改良白膜法手工制备浓缩血小板

改良白膜法手工制备浓缩血小板

田桂敏张松英杨颜菁张杰嫦

田桂敏张松英杨颜菁张杰嫦（广东省清远市中心血站511518）

【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）21-0447-02

【摘要】目的简化改良白膜法，提高血小板(Pt)的回收率、降低浓缩血小板中WBC、RBC的残存。方法采用新工艺、器材如新型血袋、自动分浆仪、离心悬挂器等。结果改良的白膜法(改良的白膜法NBC)所制备的PC：Pt(7.8±2.9)×10加／2、RBC(O.008±O.006)×109／2、wBc(0.8±O.4)×106／2、血小板回收率(82.1±7.2)％。结论改良的白膜法简化了操作、提高了血小板的收集率，各项指标都可以达到或超过国家标准。

【关键词】改良白膜法血小板去除法／方法

近年来国内输血界工作者对手工血小板的制备方法进行过一系列研究，取得了一些成果，比较有代表性的有“新白膜法”[1]、“梯度离心结合白膜法制备浓缩血小板(VDF)”[3]。TDF大幅提高了PC中血小板的含量，但制备的浓缩血小板悬液(PC)红、白细胞的污染严重。改良白膜法(BBC)各项指标都可以达到或超过国家标准，不过操作比较烦琐。BBC被列入了国家卫生部的十年百项推广计划。笔者对改良白膜法进行了改进，研发了新改良白膜法，现报告如下。

1材料与方法

1.1仪器设备美国ThermoJ-6B大容量离心机、自动分浆仪、400ml顶底结构五联血袋、离心悬挂器，等。

l.2原料血400ml全血，采血后室温保存，于采血后6h之内完成浓缩血小板的制备工作。

1.3方法

1.3.1NBC法制备浓缩血小板NBC法制备浓缩初回收率、总血小板于2008年4—7月在本站完成。(1)重离心RCF=2560g力，T=20min，离心温度(22±2)℃。(2)分白膜将离心后的全血置于自动分浆仪上，目视挑选，凡白膜发生了凝聚及太薄者予以淘汰。白膜较好者，在分去上层贫血小板血浆、底层贫血小板红血球后，将白膜用一定量的血浆洗入悬挂袋中。(3)悬挂离心将悬挂袋用悬挂器悬挂于离杯上，轻离心：RCF=410g力，T=130S，离心温度(22±2)℃。(4)收集PC将轻离心后的富血小板血浆分入血小板保存袋中即PC1。

1.3.2BBC、PRP、BC制备浓缩血小板BBC、PRP、BC制备浓缩血小板于2005年11月～2006年9月在本站完成[1.2]。

1.3.3TDF法制备浓缩血小板TI)F法制备浓缩血小板于2006年4月在本站完成。

1.4Pt计数将PC稀释5倍后，用AutoCounter970血细胞计数仪计数。

1.5WBC计数取白细胞稀释液0.38ml，加入PC20，计数两个计数池18大方格中的白细胞数。

1.6RBC计数取生理盐水0.38IIll，加入PC20一，计数四个大方格中的红细胞数。

1.7统计学处理计量资料采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.lNBCPC的技术指标6l例NBCPC(2”)的血小板含量、红细胞残存量、白细胞残存量、初回收率、总回收率分别为：(7.8±2.9)×1010／2“、(0.008±0.006)×109／2、(0.8±0.4)×106／2、(94.7±3.4)％、(82.1±7.2)％。

2.2NBCPC与其它手工血小板技术指标对比

NBCPC与其它手工方法制备的PC相比较，回收率高于BBC、TDF、PRP、BC法(t=8.907，11.316，39.441，573，P<0.01)；NBC法Pc中的白细胞残存量低于BBC、TDF、PRP、BC法(t=10.082，23.54，14.70，23.28，P<0.01)，见表1。

表1不同手工方法制备的浓缩血小板细±胞计数及回收率

3讨论

3.1各种手工方法制备的PC技术指标比较(1)血小板回收率表1所列的五种手工血小板制备方法中，NBC法的初回收率94.7％，比BBC、PRP、BC法分别高出9.4％、54.7％、56.5％。血小板的总回收率82.1％，同BBC、TDF、PfuP、BC相比分别高出5.9％、17.1％、29.8％、33.4％。(2)白细胞、红细胞残存量BBC法的最后一步采用悬挂离心，对悬挂血袋进行优化，消除r红细胞挂现象，所制备的浓缩血小板红、白细胞残存量同原来的手工方法相比都有所下降，且低于国家标准。

3.2NBC法创新点(1)顶底结构五联血袋全血袋的底部有一管道同保养液袋相连是该血袋的特征性结构，该血袋和分浆仪配合使用，血小板的初收集率可达到94％。(2)自动分浆仪自动分浆仪的两块推板垂直、平行分布，工作时后板垂直于前板平移，可通过感应两板之间隙，自动分离红血球保留白膜。自动分浆仪简化了操作过程、降低了操作的难度、提高了血小板的收集率。(3)悬挂离心常规轻离心方法，离心过程中的沉降阻力大，所以离心时间长，往往会导致血小板过度沉降，有时还会发生红细胞挂壁的现象。NBC法采用了悬挂离心的技术，即将血液用悬挂器悬挂于离心杯中进行离心，试验证明悬挂离心可以消除红细胞挂壁现象，缩短离心时间，提高血小板回收率、降低PC中红、白细胞的残存量。(4)质量控制NBC法在制备PC的过程中引入了质量控制的概念，重离心后对白膜进行了目视挑选，白膜不好的全血不用来制备PC，因而制备的PC血小板含量更加稳定，工作量也没有增加。以前国内成份血制备工作者曾尝试着在血小板制备前测定血小板的基础值的方法提高PC血小板的含量，但这种做法工作量太大，随着无偿献血的开展愈发不容易实现了[4]。

在我国，因传统的手工PC质量不稳定、合格率低，受到了临床的怀疑，造成临床上机采血小板供不应求和无偿献血全血中宝贵的血小板资源被浪费。国内外众多的对比研究表明：从全血中制得的混合浓缩血小板与机采PC相比，输注后血小板增加和止血效果方面二者的疗效相似[5.6]。无偿献血的血液中蕴藏着丰富的血小板资源，如果我们把它提取出来并合理利用，可变废为宝；如果任其留在CRCS或全血中，输给并不需要血小板的患者，反会造成广泛的不利影响。笔者认为，怎样更好的利用无偿献血血液中丰富的血小板资源是目前血液工作者的一项紧迫任务。NBC法在这方面进行了一些有益的尝试，取得了一定的进展，同时也存在一些问题，起到了抛砖引玉的作用。

参考文献

[1]吴建军，陈文峰,谭亮南，等．一种制备浓缩血小板的新方法一富含血浆成膜去浆法．中国医师杂志，2000，2(7)：430．

[2]吴建军,陈文峰，贺许华，等．富含血浆成膜去浆法制备浓缩血小板．实用预防医学，2000，7(3)：238．

[3]李建民，沈利，张爱红，等．梯度离心结合白膜法制备血小板浓缩液．中国输血杂志，1999，4(12)：87．

[4]代金平．手工法和机器单采法浓缩血小板的制备及质控结果分析．中圆输血杂志，2003.6(4)：413．

[5]朱立苇,杨劲,郑小凡.英国血小板输注指南．检验医学网，http：／／www．1abmed．en／Artiele／shx／200607／4763．html，2006．7．

[6]陈卫红，黄芬芬．65例输注手工法浓缩血小板与单采血小板疗效探讨．中华现代临床医学杂志，2005，3(17)：101．