放射处理对非小细胞肺癌白介素31表达的影响

放射处理对非小细胞肺癌白介素31表达的影响

侯春燕1刘娟2付翔杰2谭潭2

1.郴州市第一人民医院南院耳鼻喉头颈肿瘤外科；2.郴州市第一人民医院检验医学中心湖南省郴州市423000

【摘要】目的：探讨放射处理对非小细胞肺癌白介素31表达及细胞HT1299凋亡的影响，为肺癌的治疗提供科学依据。方法：应用Elisa法测定HT1299细胞经2GyX线照射前后细胞培养上清炎症因子的浓度变化，hochest33253染色法分析细胞经照射处理前后细胞凋亡的改变。结果：细胞经2GyX线照射IL31显著增多，凋亡细胞数增多。结论：放射可能损伤细胞，导致IL-31分泌增多，促进非小细胞肺癌细胞凋亡。可作为肺癌放射治疗期间体内免疫状态和预后判断的指标。

【关键词】IL31；放疗；肺癌

TheinfluenceofRadiationonthecytokine（IL31）expressionandapoptosisoflungCancercells

[Abstract]：ObjectiveToexploretheeffectofradiationontheexpressionofIL31orinducedapoptosisinthelungcancercellsHT1299

MethodsTheHT1299cellswereculturedinthenormalconditionandpidedintothecontrolgroupandradiationgroup（cellswereexploredinthe2GyXray）.thentheculturemediawerecollectedandtheexpressionofIL31weredetectedbyELISA，thecellapoptosisstainedwithhochest33258weredetectedbyfluorescencemicroscope.

ResultsTheconcentrationofIL31increasedintheradiationgroupthanthecontrolgroup.Significantapoptosiscellsoccurredintheradiationgroup.

ConclusionRadiationmightinducethecellsapoptosisandimprovethesecretionofIL31，thusincreasedinflammatoryinjury.

KEYWORDS：IL31，radiation，lungcancer

肺癌是危害人类健康的呼吸系统恶性肿瘤之一，由于癌细胞本身的失控性生长，导致局部形成低氧微环境。放射治疗是局部杀伤癌肿病灶的一种手段，促使肿瘤细胞丧失增殖能力而最终被清除。

本研究以人肺癌细胞HT1299为对象，探讨低剂量X线照射细胞后培养上清白介素的表达水平及细胞凋亡的变化情况，以期了解放疗对肺癌的影响。

1材料与方法

1．1材料人肺腺癌细胞系H1299由本室保存。RPMI1640培养基，小牛血清购于Gibco公司。

1.2细胞培养H1299细胞在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中培养，将其分为对照组及放射照射组，对照组在5%CO237℃培养箱中培养，待细胞生长至60%汇合状态时，放射照射组采用X线辐射仪进行单次2Gy照射。

1.3细胞形态学观察照射48h后，冰冷PBS洗涤各组细胞，室温下4%多聚甲醛固定10分钟，PBS洗涤，hochest33253染色剂（Promego公司，一种可激发荧光的核染色物质）染色10min，荧光显微镜观察照射前后细胞的凋亡情况。

1.4ELISA法检测细胞培养上清IL31的浓度收集细胞上清液，3000rpm/min离心l0m，ELISA法检测IL31含量，按试剂说明操作，绘制标准曲线，计算待测标本含量。

2结果

2.1细胞形态变化观察细胞经X线照射后凋亡细胞数明显增多，凋亡细胞经hochest33253染成蓝色，细胞体积缩小，胞核固缩，核碎裂，染色质分割成块，细胞呈亮珠状蓝色荧光和形成凋亡小体等典型的凋亡细胞形态改变。而对照组细胞大小一致，被透过活细胞膜的hochest33253染成蓝色，荧光均匀。（图1）

2.2ELISA结果：

收集细胞培养上清，ELISA法检测IL31的浓度，结果显示，经X线照射后，IL31的浓度从0.36ng/ml增高到1.8ng/ml.

3讨论

肺癌目前仍是死亡率最高的恶性肿瘤[1]，手术仍然是肺癌早期治疗的首选，术后采用放化疗相结合的方法进行巩固治疗，以防复发和转移。但放化疗在杀死肿瘤细胞的同时，对免疫系统的破坏也非常大。免疫失衡在肺癌的预后中发挥重要作用。有报道称多种免疫炎症因子在肺癌组织中高表达，并且与NSCLC的发生、发展以及预后密切相关[2-7]。

IL31属IL6家族成员，主要由CD4+Th2细胞产生，可参与多种细胞的生长、分化和功能调节[8]。本实验采用Elisa法检测细胞培养上清的IL31的浓度，发现放射照射实验组浓度明显增高。从形态学观察发现照射组肺癌细胞凋亡细胞数也明显增多。以上结果提示放射造成细胞损伤且促进IL31的分泌。IL31参与NSCLC放疗后的慢性炎症反应，并通过趋化作用，聚集更多的免疫细胞到达炎症部位，炎性因子聚集，从而加剧机体的炎症反应。

由于放疗对细胞的损伤作用导致细胞凋亡，加速细胞分泌炎症因子。因而，监测治疗过程中患者血清IL31有助于对肺癌预后的判断，指导临床医师评估病情及预后，从而实施更有效的治疗，提高肺癌治疗有效率。

参考文献：

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[8]ChattopadhyayS，TracyE，LiangP，RobledoO，Rose-JohnS，BaumannH：Interleukin-31andoncostatin-Mmediatedistinctsignalingreactionsandresponsepatternsinlungepithelialcells.JBiolChem2007；282：3014-3026.

作者简介：

侯春燕，女，33岁，硕士，主治医师，主要从事耳鼻喉头颈肿瘤外科。

*通讯作者：

谭潭，Email：tantan1413@126.com

基金项目：（湖南省卫生厅科研项目（B2010-127）；郴州市市科技局（2011-33）