LBP-Ⅲ对脂肪肝的代谢以及防治作用的研究

LBP-Ⅲ对脂肪肝的代谢以及防治作用的研究

李幸旻

李幸旻（广州市萝岗区红十字会医院检验科510363）

【摘要】目的研究枸杞多糖组分-Ⅲ（LBP-Ⅲ）对大鼠脂肪肝的防治作用。方法采用高脂饮食喂养方式建立大鼠脂肪肝模型，以血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）含量、肝脏病理改变为评价指标，观察LBP-Ⅲ的保护作用。结果与大鼠脂肪肝模型组相比，LBP-Ⅲ可显著降低大鼠血清TC和TG含量（P<0.01），升高HDL-C含量（P<0.05），降低大鼠血清MDA、ALT和AST含量（P<0.05），并明显改善脂肪肝大鼠的肝脏病理改变，减轻肝脏的脂肪变性。结论LBP-Ⅲ明显具有调节血脂，保护肝功能，防治大鼠脂肪肝的作用。

【关键词】脂肪肝高脂血症LBP-Ⅲ

【中图分类号】R589【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）22-0124-03

脂肪肝是由肝内脂肪氧化减弱，脂肪酸合成增多，肝细胞内脂肪堆积所致的一种综合代谢性疾病[1]。近年来，随着人们生活水平的提高以及饮食结构的改变，脂肪肝的发病率有明显增高的趋势。临床上常用的降血脂药物的作用是通过促进血液中脂质运输至肝脏进行代谢、排泄，若长期服用会导致肝脂质代谢障碍，增加肝脏脂肪沉积[2]。因此，研究并开发既具有降血脂功能又不妨碍肝脏脂质代谢的药物具有重要意义。枸杞（LyciumBarbarum）是我国传统中药材，《本草纲目》中记载枸杞具有“补精气诸不足，明目安神，令人长寿”的功效。现在药理学研究证明，枸杞具有抗氧化、抗衰老、降血脂、降血糖、增强记忆、提高反应能力等作用[3-5]。枸杞经DEAE-纤维素柱分离纯化，检测到4种多糖组分（LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LPB-Ⅲ、LBP-Ⅳ），经过SephadexG-100凝胶色谱柱层析和液相色谱鉴定这4种多糖分子量接近，但组成上存在着微观不均一性。经红外光谱推测LBP可能含-OH、-COOH、-NH2-或-NH-基团。通过理化性质分析，证明LBP中不含蛋白质、淀粉及酸性多糖。王建华[6]研究表明，枸杞的4种多糖组分具有抗氧化作用，而LPB-Ⅲ（LyciumBarbarumPolysaccharidesComponent–Ⅲ）的抗氧化作用最为明显。本实验试图利用LPB-Ⅲ作为保护药物有效干预脂肪肝，现将结果报道如下。

1材料

1.1实验动物

清洁级SD大鼠40只，雄性，体质量（180±10）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物合格证号：SCXK（湘）2006-0015。大鼠用基础饲料、大鼠用髙脂饲料，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.2实验药物及试剂

LPB-Ⅲ（实验室自备）。复方蛋氨酸胆碱片（中国通化东宝药业股份有限公司，批号：100109）。ALT试剂盒、AST试剂盒、TC试剂盒、TG试剂盒、HDL-C试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒。

1.3实验仪器

LDZ-5低温高速离心机（北京医用离心机厂）；DR-HW-1恒温水浴（北京西城区医疗器械厂）；UV-7504PC分光光度计（上海新茂仪器有限公司）；尼康ASE-4422显微镜（日本尼康公司）；电镜图像由力康生物有限公司代做。

2实验方法

2.1实验动物分组

大鼠在实验室适应饲养1周，在活动、进食、粪便均无异常，40只大鼠按随机数字表随机分为5组：①空白对照组；②脂肪肝模型对照组；③复方蛋氨酸胆碱组（0.5g/kg）；④LPB-Ⅲ低剂量组（0.1g/kg）；⑤LPB-Ⅲ高剂量组（0.2g/kg）。

2.2脂肪肝模型制备

根据预实验结果并参考文献[7]建立高脂饮食性脂肪肝模型，高脂饲料由81.5%基础饲料、12%猪油、3%蛋黄粉、2%胆固醇、1.5%胆酸钠组成。除空白对照组基础饲料喂养外，其余4组均采用高脂饲料连续喂养10周造模。

2.3给药方法

自造模第1天起，各实验组按照给药质量比灌胃（空白对照组给生理盐水，灌胃容积20ml/kg）。每日上午灌胃1次，连续10周。

2.4标本采集与制备

各组大鼠在末次给药后，于当晚称体质量后禁食12h，并于次日上午眶静脉取血分离血清，将所有大鼠处死，称重。取部分肝右叶，以10%甲醛固定后，制备切片。

2.5检测项目

2.5.1一般情况观察

实验前测量大鼠体质量，实验中观察比较各组大鼠精神、运动、饮食、排便、皮毛等情况，实验结束后称取体质量、肝重，计算肝指数。肝指数=肝湿重/末体质量×100%。

2.5.2血清TC、TG、HDL-C、ALT、AST、SOD和MDA的测定：按试剂盒说明书操作。

2.5.3肝组织病理学检测：光镜下，观察肝脏组织形态、肝小叶结构、脂肪变程度、肝细胞变性和坏死、炎症细胞浸润以及纤维增生等情况；电镜下，观察大鼠肝细胞胞核是否有异染色质，线粒体是否正常，内质网是否扩张。

2.6统计学处理

各组实验数据以x-±s表示，采用SPSS15.0软件包统计，计量资料采用单因素方差分析，计数资料采用非参数的秩和检验。

3结果

3.1一般情况观察

脂肪肝模型组大鼠皮毛无光泽，活动减少，其余组无明显不良反应。空白对照组、脂肪肝模型组与各治疗组大鼠平均体质量均随喂养时间延长而增大，但各组间差异无统计学意义。脂肪肝模型组大鼠肝指数显著高于空白对照组（P<0.01），各治疗组大鼠肝指数均显著低于模型组（P<0.01）。（结果见表1）

3.2血脂测定

脂肪肝模型组血清TG和TC值显著高于空白对照组（P<0.01），HDL-C显著低于空白对照组（P<0.01）；与脂肪肝模型组比较，LPB-Ⅲ低、高剂量组大鼠血清TG、TC含量明显降低（P<0.01），HDL-C含量显著升高（P<0.01）。（结果见表2）

3.3血清ALT和AST测定

脂肪肝模型组大鼠血清ALT、AST值显著高于空白对照组（P<0.01）；各治疗组血清ALT、AST值均低于脂肪肝模型组（P<0.01）。（结果见表3）

3.4血清SOD和MDA测定

脂肪肝模型组血清SOD值显著低于空白对照组（P<0.01），MDA值显著高于空白对照组（P<0.01）；各治疗组大鼠血清SOD值高于脂肪肝模型组（P<0.01），MDA值显著低于空白对照组（P<0.01）。（结果见表4）

3.5肝脏形态学的改变

光镜下，空白对照组大鼠肝小叶结构完整，肝窦明显、肝索排列整齐、肝细胞未见明显变性；脂肪肝模型组肝细胞广泛脂肪变性，细胞体积增大，肝窦不明显，中央静脉血管扩张充血；各治疗组肝小叶结构完整，肝脂肪变性比模型组明显减轻。（结果见图1）

电镜下，空白对照组肝细胞核膜平滑、完整，细胞器正常；模型组肝细胞核膜褶皱，有明显的深染颗粒，滑面内质网扩张；复方蛋氨酸胆碱组、LBP-Ⅲ低、高剂量组肝细胞核膜平滑、完整，尤其是LBP-Ⅲ高剂量组胞质中出现大量内质网，说明LBP-Ⅲ有明显的促进肝细胞嗜脂肪作用。（结果见图2）

4讨论

肝脏在全身脂质代谢中起着十分重要的作用，肝细胞通过转运和代谢，调节体内和肝细胞内脂质的代谢。由于各种原因引起的肝脏脂肪代谢紊乱，脂类物质动态平衡失调，肝细胞摄取脂肪增加而脂肪氧化减少，均可导致肝细胞内脂肪蓄积形成脂肪肝。脂肪肝的确切发病机理尚未明确，通常认为是乙醇或胰岛素抵导致脂质过氧化反应增强和肝细胞内脂肪合成增加所致[8]。

机体脂类代谢失调是诱发脂肪肝的重要因素，脂肪肝患者往往血清TC和TG明显升高，HDL-C明显下降[9]。因此，TC、TG和HDL-C的测定可作为检测脂肪肝的有效指标。本实验证实了LBP-Ⅲ具有很好的治疗脂肪肝的作用，为脂肪肝的新药研制提供客观的实验依据。

当肝脏细胞受损时，ALT和AST溢出导致血清ALT和AST含量升高，所以通过测量血清ALT和AST活性可反映肝细胞损害的程度及肝细胞的修复情况[10]。在本实验中，LBP-Ⅲ显著降低大鼠血清ALT和AST含量提示药物具有抗肝细胞损伤、促进肝功能恢复的作用。脂肪肝的形成及其后续发展的整个过程与脂质过氧化损伤有着密切的关系[11]。SOD是机体内重要的抗氧化剂，MDA是脂质过氧化反应的代谢产物，因此可通过测定SOD和MDA含量来反映机体抗氧化和保护肝细胞的作用。本实验结果表明，脂肪肝模型组血清SOD值显著低于空白对照组，MDA值显著高于空白对照组，说明模型组动物发生肝脂肪变性时，自由基产生增加，整体抗氧化能力下降。提示药物有一定降低体内自由基活性，增强机体抗氧化能力，减少脂质过氧化反应终产物产生的作用。

参考文献

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[3]LinCL,WangCC,ChangSC,InbarajBS,ChenBH.AntioxidativeactivityofpolysaccharidefractionsisolatedfromLyciumbarbarumLinnaeus[J].IntJBiolMacromol,2009,45(2):146-151.

[4]LuoQ,LiZ,YanJ,ZhuF,XuRJ,CaiYZ.Lyciumbarbarumpolysaccharidesinduceapoptosisinhumanprostatecancercellsandinhibitsprostatecancergrowthinaxenograftmousemodelofhumanprostatecancer[J].JMedFood,2009,12(4):695-703.

[5]AmagaseH,SunB,NanceDM.ImmunomodulatoryeffectsofastandardizedLyciumbarbarumfruitjuiceinchineseolderhealthyhumansubjects[J].JMedFood,2009,12(5):1159-1165.

[6]王建华,张民,张声华.枸杞多糖组分3对羟自由基所致损伤的作用[J].营养学报,2001,23(1):279-281.

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[9]LiQY,YuRM,ZhaoJP.Thecombinedeffectsofseleniumzincandradixpuerariae,fructuscrataegiandsemencassiaeonbloodlipidandfattyliverinrats[J].JPrevMedChinPLA,1997,15(6):411-414.

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[11]ZhangGL,PangDW,WuG.Effectofmongoliaonsuperoxidationofthelipidinhyperlipidemicrats[J].ChinJModApplPharm,2006,23(8):738-740.

表1各组大鼠体质量和肝指数的变化（n=8,x-±s）

组别剂量

(g/kg)初体质量

（g）末体质量

（g）肝指数

（%）

空白对照组-178.8±6.8395.8±13.43.35±0.25

脂肪肝模型组-183.4±7.1384.5±11.94.51±0.32*

复方蛋氨酸胆碱组0.5179.5±7.6382.4±15.13.63±0.51#

LBP-Ⅲ低剂量组0.1168.5±6.2391.2±14.43.52±0.33#

LBP-Ⅲ高剂量组0.2173.4±6.1387.6±15.83.57±0.49#

注：与空白对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01

表2各组大鼠血清TG、TC、HDL-C含量（n=8,x-±s）

组别剂量

(g/kg)TG

（mmol/L）TC

（mmol/L）HDL-C（mmol/L）

空白对照组-0.73±0.091.88±0.210.95±0.08

脂肪肝模型组-1.08±0.13*6.26±1.55*0.74±0.11*

复方蛋氨酸胆碱组0.50.93±0.08#2.25±0.45#0.85±0.12#

LBP-Ⅲ低剂量组0.10.89±0.26#2.24±0.53#0.84±0.14#

LBP-Ⅲ高剂量组0.20.76±0.55#2.16±0.35#0.87±0.08#

注：与空白对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01

表3各组大鼠血清ALT和AST含量（n=8,x-±s）

组别剂量(g/kg)ALT（U）AST（U）

空白对照组-38.76±10.7683.54±18.57

脂肪肝模型组-55.65±14.42*124.47±23.52*

复方蛋氨酸胆碱组0.542.54±12.42#101.24±38.54#

LBP-Ⅲ低剂量组0.142.65±13.58#98.87±12.36#

LBP-Ⅲ高剂量组0.243.54±15.55#97.87±15.77#

注：与空白对照组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01

表4各组大鼠血清SOD和MDA的含量（n=8,x-±s）

组别剂量(g/kg)SOD（U/mL）MDA（nmol/L）

空白对照组-141.23±8.878.01±0.48

脂肪肝模型组-130.12±4.54*9.98±0.79*

复方蛋氨酸胆碱组0.5139.01±9.77#8.15±0.57#

LBP-Ⅲ低剂量组0.1138.07±5.67#8.21±0.67#

LBP-Ⅲ高剂量组0.2138.76±5.69#8.23±0.75#

图1光镜下肝脏形态学变化（1000×）

A：空白对照组；B：脂肪肝模型组；C：复方蛋氨酸胆碱组；D：LBP-Ⅲ低剂量组；E：LBP-Ⅲ高剂量组

图2电镜下肝细胞形态学变化（8000×）

A：空白对照组；B：脂肪肝模型组；C：复方蛋氨酸胆碱组；D：LBP-Ⅲ低剂量组；E：LBP-Ⅲ高剂量组