微生物检验中培养基的质量控制分析

微生物检验中培养基的质量控制分析

徐银萍

徐银萍

上海市黄浦区中西医结合医院200010

【摘要】目的：分析微生物检验中培养基的质量的控制对策。方法：在培养基的相关配制、灭菌、性能测试、无菌试验和储存等方面探讨微生物检验中培养基质量的控制对策。结果：在微生物检验中，培养基配制所用的容器选用玻璃或者不锈钢等制品较合适，采用离子交换水和蒸馏水；在对培养基进行灭菌的前后要对pH值进行测定；在自行对培养基进行配制的过程中，需严格按照标准规定，对每次的支配做好详细记录；用于配制培养基的电子天平或者酸度剂要每年都进行检定。结论：微生物检验中需实现保证对培养基各指标的严格控制，才能够保证微生物检验的有效性和准确性。

【关键词】微生物检验；质量控制；培养基；实验技术与方法

培养基是微生物实验室检测工作的基础。培养基配制和管理是否合格，直接关系到微生物的生长、分离、鉴定及检验结果。《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》中指出，实验室应建立和保持有效的适合试验范围的培养基(试剂)质量控制程序。唯有培养基的质量过关了，微生物检验结果才可能有效与准确。如下是对培养基的配制、贮存及质量控制做的总结。

1资料与方法：

1.1培养基容器的材质

配制培养基所用的容器，不宜使用铜或铁制品。每1000ml培养基含铜量超过0.3mg则细菌不易生长；含铁量超过0.14mg可妨碍细菌毒素的产生。常用的配制培养基的容器有玻璃、搪瓷或不锈钢制品。另外，玻璃器皿还必须是中性硬料玻璃，否则将影响培养基的酸碱度。对配制培养基过程中需要使用到的一切一次性无菌物品，如一次性试管、一次性平板在使用前必须按卫生部2002版《消毒技术规范》进行验收。在使用中通过观察，在使用一次性平皿尤其是倾倒SS平皿时，应在灭菌两个月后使用效果较好。对灭菌时间较短的一次性平皿，因为灭菌时间短，平皿上有残留的环氧乙烷，倒出的SS平皿颜色不是橘红色而是变成了黄色。

1.2培养基的用水

配制培养基时应使用蒸馏水或离子交换水。因自来水或井水中含有钙和镁，会与蛋白胨或牛肉浸膏中的磷酸盐发生反应，生成磷酸钙和磷酸镁等许多沉淀，严重影响了培养基的质量。

1.3培养基pH值

微生物的正常生长代谢依赖于一定范围内合适的pH值。不同微生物对pH值的需求各不一样，因此配制时需进行严格测定和校正。灭菌前后都要测定培养基的pH值，因为培养基配方中要求的pH值为高压灭菌后的值，灭菌后pH值约降0.1-0.2，所以灭菌前后对pH值的测定和校正，才能最后保证pH值符合实验要求。培养基pH值的测定应在20℃-25℃条件下进行，由于培养基成分的差异，热冷不同状态下测定的结果相差较大。对不同温度下营养肉汤和乳糖蛋白胨培养液pH值进行测定，营养肉汤，50℃时，pH值6.99，25℃时，pH值7.44。乳糖蛋白胨培养液，55℃时，pH值7.00，25℃时，pH值7.50；培养基pH值应在冷却后再测定：因为温度升高时，溶液中的离子游离数增多，pH值减小；温度降低时，离子游离数减少，pH值增大。用一般酸度计测定固体培养基的pH值，冷却至25℃左右时培养基已经凝固，其值并不准确，故应按YY／T0577—2005《营养琼脂培养基》测定pH值的方法，取6ml新鲜配制的液体培养基，加蒸馏水至40ml，灭菌后于20℃-25℃时测定。此方法比常规方法高0.08-0.29。

1.4培养基的配制

配制培养基应严格按规定进行。每次都应有包括名称、配制量、各种成分数量、生产厂家、批号、最初及最终pH值、配制日期和配制者，培养基贴标签注明生产日期和有效期等内容的详细记录，这些资料可以帮助后期进行实验失败原因分析和成功经验总结。若使用商品培养基，购买时必须选择通过质量管理体系认证的生产厂家，并索要检测报告。收到培养基时仔细检查外观、包装、产品批号，以及产品标签是否标明各种成分、用途、培养基的pH值、有效期并做好相应记录。

2结果

培养基配选用玻璃或者不锈钢制品的容器较优；水采用离子交换水和蒸馏水较优；对培养基进行灭菌前后需对pH值进行测定；配制培养基的过程中需详细记录每次的支配情况；用来配制培养基的电子天平或者酸度剂每年都需要进行检定才能使用。

3讨论

在做培养基的灭菌或无菌实验时，如果培养基的容器较大，需相应延长灭菌时间。对有特殊需求的培养基，应严格按照要求采用高压灭菌，高压后迅速冷却，避免由于长时间保存影响培养基的营养成分。对灭菌有不同要求的培养基需分别进行灭菌，并逐个做好灭菌记录，对于灭菌不合格的培养基，需要舍弃，不能进行重复灭菌。对配制好的培养基为了保证灭菌的效果需要进行无菌试验，合格后才能正式进行实验。如果培养基规模较大，可以抽样进行无菌试验，对样本进行观察，没有细菌生长的培养基才能被使用。做完无菌试验之后，在接种样本时，还要对液体培养基的颜色、是否有长菌、有没有脱水干裂等情况进行观察。要对培养基的性能进行测试和贮存，培养基上的细菌需发育良好，并能够充分体现出目标细菌的特征。在做选择培养基时，应选择已知的阳性和阴性菌进行接种培养，保证应有的一些生化反应的发生。相对于商品培养基，没有开封的培养基的保质期应该在两到三年内，已经开封的只有六个月，商品培养基要贮存在阴凉干燥并无强光直射的环境下，对过期的培养基应当舍弃，成品培养基不应放在冰箱里贮存，并保证在保质期内使用。灭菌之后的培养基根据种类的不同，规模的大小，实验的要求等的不同其保质期也不同，不能一概而论。灭菌后不能立即实验，要在避光干燥的环境下保存一段时间。微生物检验工作的基础就是保证培养基的质量，每年应请专业机构对配制培养基所有的酸度计和电子天平进行严格检定，对培养箱、高压灭菌器和无菌室紫外线的等进行定期的检查，防止由于疏忽而导致的培养基质量问题，使微生物的检验偏离了科学性和客观性。培养基的质量直接影响到微生物的检验结果，因此首先要保证培养基质量，避免出现检验误差。微生物检验中需保证对培养基各指标的严格控制，才能够保证微生物检验的有效性和准确性。

参考文献

[1]中国合格评定国家认可委员会.检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明[S].北京，CNAS—CL09，2006：1.

[2]王钦升，周正明。高屹.实用医学培养基手册[M].北京：人民军医出版社.1999：48.

[3]中华人民共和国卫生部.消毒技术规范[S].北京，2002：96—99.

[4]陈润生，刘华荣，林杰，等.影响培养基pH值稳定因素的探讨[J].海峡预防医学杂志，2002，8(1)：58—59.

[5]国家食品药品监督管理局.营养琼脂培养基[S].北京。YY／T0577—2()05：2.

[6]中华人民共和国卫生部.商业性微生物培养基质量检验规程[S].北京，WS／T232—2002：1—5.