抗-HIV酶联免检测的HOOK效应及对策

抗-HIV酶联免检测的HOOK效应及对策

吕志军

吕志军

（江苏省张家港市红十字血站215600）

【摘要】目的总结抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应及对策,寻找能够防止抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应的最佳检测方案。方法本次研究资料选取2014年4月-2014年9月期间在本血站主动献血的5名A型血志愿者，均是首次献血。以双抗原夹心ELISA一步法、双抗原夹心ELISA二步法对其抗-HIV的阳性高值血液标本、倍比稀释以后的血液标本进行检查，同时对比其检测结果。结果本次研究发现，较之双抗原夹心ELISA二步法来说，双抗原夹心ELISA一步法在HOOK效应方面相对明显，比较差异较为显著（P＜0.05）。结论为了控制抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应，建议采取双抗原夹心ELISA二步法，以防HOOK效应出现后使强阳性的标本出现漏检等情况。

【关键词】抗-HIV酶联免疫检测HOOK效应对策

【中图分类号】R512.91【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）28-0388-02

为了总结抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应及对策,笔者把2014年4月-2014年10月期间在本血站主动献血的5名A型血志愿者视作研究对象，分别以双抗原夹心ELISA一步法、双抗原夹心ELISA二步法对其抗-HIV的阳性高值血液标本、倍比稀释以后的血液标本进行检查，旨在寻找能够控制抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应的最佳检测方案，为临床研究提供一点参考价值，现将具体研究程序作详细报

道。

1.临床资料和方法

1.1临床资料

选取2014年4月-2014年9月期间在本血站主动献血的5名A型血志愿者，年纪在25-36岁之间，平均年纪约（30±3.13）岁，所有献血志愿者均是首次献血。

1.2方法

所有研究对象均以双抗原夹心ELISA一步法、双抗原夹心ELISA二步法对其抗-HIV的阳性标本高值、倍比稀释以后的血液标本进行检查。（1）本院初检试剂购于上海某生物公司，以双抗原夹心ELISA二步法为主要方案，其批号是20050420。（2）本院复检试剂购于某个进口的生物公司，以双抗原夹心ELISA一步法为主要方案，其批号是A45HA。（3）本院所用STAR全自动化液体样本处理系统以及FAME24/20全自动酶免分析系统均由瑞士哈美顿博纳图斯股份公司所提供；本院所用全波长扫描多功能酶标仪由奥地利安图斯公司所提供；MK2医用洗板机由芬兰雷勃公司所提供。（4）在检测操作实践过程中，以生理盐水对抗-HIV的高值标本进行倍比稀释，再以双抗原夹心ELISA一步法、双抗原夹心ELISA二步法对其阳性高值血液标本、倍比稀释以后的血液标本进行检查，所有操作步骤按照说明书严格执行。

1.3统计学处理

通过SPSS19.0统计学软件分析以及处理本组研究数据，通过(x-±s)代表一般资料，通过卡方检验组间计数资料的对比，计量资料比较采用t检验,组间数据对比差异明显，具备统计学意义以P＜0.05表示。

2.结果

本次研究发现，当稀释倍数为原倍时，一步法的光密度值是0.060，结果是（-），而二步法的光密度值是2.735，结果是（+）；当稀释倍数为1/4时，一步法的光密度值是0.251，结果是（+），而二步法的光密度值是2.453，结果是（+）；当稀释倍数为1/16时，一步法的光密度值是0.928，结果是（+），而二步法的光密度值是1.476，结果是（+）；当稀释倍数为1/64时，一步法的光密度值是1.250，结果是（+），而二步法的光密度值是1.050，结果是（+）；当稀释倍数为1/256时，一步法的光密度值是0.210，结果是（+），而二步法的光密度值是0.298，结果是（+）；当稀释倍数为1/1024时，一步法的光密度值是0.045，结果是（-），而二步法的光密度值是0.090，结果是（-）。可见，较之双抗原夹心ELISA二步法来说，双抗原夹心ELISA一步法在HOOK效应方面相对明显，比较差异较为显著（P＜0.05）。

3.讨论

酶联免疫检测除了具有较高敏感性以及特异性之外，同时还存在着安全性高、环保性强以及操作便捷、操作简单等优势，因此已经成为血站对献血志愿者各项传染指标进行检测的重要手段[1]。近年来，在给予抗-HIV检测时，常用试剂是第三代的ELISA试剂，而检测方案则是双抗原夹心方案。根据实验步骤的不同，又可以将其划分成两种，分别是双抗原夹心ELISA一步法以及双抗原夹心ELISA二步法[2]。较之双抗原夹心ELISA二步法来说，双抗原夹心ELISA一步法缺少孵育过程以及一个洗板，因此操作较为便捷和简单，已得到普遍使用。然而，就实际操作程序来说，双抗原夹心ELISA一步法极易诱发HOOK效应，以至于假低值、假阴性等情况的发生[3]。

基于双抗原夹心ELISA一步法的反应体系而言，同时将HIV酶标抗原和待检标本加入至微孔之后，通常会出现四种产物。在血液标本内待测抗体的浓度相对偏高时，受竞争抑制等作用的直接影响，待测抗体的酶标抗原会明显增多，固相抗原、待测抗体、酶标抗原却会明显降低，所以其反应显色会逐渐减弱，剂量的反应曲线也呈现出钟形曲线[3]。如果待测抗体的浓度被控制在某固定范围之内时，可发现反应曲线和浓度之间呈现出正比例的关系，而如果浓度已经超出线性范围之后，反应曲线通常不会呈现出平台状，也不会无限延伸，即出现HOOK效应，以至于强阳性的标本呈现出弱阳性或者是阴性[4]。

双抗原夹心ELISA二步法则需要把标本加入至微孔中进行孵育，当期成为待测抗体及固相抗原的结合物之后，再予以洗板。当加入一定HIV酶标抗原之后，会变为酶标抗原、固相抗原及待测抗体的结合物，且酶催化的底物的显色。如果标本内抗-HIV的浓度偏高，通常不会出现HOOK效应[4]。鉴于此，为了控制抗-HIV酶联免疫检测的HOOK效应，建议血站采取双抗原夹心ELISA二步法，以防HOOK效应出现后使强阳性的标本出现漏检等情况，从而有效提升检测质量。

参考文献

[1]何国坚,黄震,张韶斌,陈斯亮.HIV-1/2/O抗体联合诊断试剂盒的制备及其检测效果的研究[J].国际检验医学杂志,2011,32(05):562-564.

[2]蔡丽娜,朱绍汶,周春,王跃帮,蒋昵真,陈慧,汤心怡,王金花,陈显.2010-2013年中国南京地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV感染情况分析[J].中国实验血液学杂志,2014,22(04):1089-1093.

[3]钟敏,孙丽萍,张淑萍,荆明,王滨有,周晋,王福祥.结核感染T细胞斑点试验诊断HIV/AIDS患者潜伏感染结核分枝杆菌的实验研究[J].哈尔滨医科大学学报,2013,47(04):329-332.

[4]黄秀琳,李维,程颖,尹丹,刘东,杨虎,秦伟斐,韩继姝.HIV酶免试剂在献血标本中检测效果评价[J].国际检验医学杂志,2013,34(10):1297-1298.