无高血压CI之间比较各基因型频率和各等位基因频率无显著性差异，P＞0.05

3讨论

CI的发生与环境、遗传等多方面因素有关。除了高血压、糖尿病、肥胖、吸烟、血脂异常等危险因素外，随着分子遗传学研究的深入，寻找其相关致病基因，已经成为近年研究重点[2、3]。肾素-血管紧张素系统与CI的关系亦日益受到重视。

3.1病例组与对照组一般临床资料的比较

本研究CI组和正常对照组在年龄、性别和BMI上比较无显著性差异（P>0.05），提示病例组和对照组具有可比性。

3.2AGT基因多态性与CI的关联

AGT在肾素的作用下转化为血管紧张素Ⅰ，后者在ACE的作用下进一步转化为血管紧张素Ⅱ而参与血管活性的调节并发挥多种生理作用。人的AGT基因定位于常染色体1q42～43上,是一个长度约为12kb的单拷贝基因,由5个外显子和4个内含子组成。目前发现AGT基因结构上存在多个多态位点,其中第二外显子中的两种错义突变最受关注,+704位核苷酸T→C,使编码第235位的蛋氨酸(M)变为苏氨酸(T),即T704C突变。+521位核苷酸C→T,使编码第174位的苏氨酸(T)变为蛋氨酸(M),即C521T突变。近年国内外学者对AGT此两种多态性与CI的研究尚少[4-7],。刘艳等[6]研究发现AGT基因C521T多态可能与汉族整体人群CI的发病相关。但BrennerD等[7]的研究发现521T对CI有轻微保护作用，同时AGT704CC基因型可能是CI发病的独立危险因素。而SethiAA[8]等研究发现，T704C多态性在CI组与对照组中无显著差异。关于AGT基因多态性与CI之间的相关性存在相反的观点，可能是因为种族和人群的差异对基因变异的发生有影响。

本研究发现CI患者AGT基因521位点TT基因型频率及T等位基因频率均高于正常对照组(P<0.05)，提示AGT基因C521T单核苷酸多态性可能与CI的发生有关，本研究还发现有高血压脑梗死组、无高血压脑梗死组比较521TT基因型频率和521T等位基因频率无显著性差异，说明在本组人群中AGTC521T碱基突变不依赖是否致高血压而与脑梗死的发病相关。这与刘艳等的报道基本相符。

参考文献

[1]CaulfieldM,LavenderP,FarrallM,etal.linkageofangiotensinogengenetoessentialhypertension[J].NEnglJMed,1994,330:1629-1633.

[2]和姬苓,王永福,杨国安,等.血管紧张素II受体-1基因多态性与脑血管病的关系[J].临床神经病学杂志,2007,20:12.

[3]和姬苓,王永福,王颖慧,等.血管紧张素转换酶基因多态性与脑血管病的关系[J].临床神经病学杂志,2004,17:406.

[4]FrossardPM,MalloyMJ,LestringantGG,etal.Haplo-typesofthehumanreningeneassociatedwithessentialhypertensionandstroke[J].HumHypertens，2001，15:49-55.

[5]张颖冬,葛剑青,石静萍,等.血管紧张素原及其基因多态性与缺血性脑血管病的相关性研究[J].中国临床神经科学,2004,12:230.

[6]刘艳,金玮,姜正文,等.血管紧张素原基因T174M和M235T多态与脑梗塞的关系[J].上海第二医科大学学报,2004,24:351.

[7]BrennerD,LabreucheJ,PoirierO,etal.Renin-angiotensin-aldosteronesysteminbraininfarctionandvasculardeath[J].AnnNeurol.2005,58(1):131.

[8]SethiAA,Tybjaerg-HansenA,GronholdtMM,etal.Angiotensinogenmutationsandriskforischemicheartdisease,myocardialinfarction,andischemiccerebrovasculardisease[J].AnnInternMed,2001,134:941-954.

基金项目：《肾素、血管紧张素原基因多态性与脑梗死的关系研究》内蒙古自治区人事厅人才开发基金资助项目