HPLC法测定头孢替唑的有关物质及含量

HPLC法测定头孢替唑的有关物质及含量

李启彬赵正威

李启彬赵正威（河南省驻马店市食品药品检验所河南驻马店463000）

【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）31-0232-02

【摘要】目的建立测定头孢替唑有关物质及含量的HPLC方法。方法使用,AgilentTC-C18柱（4.6MM×200MM，5µM），流动相为柠檬酸溶液-乙腈85:15,流速1.0Ml/MiM,检测波长254nM。结果头孢替唑在100.00～1000µg/Ml浓度范围内有良好的线性关系，r=0.9999，最低检出限为0.04µg/Ml，最低定量限位12µg/Ml。结论本液相色谱法具有简便、可靠、准确、灵敏度高的特点，可以用于头孢替唑的有关物质及含量的测定。

【关键词】高效液相色谱法头孢替唑有关物质含量

头孢替唑是由日本藤泽公司开发的第一代注射用头孢菌素，为半合成头孢菌素衍生物，其机制是通过抑制细菌细胞壁的合成而发挥抗菌杀菌的活性，对革兰阳性菌和革兰阴性菌均有效，且对格兰阳性菌效果较好，用于治疗肺炎、支气管扩张症、支气管炎、肺脓肿等慢性呼吸系统疾病的继发性感染，败血症、腹膜炎、肾盂肾炎、膀胱炎、尿道炎等，具有低毒、广谱的特点。《中国药典》2005年版二部收载了头孢替唑的有关物质及含量测定方法。本试验参考药典及有关文献，并重新建立了HPLC法测定头孢替唑的有关物质和含量，具体方法如下：

1仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪配有四元输液泵，自动进样器，DAD二极管阵列检测器，Agilent1100色谱工作站。Bp211D十万分之一电子分析天平（德国,Sartorius）;KQ-300DE型超声仪,艾科浦AHL-2001-P痕量型分析型超纯水机（重庆颐洋企业发展有限公司）。头孢替唑对照品(中国药品生物制品检定所；批号：130510-200706)；乙腈（德国默克，HPLC级）；柠檬酸为国产分析纯。

2方法及结果

2.1色谱条件

色谱柱：AgilentTC-C18柱（4.6MM×200MM，5µM）,保护柱：GeMiniC18(4×3.0MM,PhenMenex,USA),流动相为柠檬酸溶液(柠檬酸调节PH=2.40)：乙腈(85：15)，流速为lML／Min，柱温40℃，检测波长254nM，进样体积为20µL。

2.2系统适用性

取1Mg/Ml的对照品溶液进样，理论板数按头孢替唑峰计算不低于2000；对称因子为1.03,图见1。

图1头孢替唑HPLC色谱图

2.3专属性考察

2.3.1与中间体的分离

分别取适量合成工艺中的反应物、中间体及头孢替唑对照品，用流动相溶解，进样。结果主峰与合成工艺的反应物、中间体完全分离。

2.3.2辅料干扰试验

按处方量配制与供试品溶液浓度相同的辅料空白溶液，过滤，取续滤液进样测定，结果辅料中无干扰主峰的峰。

2.3.3峰纯度检查

用二极管阵列检测器检测，结果主峰纯度小于阈值角度，证明头孢替唑峰光谱均匀，为纯峰。

2.3.4破坏性试验

取头孢替唑样品3份，分别加入5Ml的0.1Mol/L盐酸溶液、0.1Mol/L氢氧化钠溶液、30％的过氧化氢溶液，室温放置30Min，分别加水溶解得1Mg/Ml的头孢替唑溶液，作为酸、碱、氧化破坏的供试品溶液。取头孢替唑样品2份，分别于45001x强光下照射24h、110℃加热8h，加水溶解得含1Mg/Ml的头孢替唑溶液，作为光照、高温的供试品溶液。上述供试品溶液按“2.1色谱条件”，进样测定。结果表明头孢替唑钠在高温下相对稳定，在酸、碱、氧化、光照条件下不稳定。

2.4线性关系

精密称取适量的头孢替唑对照品，加水制成1Mg/Ml的溶液，精密量取该溶液12468Ml至10Ml容量瓶中，分别加水稀释至浓度为0.10.20.40.60.81.0Mg/ML系列溶液，按色谱条件进样20µL测定，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归得回归方程A=87997C+778，r=0.9999，表明头孢替唑在0.1～1.0Mg/ML范围内与峰面积线性关系良好。

2.5精密度试验

取0.4Mg/Ml的头孢替唑对照品溶液，按“2.1色谱条件”连续进样6次，测定峰面积，RSD%=0.5(n=6)。

2.6最低检出限和定量限

取头孢替唑对照品适量，加水溶解，逐步稀释后进样，样品浓度在0.04µg/Ml时其峰高约为噪音的3倍，12µg/Ml时信噪比≥10，故最小检出限为0.04µg/Ml，最低定量限为12µg/Ml。

2.7稳定性

取0.4Mg/Ml的头孢替唑对照品溶液，室温放置，分别于02468h，按“2.1色谱条件”，进样测定，主峰面积RSD%=0.3，表明对照品溶液在8h内稳定。

2.8回收率

精密称取头孢替唑样品，分别加水配制浓度为0.40.61.0Mg/Ml的头孢替唑供试品溶液各三份，摇匀过滤，按“2.1色谱条件”，进样测定。结果回收率为99.9%，RSD=0.4，n=9,表明回收率良好。

3有关物质及含量测定

3.1有关物质

精密称取供试品10Mg于10Ml容量瓶中，加水稀释并定容至10Ml，得浓度为1.0Mg/Ml的供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0Ml，置100Ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(10µg/Ml)。取对照品溶液20µl注入液相色谱仪，调节仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20～25％；精密吸取供试品溶液与对照品溶液按“2.1”项下色谱条件，进样20µl测定，记录色谱图至主成分峰保留时间的2.5倍，结果见表1。

3.2含量测定

取本品适量，加水溶解并稀释制成每1Ml中含头孢替唑0.2Mg的溶液作为供试品溶液；另取头孢替唑对照品适量，加水制成每1Ml中含0.2Mg的溶液，作为对照品溶液。分别取上述两溶液各20µL，按“2.1色谱条件”进样测定，结果见表l。

表1头孢替唑有关物质及含量测定

批号最大单一杂质%总杂质%含量

10901140.30.999.2

10904140.21.0100.5

10907140.31.099.7

4讨论

4.1检测波长的选择

通过对中间体、辅料、主成分及破坏性试验中产生的杂质全部进行紫外全波长扫描，结果显示271nM为主成分的最大吸收波长，但254nM处各杂质却有不同程度的峰值吸收，经综合考虑比较，为保证有关物质的最大检出量而选择254nM为最终的检测波长。

4.2流动相的选择

主成分峰的对称性随着流动相pH的降低而改善，拖尾现象得以显著改善，结合主峰纯度和色谱柱的耐受性，最终确定以水(以枸橼酸调节水的pH为2.40)：乙腈(15：85，v:v)为流动相，主峰不但峰纯度高，而且峰形良好，最重要的是节约了进样所需要的时间。

4.3新方法的优点

与2010年版《中国药典》方法相比，改进后的方法具有进样时间短，主成分与杂质、降解产物等杂质之间的分离度良好，杂质检出量度提高的优点，且使用DAD检测器三维光谱图可以显示主成分峰光谱纯度满足要求。总之，新的检测方法具有灵敏度高、专属性强、分离度好等优点，该方法为测定头孢替唑有关物质和含量检查的灵敏、方便、可靠、精确的方法。

参考文献

[1]杜旭,曹晓云,袁雯玮等.HPLC法测定头孢替唑含量和有关物质[J].中国抗生素杂志,2011,36(3):217-219.

[2]张旗,赵进.HPLC法测定注射用头孢替唑钠的含量及其有关物质[J].中国药师,2009,12(4):433-435.

[3]叶琳,廖日房,吴庆欢等.HPLC法测定注射用头孢替唑钠的含量[J].亚太传统医药,2009,5(9):54-55.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].(2010版二部)，北京：化学工业出版社，2010,157