EDTA-K2依赖性血小板假性减少结果分析及处理

EDTA-K2依赖性血小板假性减少结果分析及处理

李孟兰

李孟兰

（东南大学医学院附属南京同仁医院检验科211102）

【摘要】目的探讨EDTA-K2依赖性血小板假性减少症（EDTA-PTCP）患者血细胞分析中血小板计数结果的准确分析及处理手段。方法收集21例EDTA-PTCP患者EDTA-K2抗凝静脉血及枸橼酸盐抗凝静脉血各2ml，充分混匀后15min、30min、60min、90min、120min后，采用全自动血细胞分析仪法进行血小板数量检测，并制备血涂片进行瑞氏染色，显微镜下观察血小板形态及分布情况。结果EDTA-PTCP患者EDTA-K2抗凝静脉血血小板计数明显低于正常值，并随检测时间延长血小板数量逐渐降低，差异有统计学意义（p<0.05）；与EDTA-K2抗凝静脉血结果比较，枸橼酸盐抗凝静脉血血小板计数明显增高，差异有统计学意义（p<0.05），随检测时间延长血小板计数比较差异无统计学意义（p>0.05）。显微镜下观察显示EDTA-K2抗凝静脉血血涂片中血小板成多少不等的聚集团块，并随时间延长聚集的血小板个数明显增多；枸橼酸盐抗凝静脉血血涂片中血小板大小、形态规则，成单个、散在分布。结论针对EDTA-PTCP患者，用枸橼酸盐抗凝静脉血代替EDTA-K2抗凝静脉血用于血小板检测，可纠正由EDTA-K2作为抗凝剂引起的血小板假性减少，避免临床误诊、误治。

【关键词】EDTA-K2枸橼酸盐血小板

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）33-0091-02

血小板计数是临床最基本、最常用的检测指标之一，其检测结果准确与否直接影响患者的诊断与治疗。乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2)由于对血细胞形态影响较少，并可抑制血小板聚集，被国际血液标准委员会（ICSH）推荐为血细胞分析仪首选抗凝剂，广泛应用于临床[1]。但近年来研究发现，EDTA-K2作为抗凝剂用于血细胞分析时可引起EDTA-K2依赖性假性血小板减少症（EDTA-dependentpseudothrombocytopenia，EDTA-PTCP)，使血小板计数假性降低。EDTA-PTCP虽然本身并无病理意义，但若实验室检测时未及时发现并明确诊断，将明显增加患者后续检测项目和治疗手段，造成临床误诊、误治，加重患者的经济和心理负担。因此，及时发现EDTA-PTCP并对其进行正确处理，有着极其重要的临床意义。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年1月至2014年12月本院门诊及住院的21例EDTA-PTCP患者纳入观察组，其中男9例、女12例。该观察组中恶性肿瘤3例、糖尿病患者4例、高血压患者2例、高脂血症患者3例、肝炎患者2例、慢性肾炎患者2例，急性上呼吸道感染者3例、急性阑尾炎1例，泌尿系统感染1例，所有患者均无皮肤黏膜出血及紫癜。

1.2仪器与试剂检测仪器为SysmexXE2100全自动五分类血细胞分析仪及原装配套试剂，Olympus双目显微镜，EDTA-K2抗凝管及枸橼酸盐抗凝管，瑞氏染液。

1.3方法抽取静脉血2ml分别置于EDTA-K2抗凝管和枸橼酸盐抗凝管中，立即颠倒混匀，并于混匀后15min、30min、60min、90min、120min上机检测，另外各取10ul抗凝全血涂片，待自然干燥后进行瑞氏染色，并在显微镜下观察血小板形态及分布情况。所有检测均在实验室在控条件下严格按照试剂说明书进行操作。

1.4统计学处理采用SPSS13.0统计学软件进行数据处理和统计学分析，计量资料以表示，组间比较采用x-±s检验；以α=0.05为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两种抗凝血血小板计数结果比较

EDTA-PTCP患者EDTA-K2抗凝静脉血血小板计数明显低于参考值（100～300*109/L），并随检测时间延长血小板数量逐渐降低。与混匀后15min比较，混匀后30min、60min、90min、120min血小板检测结果明显减低，差异有统计学意义（p<0.05）；与EDTA-K2抗凝静脉血比较，枸橼酸盐抗凝静脉血血小板计数结果明显增高，差异有统计学意义（p<0.05），枸橼酸盐抗凝静脉血血小板计数随检测时间延长无明显降低，差异无统计学意义（p>0.05）。见表1。

表1两种抗凝血标本血小板计数结果比较（x-±s)

注：与EDTA-K2抗凝组比较，aP＜0.05；与EDTA-K2抗凝组15min比较，bP＜0.05。

2.2EDTA-K2抗凝血图片与枸橼酸盐抗凝血图片血小板分布情况

血涂片经瑞氏染色在油镜下观察显示，EDTA-K2抗凝静脉血血涂片中血小板成数个到数百个多少不等的聚集团块，且随时间延长团块中聚集的血小板个数明显增多，聚集团块明显增大；枸橼酸盐抗凝静脉血血涂片中血小板大小、形态规则，成单个、均匀散在分布。

3讨论

EDTA-K2抗凝原理主要是通过与血液中的钙离子结合形成螯合物，使其失去凝血作用，从而防止血液凝固。EDTA-K2作为抗凝剂对血细胞形态影响很小，抗凝效果显著，是临床全自动血细胞分析仪中最常用的抗凝剂。目前，临床常用的全自动血细胞分析仪主要采用电阻抗原理，通过对血小板体积的大小产生的脉冲数进行血小板计数，其血小板体积检测阈值为2-30FL。正常情况下，血小板体积大多集中在3-20FL范围内，当血小板体积大于30FL时，大体积的血小板可能被误判为小红细胞或白细胞，导致红细胞和白细胞计数假性增高，而血小板计数假性降低。

EDTA-PTCP是由EDTA-K2作为抗凝剂时所引起的血小板假性减少，其发生率较低，约为0.09%-0.21%[2]，在健康体检者或患者中均可能发生，可为一过性发生，也可能与糖尿病、高血压、高血脂、肝病、肾病、肿瘤和自身免疫性疾病等疾病的病情进展相关。EDTA-PTCP发生的可能机制为EDTA-K2作为抗凝剂时促进血小板上隐匿性抗原转位与释放，并与血液中的冷抗血小板自身抗体结合，促进血小板聚集。研究表明，该隐匿性抗原可能为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa，当血液中的冷抗血小板自身抗体与GPⅡb/Ⅲa结合后，冷抗血小板抗体的FC端还可与淋巴细胞或单核胞细胞膜上的FC受体结合，使血小板聚集于淋巴细胞或单核胞细胞膜外，呈现卫星现象[3，4]。而随着时间越长、温度越低，血小板聚集程度越严重，EDTA-PTCP发生率也越高[5]。此外，EDTA-PTCP患者除了抗血小板自身抗体外，大多还存在抗凝脂抗体，提示在用EDTA-K2作抗凝剂时，经EDTA-K2修饰过的血小板抗原可能通过与带带负电荷的抗凝脂抗体结合，促进血小板聚集，导致血小板假性减少[6]。

枸橼酸盐抗凝原理主要是对凝血因子V有较好的保护作用，使其活性降低减缓，从而发挥抗凝作用。本研究结果表明，对于EDTA-PTCP患者，采用EDTA-K2作为抗凝剂用于血细胞分析仪检测血小板数量时，可发生EDTA-K2依赖性血小板假性减少；而采用枸橼酸盐作为抗凝剂时，则可避免该现象的发生。因此，在临床工作中，当血细胞分析仪检测结果出现血小板计数显著减少，并提示有血小板聚集，而患者并无皮肤、黏膜出血点或紫癜等出血倾向，并排除采血不畅等外在因素造成的血小板计数减低的情况下，应考虑为EDTA依赖性血小板假性减少，应及时采用枸橼酸盐抗凝静脉血标本或手工计数法等方法重新检测，并涂片进行瑞氏染色后在显微镜下进行验证，以避免临床误诊、误治。

参考文献

[1]李荣辉，高莉莉，姜蕾，等.3例EDTA依赖性假性血小板减少结果分析[J].检验医学与临床，2012，9(14):1811-1812.

[2]文兴东.EDTA-K2抗凝剂引起血小板减少的结果探讨[J].当代医学，2012，18(10):51-52.

[3]刘爱华.EDTA-K2抗凝剂依赖性血小板减少的分析与解决方案[J].国际检验医学杂志，2014，35(23):3277-3279.

[4]梁培松，王结珍，杨山虹，等.纠正EDTA-K2抗凝剂致假性血小板减少方法的探讨[J].国际检验医学杂志，2013，34(18):2448-2449.

[5]刘君，刘紫云.10例EDTA-K2抗凝致假性血小板减少分析[J].宁夏医科大学学报，2011，33(12):1212-1214.

[6]张玉莉.假性血小板减少症研究进展[J]，检验医学与临床，2009，20(1):58-59.