乙肝病毒前S1蛋白与HBVDNA定量检测的关系

乙肝病毒前S1蛋白与HBVDNA定量检测的关系

周立臣

周立臣（黑龙江省泰来县人民医院162400）

【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)35-0200-02

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种世界性疾病，我国是乙型肝炎的高流行区。前S1和前S2蛋白可以作为表达病毒复制的新标志，并提示两者可能均参与到病毒对肝细胞的附着过程。前S1蛋白位于病毒颗粒表面，在病毒感染、复制、刺激机体产生免疫反应方面以及对乙型肝炎患者的诊断、治疗和预后均有重要参考意义。为进一步探讨前S1蛋白与乙肝血清标志物(HBV-M)、HBVDNA的关系，对收集的急、慢性乙肝患者的血清进行了研究，报告如下：

1．材料与方法

1．1标本

急、慢性乙肝病人149例，均为2008年4月～2009年11月来我院就诊的门诊患者及住院患者，所有患者符合全国病毒性肝炎学术会修订的诊断标准。其中男性88例，女性61例，年龄19～82岁，平均年龄为44岁。HBsAg阴性标本40例选自健康体检人员。收集血清标本，-20℃保存，待检。

1．2试剂和仪器

1．2．1试剂

HBV-M检测试剂盒购于上海实业科华生物技术有限公司，Pre-S1检测试剂盒购于中国科学院上海阿尔法生物技术有限公司，HBVDNA检测试剂盒购于深圳市匹基生物工程股分有限公司。

1．2．2仪器

HBVDNA定量

Roche公司产生的Lightcycler荧光定量PCR仪。酶标分析仪：奥地利生产的anthos2010酶标分析仪。

1．3方法

1．3．1HBV-M、前S1蛋白检测均采用ELISA法，严格按照试剂说明书操作结果由酶标仪判读。HBVDNA检测采用荧光定量PCR法，严格按照仪器及试剂说明书操作。

1．3．2统计学处理采用四格表卡方检验，P<0．05为差异具有统计学意义。

2．结果

2.1健康对照组

对HBsAg阴性的健康对照组的40例血清进行前S1蛋白和HBVDNA的检测，检测结果显示前S1蛋白均为阴性，HBVDNA定量均低于检测限。

2.2113例乙型肝炎病毒感染者检测HBV-M及前S1蛋白

检测结果见表1。可见HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清中前S1蛋白的阳性率明显高于HB-sAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清中前S1蛋白的阳性率(X2=4．37，P<0．05)

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2.3前S1蛋白与HBV-DNA含量的关系

111例乙肝患者血清标本随着HBVDNA拷贝数的增加，前S1抗原的检出率明显增加。结果见表2。DNA高拷贝组(106～107)前S1蛋白的阳性率明显高于低拷贝组(5．0×102～103)(X2=4．234，P<0．05)。

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2.4前S1蛋白的临床动态变化

对8例抗病毒治疗的乙肝患者每四周进行一次HBVDNA拷贝数和前S1蛋白的检测。可见，随着治疗的进行，HBVDNA拷贝数在逐渐降低，前S1蛋白的含量也随之逐渐下降，当HBVDNA拷贝数<5．0×102时，前S1蛋白也转为阴性。结果见图1。

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3．讨论

前S1蛋白是由108或119个氨基酸组成的肽段。N末端游离，C末端与前S2蛋白N末端连接。研究结果表明前S1肽在T、B细胞水平上有免疫原性。完整的Dane颗粒核心部分含有环状DNA、DNA聚合酶、HBeAg和HBcAg，是病毒复制的主体。HBVDNA位于HBV的核心部位，与HBeAg几乎同时出现在血液中，成为游离型HBVDNA，临床上常作为HBV感染最直接、特异和灵敏的指标。前S1蛋白的21-47片段氨基酸是病毒附着于肝细胞上最重要的介导部位，变异的病毒只要这一区段完好就有传染性。它参与HBV的组装、分泌和侵入肝细胞的机理，而机体对前S1蛋白的免疫应答可为清除肝细胞内HBV以及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用。

由表1可见，HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组中前S1蛋白的阳性率达83．3％，且为阳性率最高组，与HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组存在显著性差异(P<0．05)，与HBsAg+、HBcAb+组不存在显著性差异(P>0．05)。从本实验结果可以看出，在HBeAg阴性的HBsAg+、HBeAb+、抗HBc+组和HBsAg+、HBcAb+组，前S1蛋白的阳性率仍然很高，分别为62．5％和72．7％。以往认为，HBeAg+转化为HBe-Ab+已是乙肝；恢复期，并具有了免疫力，预示HBV复制终止，病变缓解。但最近的研究表明，一些乙肝患者服某些药物后，HBV为逃避消除，发生了变异。其前C末段发生点突变。导致HBeAg检测阴性，一旦停药，HBeAg检测又出现阳性现象，给临床带采误导。而前S1蛋白可避免因HBV病毒变异而带来的误导。因此检测Pre-s1蛋白可以较HBeAg更确切地反映HBV在体内的复制。及感染情况。

HBVDNA定量检测是从基因水平上准确灵敏地反映HBV感染、传染和治疗恢复情况，尤其是突变株的检测。是HBV感染的直接依据。治疗前进行病毒定量检测，可以指导选择抗病毒药物，避免盲目用药。文献证明，仅以乙肝五项指标结果判断HBVDNA感染传染性以及在体内复制有一定局限性。由表2可见，随着HBVDNA拷贝数的增加，前S1抗原的检出率明显增加。高拷贝组(106—107组、108组)与低拷贝组(5．0×102-103)相比较，具有显著性差异(P<0．05)从本实验结果可以看，前S1蛋白可以灵敏地反映出HBVDNA的复制情况。有关文献已证实，前S1蛋白和HBVDNA的阳性检出率呈直线正相关，两者的关系极为密切。由图1可见，由抗病毒治疗的8例乙型肝炎患者进行的动态监测可以得出，前S1蛋白的吸光度值随HBVDNA拷贝数的降低而下降。

因此，前S1蛋白和HBVDNA的联合检测对HBV早期诊断，了解HBV复制、转归，以及监测疗效和预后有重要意义。并且前S1蛋白的监测采用ELISA法，方法直接、操作简单、价格低廉、更适宜作为HBV-M的补充项目，宜于在临床上推广和应用。

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