司莫司汀中有关物质的高效液相色谱—电喷雾电离—质谱分析

司莫司汀中有关物质的高效液相色谱—电喷雾电离—质谱分析

庞文哲韩彬张轶华

河北省药品检验研究院河北石家庄050011

摘要：目的：采用HPLC-ESI-MS法对司莫司汀中有关物质进行分析。方法：色谱柱为C18柱（250mm×4.6，5μm）流动相为甲醇—水（70：30），流速为1.0ml•min-1；TSQQuantum电喷雾质谱仪，离子源为ESI，检出模式为正离子检测，电源电压为3.0kV，离子源温度为150℃。结果：得到了样品总离子流以及选择离子流相应色谱峰的ESI—MS质谱图，初步鉴定出司莫司汀中的主要有关物质Ⅰ和Ⅱ。结论：检测结果为研究司莫司汀中有关物质来源和提高产品质量提供了科学依据。

关键词：HPLC；质谱；司莫司汀；有关物质；结构分析

AnalysisofSemustineandItsRelatedSubstancesbyHPLC—ElectrosprayIonization—MassSpectrum

PANGWen-zhe，HanBin，ZhangYi-hua

[Abstanct]Objective：TostudytherelatedsubstancesofSemustineanditsrelatedsubstances.Methods：AnalysisoftherelatedsubstancesofSemustinewascarriedoutbyhighperformanceliquidchromatography（HPLC）-Electrosprayionization（ESI）-massspectrometer（MS）.ThechromatographicseparationwasperformedonC18column（4.6mm×250mm，5μm）withmethanolandwater（70：30）asmobilephase.Theflowratewas1.0ml•min-1.ThechromatographyconditionwasZMDMicromass-massspectrometer（MS）.Ionpower：ESI；detectionmode：positive；ionizationvoltage：3.0Kv；ionpowertemperature：150℃.ResultsT：hetotalioncurrentandeachchromatographicpeakofselectedioncurrentwereobtained，andresolutionofthesemassspectrawaselucidated.TherelatedsubstancesⅠandⅡinSemustinewereidentified.Conclusion：Theresultsofdeterminationofferthescien-tificdataforstudyingtheoriginoftherelatedsubstancesofSemustineandimprovingitsquality.

[KeyWords]HPLC；MS；Semustine；relatedsubstances；Structureanalysis

司莫司汀是β-氯乙基亚硝基脲结构的药物，具有广谱的抗肿瘤性。司莫司汀不稳定，在光照和碱性条件下易发生降解，应用LC-MS分析有关物质的研究尚未见公开报道。笔者利用HPLC-MS/MS对光照和碱性破坏产生的有关物质的结构进行初步研究，并根据可能结构分析了主要有关物质的降解途径。

1仪器与试药

美国WatersAcquityUPLC/XEVOTQS型液—质联用仪；司莫司汀样品批号20140801。

2方法与结果

2.1检测条件

SBC18柱（100mm×2.1mm，2.7μm），流动相为甲醇—水（70：30），流速0.3ml•min-1；ESI源，正离子检测，电离电压3.0kV，源温度150℃，锥孔电压30V。DAD与质谱串联，两者之间的滞后时间约为0.4min，分流比为5：1。

2.2溶液制备

精密称取样品25mg，加0.5mol•L-1的氢氧化钠溶液2mL，放置10分钟，加流动相溶解成0.01mg•mL-1的溶液，得碱破坏溶液。

取样品置光照强度为2000lx光照箱内照射1h，称取适量加流动相溶解成0.01mg•mL-1的溶液，得光照破坏溶液。

2.3总离子流和一级二级质谱图

通过对样品进行扫描，获得总离子流图（见图1），从图可见有4.24min和4.82min的色谱峰，用DAD检查色谱图中各峰的纯度，均为单一物质。

图1样品总离子流图A.碱破坏；B.光照

对4.24min（杂质Ⅰ）和4.82min（杂质Ⅱ）的色谱峰进行检测，其一级和二级质谱图见图2，通过对其质谱图的解析可推知，相应成分的可能结构为分子量171的降解物（杂质Ⅰ）及分子量218.1的中间体（杂质Ⅱ）。

图2一级、二级质谱图质谱图（A和B：杂质Ⅰ；C和D：杂质Ⅱ）

2.4司莫司汀主要有关物质质谱裂解图及其解析

由图2可知，杂质Ⅰ分子离子峰m/z172.13（M+H+），杂质Ⅱ分子离子峰m/z219.10（M+H+）由此得出准确分子量杂质Ⅰ的171.13，杂质Ⅱ的为218.10。

为了推测杂质的结构式，对杂质Ⅰ和杂质Ⅱ的分子离子峰进行二级质谱分析，得到二级质谱图。杂质Ⅰ进一步轰击产生76.04的碎片，杂质Ⅱ进一步轰击产生的的碎片离子峰：123.03、114.13、80.03。推测可能的杂质结构和裂解过程见图3。结构式1为轰击后带一个质子后分子量为114的碎片，结构式2为轰击后带一个质子后分子量为80的碎片，结构式3为轰击后带一个质子后分子量为123的碎片。

图3有关物质裂解途径A.杂质Ⅰ；B.杂质Ⅱ裂解途径

3讨论

通过有关物质的质谱分析可知，司莫司汀在碱性和光照条件下降解，结构上的亚硝基对光不稳定极易脱去生成杂质Ⅱ，杂质Ⅱ失去了亚硝脲的抗肿瘤活性，因此司莫司汀在生产和贮存过程中必须严格避光，并且规定司莫司汀要远离碱性条件以免发生降解失去药效。

参考文献：

[1]中国药典2015年版.（四部）.2015：304～305.

作者简介：韩彬（1985.11），女，硕士，主管药师。